SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒可提高cDNA产量，提升定量RT-PCR分析的动态范围。 这意味着无论您的目的基因丰度如何，您都能获得相对应的cDNA相对含量。

立即订购

极佳的线性度

希望 RT 反应能得到一致的结果吗？ 希望在最宽泛的起始样本量范围下都得到前所未有的线性关系吗？ 采用SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒，您就可以获得：

  • 对于基于探针的两步法定量RT-PCR，可在20 µl反应中，使用1 pg到2.5 µg总RNA获得线性cDNA产量
  • 对于SYBR GreenER™两步法定量RT-PCR，可在20 µl反应中，使用1 pg到100 µg总RNA获得线性cDNA产量

如果需要更多cDNA，并维持相同的反应线性度，则可以将反应体积扩大至100 µl。

在 RT 步骤中得到优异的线性关系意味着：

  • 无论基因丰度如何，产生的cDNA qPCR模板都具有相同的相对表示结果
  • 在标准化过程中，即便起始材料的丰度有差异，亦可获得目的基因和参照基因cDNA合成的线性结果
  • 降低这种常见的偏差，提高qRT-PCR数据的准确度

在宽广的起始RNA线性范围内获得可靠的性能

图1. SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒在宽广的起始RNA线性范围内都具有可靠的性能。 在ABI PRISM 7900HT实时荧光定量PCR系统中，采用SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒对连续稀释的HeLa细胞总RNA进行逆转录，随后采用人β-actin TaqMan分析试剂盒 (Applied Biosystems) 和通用型EXPRESS qPCR SuperMix (Invitrogen) 进行三重qPCR反应。 标准曲线 (A) 表明，即使超出了建议的 1 pg 至 2.5 μg 的最适起始用量范围，该试剂盒可在采用高达 5 μg 的 RNA 样品进行实验时其相关系数达到 0.996。 扩增曲线 (B) 显示，在各种稀释条件下，三次重复的结果均可排列在近似的曲线上，表明了SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒在宽广的起始RNA线性范围内均具有稳定的性能。 用参比基因来标化低丰度基因，无需担心不同的 RNA 起始用量可能导致的反转录效率的偏差。

产量提高且qPCR抑制减小

SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒可以生成更高产量的cDNA，且对下游qPCR的抑制减小。 这意味着您能：

  • 保存cDNA以备将来研究之用
  • 在qPCR中使用更多的cDNA，提高灵敏度达4倍，且不必担心反应受到抑制

此优势是通过很好地平衡了 SuperScript III RT、RNaseOUT™ RNase 抑制剂、和加入的专有辅助蛋白而获得的。当靶标为低拷贝时，qRT-PCR 试剂具有的优势则更为明显。

 图2. SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒可减少对于实时荧光定量PCR应用中PCR反应的抑制，从而提高了分析灵敏度。 通过32P-dCTP掺入实验分析cDNA产量。 使用相同用量的起始 HeLa RNA，比较三种不同试剂盒的 cDNA 产量： 用于qRT-PCR的Invitrogen SuperScript III第一链合成SuperMix、SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒和MMLV。 VILO™试剂盒的cDNA合成产量比另一种Invitrogen试剂盒高3至4倍，比MMLV高8至9倍。

 图3. SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒的产量较同类产品更高。 在ABI PRISM 7900HT实时荧光定量PCR系统中，采用SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒 (蓝色) 或Mulv同类试剂盒 (绿色) 对HeLa细胞总RNA (2 μg和1 ng) 进行逆转录，随后采用人β-actin TaqMan分析 (Applied Biosystems) 和通用型EXPRESS qPCR SuperMix (Invitrogen) 进行三重qPCR反应。 无论是起始RNA量较多还是较少时，SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒的性能均优于Mulv同类试剂盒至少2个循环，表示其灵敏度增加4倍。

检测的灵活性

无论用什么检测方法，都能使用SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒获得最灵敏的qPCR性能。 使用任意一种基于SYBR的实时荧光定量PCR检测方法，相比于其他可用试剂盒，有望将灵敏度增加多达8倍。 SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒既可作为单独的产品，也可作为新型EXPRESS系列qPCR和qRT-PCR试剂的一个组分，在快速实时荧光定量PCR仪器上使用。

图4. SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒可与SYBR Green或基于荧光探针/引物的qPCR检测试剂配合使用。 A. 采用Invitrogen的SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒 (蓝色)、Bio-Rad的iScript™ cDNA合成试剂盒 (黄色)、Qiagen的QuantiTect逆转录试剂盒 (绿色) 和Stratagene的AffinityScript QPCR cDNA合成试剂盒 (粉色) 对等量的HeLa细胞总RNA (10 pg) 进行逆转录。 随后采用Invitrogen SYBR GreenER™ qPCR SuperMix和hsp70基因特异性引物，在ABI PRISM 7900HT实时荧光定量PCR系统上对生成的cDNA进行三重扩增。 SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒与SYBR Green检测同时使用时，灵敏度高于其他试剂盒，表现为至少可以提前2个循环达到Ct值。 B. 采用与A中相同的试剂盒对等量的HeLa细胞总RNA (1 μg) 进行逆转录。随后采用EXPRESS qPCR SuperMix和预混合的ROX及TfR基因特异性TaqMan分析 (Applied Biosystems)，在ABI PRISM 7900HT实时荧光定量PCR系统上对获得的cDNA进行三重扩增。 SuperScript VILO™ cDNA合成试剂盒与基于探针的检测同时使用时，灵敏度高于其他试剂盒，表现为至少可以提前2个循环达到Ct值。