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湿式转印 | 半干式转印 | 干式转印 | ||
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小型印迹模块 (Mini Blot Module) | XCell II Blot Module 小型转印模块 | SureLock Tandem 中型转印模块 | Power Blotter 系统 | iBlot 3 Western Blot 转印系统 |
通量: 每个印迹模块可转 1 块小型凝胶;每个电泳槽可容纳 1-2 个印迹模块 | 通量: 最多 2 个小型印迹 | 通量: 每个印迹模块可转 1 块中型凝胶;每个电泳槽可容纳 1-2 个印迹模块 | 通量: 1-4 块小型凝胶或 1–2 块中型凝胶 | 通量: 1-4 块小型凝胶或 1–2 块中型凝胶 |
转印时间:60 min | 转印时间: 60-120 min | 转印时间: 30 min | 转印时间: 5-10 min | 转印时间: 短短 3 min |
转印区域: 9 x 9 cm | 转印区域: 9 x 9 cm | 转印区域: 9.2 x 14.4 cm | 转印区域: 10 x 18 cm 或 21 x 22.5 cm | 转印区域: 8.5 x 13.5 cm |
转印区域:转印缓冲液用量: 每个印迹模块 220 mL | 转印缓冲液用量: 200 mL | 转印缓冲液用量: 每个印迹模块 300 mL | 转印缓冲液用量: 预剪裁膜&滤纸:50-100 mL; 选择预组装转印膜组:无需缓冲液 | 转印缓冲液用量: 无需缓冲液 |
电源:External(外标) | 电源:External(外标) | 电源: External(外标) | 电源:内部 | 电源:内部 |
所需装置: Mini Gel Tank 小型垂直电泳槽:可容纳最多 2 个小型印迹模块 | 所需装置: XCell SureLock Mini-Cell:可容纳最多 2 个印迹模块 | 所需装置: SureLock Tandem 中型凝胶电泳槽:可容纳最多 2 个印迹模块 | ––– | ––– |
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湿式转印 | 半干式转印 | 干式转印 | |
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设置 | 手动操作,需要自行配制转印缓冲液(约 15-20 min) | 预组装转印膜组(约 5-10 min),预剪裁膜和滤纸(约 10-15 min) | 约 5 min |
清理 | 每次使用后应彻底清理,包括处理有害的甲醇废液 | 每次使用后需要进行简单清理 | 极少扩展使用 |
转印时间 | 30-120 min | 7-10 min | 短短 3 min |
通量 | +++ | +++ | +++ |
性能 | +++ | ++ | +++ |
易于使用 | ++ | +++ | +++ |
转印缓冲液要求 | 需要甲醇 | 使用无甲醇转印缓冲液,预组装膜组不需要缓冲液 | 无需缓冲液 |
特别注意事项 | 时间较长的转印可能需要冷却 | 可使用多个系统,包括 Towbin 缓冲液 | 需要预组装的转印膜组 |
从凝胶到印迹膜,有效可靠的蛋白质转印是成功进行 Western Blot 实验的基础。结果的准确性取决于 Western Blotting 方法的转印效率。传统湿式转印法效率高,但费时费力。半干式印迹简便、省时,可以灵活使用多种类型的缓冲液系统或无缓冲液的预组装膜组。但是,半干式转印系统转印大分子量蛋白质 (>300 kDa) 的效率较低。干式电印迹无需添加缓冲液,所以既可提供高品质转印,又快速便捷。
进行湿式转印时,首先在转印缓冲液中平衡凝胶。然后将凝胶放入“转印三明治”(滤纸-凝胶-膜-滤纸)中,加上衬垫,并用支撑格栅压在一起。将支撑好的转印三明治垂直放置在不锈钢/铂丝电极之间的槽中,并充满转印缓冲液。
可以使用标准电场选项,在恒定电流(0.1 至 1 A)或电压(5 至 30 V)下进行多块凝胶的电转印,耗时从 1 小时到整夜。通常使用冰袋或者冰块在 4℃ 下进行转印,以减少产生的热量。对于单块凝胶,可以使用高电场选项,使转印时间缩短至 30 分钟,但需要使用高电压(200 V 以内)或高电流(1.6 A 以内)以及冷却系统来消散产生的巨大热量。
对于 14-116 kDa 之间的蛋白质,转印效率可达 80-100%。转印效率随转印时间的增加而提高。但随时间的增加,存在蛋白质膜过度转印(穿过膜)的风险,尤其当使用较大孔径 (0.45 µm) 的膜处理分子量较低 (<30 kDa) 的蛋白质时。
对于半干式蛋白质转印,将转印三明治水平放置在半干式转印装置中的两个电极板之间。对于这种半干式转印,将凝胶在转印缓冲液中预先平衡至关重要。为了尽可能使流过凝胶的电流最大而不是凝胶周围的电流最大,转印过程中可用的缓冲液量应限制为转印三明治使用量,因此,如果将超厚滤纸(约 3 mm 厚)和膜也充分浸入缓冲液中,将有助于检测转印进行。另一关键点是将滤纸和膜剪切成与凝胶大小一致。
1-4 块凝胶可以快速转印到膜上。转印缓冲液可能包含甲醇,但不应使用其他有机溶剂,包括芳烃、氯代烃和丙酮,以免损坏半干式印迹装置。在恒定电流(0.1 至约 0.4 A)或电压(10 至 25 V)下进行电转印 10 至 60 分钟。建议使用无甲醇转印缓冲液,将转印时间缩短至 7 至 10 分钟。对于 14 至 116 kDa 之间的蛋白质,可以实现 60% 至 80% 的转印效率,转印更高分子量的蛋白质需要更长的转印时间。
半干式电印迹转印。Invitrogen Power Blotter 专为在 5 至 10 分钟内将 10-300 kDa 蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上快速半干转印至硝酸纤维素或 PVDF 膜而设计。Power Blotter 具有经过优化的集成电源,可与常用的预制或自制凝胶 (SDS-PAGE) 和硝酸纤维素或 PVDF 膜配合使用,实现一致、高效的蛋白质转印。
干式印迹方法使用专门的含有创新成分的“转印三明治”,而不使用传统转印缓冲液。使用含缓冲液的独特凝胶基质(转印模组)代替缓冲液或浸湿的滤纸。凝胶基质中的高离子密度有助于实现蛋白质快速转印。在印迹过程中,铜阳极不会因水电解而产生氧气,降低了印迹变形。常规蛋白质转印技术(包括湿式和半干式)使用会产生氧气的惰性电极。通常,通过缩短电极之间的距离、施加高场强和大电流来缩短转印时间。
干式蛋白转印。Invitrogen iBlot 3 Western Blot 转印系统无需缓冲液即可实现快速 western 转印。该系统可在短短 3 分钟内有效地从丙烯酰胺凝胶上转印蛋白质,并且与 PVDF 和硝酸纤维素膜兼容。iBlot 3 系统在较短时间内即可实现与传统湿式转印法相当或更好的性能。
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小型印迹模块 (Mini Blot Module) | XCell II Blot Module 小型转印模块 | SureLock Tandem 中型转印模块 | Power Blotter 系统 | iBlot 3 Western Blot 转印系统 |
通量: 每个印迹模块可转 1 块小型凝胶;每个电泳槽可容纳 1-2 个印迹模块 | 通量: 最多 2 个小型印迹 | 通量: 每个印迹模块可转 1 块中型凝胶;每个电泳槽可容纳 1-2 个印迹模块 | 通量: 1-4 块小型凝胶或 1–2 块中型凝胶 | 通量: 1-4 块小型凝胶或 1–2 块中型凝胶 |
转印时间:60 min | 转印时间: 60-120 min | 转印时间: 30 min | 转印时间: 5-10 min | 转印时间: 短短 3 min |
转印区域: 9 x 9 cm | 转印区域: 9 x 9 cm | 转印区域: 9.2 x 14.4 cm | 转印区域: 10 x 18 cm 或 21 x 22.5 cm | 转印区域: 8.5 x 13.5 cm |
转印区域:转印缓冲液用量: 每个印迹模块 220 mL | 转印缓冲液用量: 200 mL | 转印缓冲液用量: 每个印迹模块 300 mL | 转印缓冲液用量: 预剪裁膜&滤纸:50-100 mL; 选择预组装转印膜组:无需缓冲液 | 转印缓冲液用量: 无需缓冲液 |
电源:External(外标) | 电源:External(外标) | 电源: External(外标) | 电源:内部 | 电源:内部 |
所需装置: Mini Gel Tank 小型垂直电泳槽:可容纳最多 2 个小型印迹模块 | 所需装置: XCell SureLock Mini-Cell:可容纳最多 2 个印迹模块 | 所需装置: SureLock Tandem 中型凝胶电泳槽:可容纳最多 2 个印迹模块 | ––– | ––– |
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设置 | 手动操作,需要自行配制转印缓冲液(约 15-20 min) | 预组装转印膜组(约 5-10 min),预剪裁膜和滤纸(约 10-15 min) | 约 5 min |
清理 | 每次使用后应彻底清理,包括处理有害的甲醇废液 | 每次使用后需要进行简单清理 | 极少扩展使用 |
转印时间 | 30-120 min | 7-10 min | 短短 3 min |
通量 | +++ | +++ | +++ |
性能 | +++ | ++ | +++ |
易于使用 | ++ | +++ | +++ |
转印缓冲液要求 | 需要甲醇 | 使用无甲醇转印缓冲液,预组装膜组不需要缓冲液 | 无需缓冲液 |
特别注意事项 | 时间较长的转印可能需要冷却 | 可使用多个系统,包括 Towbin 缓冲液 | 需要预组装的转印膜组 |
从凝胶到印迹膜,有效可靠的蛋白质转印是成功进行 Western Blot 实验的基础。结果的准确性取决于 Western Blotting 方法的转印效率。传统湿式转印法效率高,但费时费力。半干式印迹简便、省时,可以灵活使用多种类型的缓冲液系统或无缓冲液的预组装膜组。但是,半干式转印系统转印大分子量蛋白质 (>300 kDa) 的效率较低。干式电印迹无需添加缓冲液,所以既可提供高品质转印,又快速便捷。
进行湿式转印时,首先在转印缓冲液中平衡凝胶。然后将凝胶放入“转印三明治”(滤纸-凝胶-膜-滤纸)中,加上衬垫,并用支撑格栅压在一起。将支撑好的转印三明治垂直放置在不锈钢/铂丝电极之间的槽中,并充满转印缓冲液。
可以使用标准电场选项,在恒定电流(0.1 至 1 A)或电压(5 至 30 V)下进行多块凝胶的电转印,耗时从 1 小时到整夜。通常使用冰袋或者冰块在 4℃ 下进行转印,以减少产生的热量。对于单块凝胶,可以使用高电场选项,使转印时间缩短至 30 分钟,但需要使用高电压(200 V 以内)或高电流(1.6 A 以内)以及冷却系统来消散产生的巨大热量。
对于 14-116 kDa 之间的蛋白质,转印效率可达 80-100%。转印效率随转印时间的增加而提高。但随时间的增加,存在蛋白质膜过度转印(穿过膜)的风险,尤其当使用较大孔径 (0.45 µm) 的膜处理分子量较低 (<30 kDa) 的蛋白质时。
对于半干式蛋白质转印,将转印三明治水平放置在半干式转印装置中的两个电极板之间。对于这种半干式转印,将凝胶在转印缓冲液中预先平衡至关重要。为了尽可能使流过凝胶的电流最大而不是凝胶周围的电流最大,转印过程中可用的缓冲液量应限制为转印三明治使用量,因此,如果将超厚滤纸(约 3 mm 厚)和膜也充分浸入缓冲液中,将有助于检测转印进行。另一关键点是将滤纸和膜剪切成与凝胶大小一致。
1-4 块凝胶可以快速转印到膜上。转印缓冲液可能包含甲醇,但不应使用其他有机溶剂,包括芳烃、氯代烃和丙酮,以免损坏半干式印迹装置。在恒定电流(0.1 至约 0.4 A)或电压(10 至 25 V)下进行电转印 10 至 60 分钟。建议使用无甲醇转印缓冲液,将转印时间缩短至 7 至 10 分钟。对于 14 至 116 kDa 之间的蛋白质,可以实现 60% 至 80% 的转印效率,转印更高分子量的蛋白质需要更长的转印时间。
半干式电印迹转印。Invitrogen Power Blotter 专为在 5 至 10 分钟内将 10-300 kDa 蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上快速半干转印至硝酸纤维素或 PVDF 膜而设计。Power Blotter 具有经过优化的集成电源,可与常用的预制或自制凝胶 (SDS-PAGE) 和硝酸纤维素或 PVDF 膜配合使用,实现一致、高效的蛋白质转印。
干式印迹方法使用专门的含有创新成分的“转印三明治”,而不使用传统转印缓冲液。使用含缓冲液的独特凝胶基质(转印模组)代替缓冲液或浸湿的滤纸。凝胶基质中的高离子密度有助于实现蛋白质快速转印。在印迹过程中,铜阳极不会因水电解而产生氧气,降低了印迹变形。常规蛋白质转印技术(包括湿式和半干式)使用会产生氧气的惰性电极。通常,通过缩短电极之间的距离、施加高场强和大电流来缩短转印时间。
干式蛋白转印。Invitrogen iBlot 3 Western Blot 转印系统无需缓冲液即可实现快速 western 转印。该系统可在短短 3 分钟内有效地从丙烯酰胺凝胶上转印蛋白质,并且与 PVDF 和硝酸纤维素膜兼容。iBlot 3 系统在较短时间内即可实现与传统湿式转印法相当或更好的性能。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。