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Western blot 或蛋白质免疫印迹是一种常规蛋白分析技术。抗体-抗原相互作用的特异性实现了复杂蛋白质混合物中的靶蛋白识别。在这里,您可以获取常用的蛋白质电泳、western blot 缓冲液和保存液的详细配方,以及适用于化学发光和荧光法检测的通用蛋白质印迹方案,帮助您顺利完成实验。
如果这些实验方案不适用于您的目的蛋白,推荐使用我们的 Western Blot 实验方案选择工具来定制化更具针对性的 western blot 实验方案,并一键下载整套操作指南。
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Thermo Scientific 化学发光底物的推荐一抗稀释范围。
Pierce ECL | SuperSignal West Pico Plus | SuperSignal West Dura | SuperSignal West Femto | SuperSignal West Atto | |
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推荐一抗稀释范围 | 1:1,000 (0.2–10 µg/mL) | 1:1,000 (0.2–1.0 µg/mL) | 1:5,000 (0.02–1.0 µg/mL) | 1:5,000 (0.01-0.2 µg/mL) | 1:5,000 (0.2–1.0 µg/mL) |
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Thermo Scientific 化学发光底物的推荐二抗稀释范围。
Pierce ECL | SuperSignal West Pico Plus | SuperSignal West Dura | SuperSignal West Femto | SuperSignal West Atto | |
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推荐二抗稀释范围 | 1:1,000 - 1:15,000 (0.07–1.0 µg/mL) | 1:20,000 - 1:100,000 (10–50 ng/mL) | 1:50,000 - 1:250,000 (4–20 ng/mL) | 1:100,000 - 1:500,000 (2–10 ng/mL) | 1:100,000 - 1:250,000 (4–10 ng/mL) |
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1 M Tris-HCl, pH 7.6 (100 mL)
Tris Base | 12.11 g |
去离子水 | 80 mL |
用 HCl 调节 pH 值至 7.6 | |
去离子水 | 至 100 mL |
0.5 M Tris-HCl, pH 6.8 (100 mL)
Tris Base | 6.06 g |
去离子水 | 60 mL |
用 HCl 调节 pH 值至 6.8 | |
去离子水 | 至 100 mL |
10% SDS(10 mL)
SDS | 1.00 g |
去离子水 | 至 10 mL |
1.0% 溴酚蓝(10 mL)
溴酚蓝 | 100 mg |
去离子水 | 至 10 mL |
10X Tris 缓冲液(TBS)
Tris Base | 24 g |
NaCl | 88 g |
去离子水 | 900 mL |
用 HCl 调j节 pH 值至 7.6 | |
去离子水 | 至 1000 mL |
10X 磷酸盐缓冲液(PBS)
NaCl | 80 g |
KCl | 2 g |
Na2HPO4 | 14.4 g |
NaH2PO4 | 2.4 g |
去离子水 | 900 mL |
用 NaOH 调节 pH 值至 7.0 | |
去离子水 | 至 1000 mL |
RIPA 裂解液:25 mM Tris-HCl pH 7.6, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 1% 脱氧胆酸钠, 0.1% SDS (100 mL)
NaCl | 0.88 g |
NP-40 | 1 g |
脱氧胆酸钠 | 1 g |
10% SDS | 1 mL |
1 M Tris-HCl, pH 7.6 | 2.5 mL |
去离子水 | 至 100 mL |
蛋白酶抑制剂片剂(货号 A32965) | 2 片 |
SDS 上样缓冲液(Laemmli 缓冲液):63 mM Tris HCl、10% 丙三醇、2% SDS、0.0025% 溴酚蓝,pH 6.8(10 mL)
2X 储存液的配方:
0.5 M Tris-HCl pH 6.8 | 2.5 mL |
甘油 | 2 mL |
10% (w/v) SDS | 4 mL |
0.1%(w/v) )溴酚蓝 | 0.5 mL |
去离子水 | 至 10 mL |
该缓冲液可在 4℃ 下稳定保存 6 个月。
LDS 上样缓冲液:106 mM Tris HCl、141 mM Tris Base、2% LDS、10% 丙三醇、0.51 mM EDTA、0.22 mM SERVA Blue G250、0.175 mM 酚红,pH 8.5。
4X 储存液的配方:
Tris HCl | 0.666 g |
Tris Base | 0.682 g |
LDS | 0.800 g |
EDTA | 0.006 g |
甘油 | 4 g |
SERVA Blue G250(1% 溶液) | 0.75 mL |
酚红(1% 溶液) | 0.25 mL |
去离子水 | 至 10 mL |
该缓冲液可在 4℃ 下稳定保存 6 个月。切勿使用酸或碱调整 pH 值。
Tris-甘氨酸 SDS 电泳缓冲液:25 mM Tris Base、192 mM 甘氨酸、0.1% SDS、pH 8.3。
10X 储存液的配方:
Tris Base | 29 g |
甘氨酸 | 144 g |
SDS | 10 g |
去离子水 | 至 1000 mL |
Tris-甘氨酸非变性电泳缓冲液:25 mM Tris Base、192 mM 甘氨酸,pH 8.3。
10X 储存液的配方:
Tris Base | 29 g |
甘氨酸 | 144 g |
去离子水 | 至 1000 mL |
MOPS SDS 电泳缓冲液:50 mM MOPS、50 mM Tris Base、0.1% SDS、1 mM EDTA,pH 7.7。
20X 储存液的配方:
MOPS | 104.6 g |
Tris Base | 60.6 g |
SDS | 10 g |
EDTA | 3.0 g |
去离子水 | 至 500 mL |
切勿使用酸或碱调节 pH 值。
MES SDS 电泳缓冲液:50 mM MES、50 mM Tris Base、0.1% SDS、1 mM EDTA,pH 7.3。
20X 储存液的配方:
MES | 97.6 g |
Tris Base | 60.6 g |
SDS | 10 g |
EDTA | 3.0 g |
去离子水 | 至 500 mL |
切勿使用酸或碱调节 pH 值。
Tricine SDS 电泳缓冲液:100 mM Tris Base、100 mM Tricine、0.1% SDS、pH 8.3。
10X 储存液的配方:
Tris Base | 121 g |
Tricine | 179 g |
SDS | 10 g |
去离子水 | 至 1000 mL |
该缓冲液可在室温下稳定保存 6 个月。切勿使用酸或碱调节 pH 值。
Tris-甘氨酸转印缓冲液:12 mM Tris Base、96 mM 甘氨酸,pH 8.3。
25X 储存液的配方:
Tris Base | 18.2 g |
甘氨酸 | 90 g |
去离子水 | 至 500 mL |
Bis-Tris 转印缓冲液:25 mM Bicine、25 mM Bis-Tris、1 mM EDTA,pH 7.2。
20X 储存液的配方:
Bicine | 10.2 g |
Bis-Tris | 13.1 g |
EDTA | 0.75 g |
去离子水 | 125 mL |
该缓冲液可在 4℃ 下保持稳定 6 个月。
切勿使用酸或碱调节 pH 值。
含 Tween 20 的 Tris 缓冲液(TBST)
10X TBS | 100 mL |
Tween 20 | 1 mL |
去离子水 | 至 1000 mL |
含 Tween 20 的磷酸盐缓冲液(PBST)
10X TBS | 100 mL |
Tween 20 | 1 mL |
去离子水 | 至 1000 mL |
5% 脱脂牛奶
脱脂奶粉 | 2.5 g |
TBST 或 PBST | 不超过 50 mL |
过滤以去除未溶颗粒物 |
3% BSA
BSA | 1.5 g |
TBST 或 PBST | 不超过 50 mL |
过滤以去除未溶颗粒物 |
抗体剥离液
0.5 M Tris HCl, pH 6.8 | 12.5 mL |
10% SDS | 20 mL |
2-巯基乙醇 | 0.8 mL |
去离子水 | 67.5 mL |
根据下表制备分离胶。表中所列的体积可制备一块凝胶。根据需要制备的凝胶数量,成比例放大体积。
聚丙烯酰胺浓度% | |||||||||
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溶液 | 4% | 6% | 8% | 10% | 12% | 14% | 16% | 18% | 20% |
SureCast 预混丙烯酰胺(40%) | 0.8 mL | 1.2 mL | 1.6 mL | 2.0 mL | 2.4 mL | 2.8 mL | 3.3 mL | 3.6 mL | 4.0 mL |
SureCast 分离胶缓冲液 | 2.0 mL | 2.0 mL | 2.0 mL | 2.0 mL | 2.0 mL | 2.0 mL | 2.0 mL | 2.0 mL | 2.0 mL |
蒸馏水 | 5.1 mL | 4.7 mL | 4.3 mL | 3.9 mL | 3.5 mL | 3.1 mL | 2.7 mL | 2.3 mL | 1.9 mL |
10% SureCast APS | 80 µL | 80 µL | 80 µL | 80 µL | 80 µL | 80 µL | 80 µL | 80 µL | 80 µL |
SureCast TEMED* | 8 µL | 8 µL | 8 µL | 8 µL | 8 µL | 8 µL | 8 µL | 8 µL | 8 µL |
*最后加入,并在倒胶之前充分混合
根据下表制备浓缩胶。表中所列的体积可制备一块凝胶。根据需要制备的凝胶数量,成比例放大体积。备注:溶液不需要脱气。
溶液 | 4% |
---|---|
SureCast 预混丙烯酰胺(40%) | 0.30 mL |
SureCast 浓缩胶缓冲液 | 0.75 mL |
蒸馏水 | 1.92 mL |
10% SureCast APS | 30 µL |
SureCast TEMED* | 3 µL |
*最后加入,并在倒胶之前充分混合
制备以下储存液:所有溶液均可室温保存。
50% 丙烯酰胺/BIS (29:1)
在避光玻璃瓶中可稳定保存长达两个月。 | 分离胶缓冲液(1 M Tris-HCl,pH 8.8)
| 浓缩胶缓冲液(0.375M Tris HCl,pH 6.8)
| 催化剂-过硫酸铵(使用当天新鲜配制)
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10% SDS
| 50% 蔗糖
|
以下配方可制备约 25 mL 分离胶,足以用于灌制四块 1.0-mm 厚的小型凝胶 。根据需要制备的凝胶数量,成比例放大体积。
溶液 | 6%凝胶 | 8%凝胶 | 10%凝胶 | 12%凝胶 | 14%凝胶 | 16%凝胶 | 18%凝胶 | 20%凝胶 |
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50% 丙烯酰胺/BIS | 3.0 mL | 4.0 mL | 5.0 mL | 6.0 mL | 7.0 mL | 8.0 mL | 9.0 mL | 10.0 mL |
分离胶缓冲液 | 9.4 mL | 9.4 mL | 9.4 mL | 9.4 mL | 9.4 mL | 9.4 mL | 9.4 mL | 9.4 mL |
10% SDS | 250 µL | 250 µL | 250 µL | 250 µL | 250 µL | 250 µL | 250 µL | 250 µL |
50% 蔗糖* | 4.0 mL | 4.0 mL | 4.0 mL | 4.0 mL | 4.0 mL | 4.0 mL | 4.0 mL | 4.0 mL |
水 | 7.8 mL | 6.8 mL | 5.8 mL | 4.8 mL | 3.7 mL | 2.7 mL | 1.7 mL | 750 µL |
TEMED** | 6.25 µL | 6.25 µL | 6.25 µL | 6.25 µL | 6.25 µL | 6.25 µL | 6.25 µL | 6.25 µL |
催化剂** | 625 µL | 625 µL | 625 µL | 625 µL | 625 µL | 625 µL | 625 µL | 625 µL |
*可选,但建议使用,因为它有助于在分离胶和覆盖层之间形成理想的界面。如果忽略不用,则增加水量以补齐蔗糖溶液体积(基于上表数据增加 4.0 mL 水量)。
**最后加入,并在倒胶之前充分混合。
以下配方可制备 4% 浓缩胶(12.5 mL)
溶液 | 4% |
---|---|
50% 丙烯酰胺/BIS | 1.0 mL |
浓缩胶缓冲液 | 4.2 mL |
10% SDS | 125 µL |
水 | 6.3 mL |
TEMED* | 5.0 µL |
催化剂* | 1.0 mL |
*最后加入,并在倒胶之前充分混合。
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Thermo Scientific 化学发光底物的推荐一抗稀释范围。
Pierce ECL | SuperSignal West Pico Plus | SuperSignal West Dura | SuperSignal West Femto | SuperSignal West Atto | |
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推荐一抗稀释范围 | 1:1,000 (0.2–10 µg/mL) | 1:1,000 (0.2–1.0 µg/mL) | 1:5,000 (0.02–1.0 µg/mL) | 1:5,000 (0.01-0.2 µg/mL) | 1:5,000 (0.2–1.0 µg/mL) |
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Thermo Scientific 化学发光底物的推荐二抗稀释范围。
Pierce ECL | SuperSignal West Pico Plus | SuperSignal West Dura | SuperSignal West Femto | SuperSignal West Atto | |
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推荐二抗稀释范围 | 1:1,000 - 1:15,000 (0.07–1.0 µg/mL) | 1:20,000 - 1:100,000 (10–50 ng/mL) | 1:50,000 - 1:250,000 (4–20 ng/mL) | 1:100,000 - 1:500,000 (2–10 ng/mL) | 1:100,000 - 1:250,000 (4–10 ng/mL) |
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1 M Tris-HCl, pH 7.6 (100 mL)
Tris Base | 12.11 g |
去离子水 | 80 mL |
用 HCl 调节 pH 值至 7.6 | |
去离子水 | 至 100 mL |
0.5 M Tris-HCl, pH 6.8 (100 mL)
Tris Base | 6.06 g |
去离子水 | 60 mL |
用 HCl 调节 pH 值至 6.8 | |
去离子水 | 至 100 mL |
10% SDS(10 mL)
SDS | 1.00 g |
去离子水 | 至 10 mL |
1.0% 溴酚蓝(10 mL)
溴酚蓝 | 100 mg |
去离子水 | 至 10 mL |
10X Tris 缓冲液(TBS)
Tris Base | 24 g |
NaCl | 88 g |
去离子水 | 900 mL |
用 HCl 调j节 pH 值至 7.6 | |
去离子水 | 至 1000 mL |
10X 磷酸盐缓冲液(PBS)
NaCl | 80 g |
KCl | 2 g |
Na2HPO4 | 14.4 g |
NaH2PO4 | 2.4 g |
去离子水 | 900 mL |
用 NaOH 调节 pH 值至 7.0 | |
去离子水 | 至 1000 mL |
RIPA 裂解液:25 mM Tris-HCl pH 7.6, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 1% 脱氧胆酸钠, 0.1% SDS (100 mL)
NaCl | 0.88 g |
NP-40 | 1 g |
脱氧胆酸钠 | 1 g |
10% SDS | 1 mL |
1 M Tris-HCl, pH 7.6 | 2.5 mL |
去离子水 | 至 100 mL |
蛋白酶抑制剂片剂(货号 A32965) | 2 片 |
SDS 上样缓冲液(Laemmli 缓冲液):63 mM Tris HCl、10% 丙三醇、2% SDS、0.0025% 溴酚蓝,pH 6.8(10 mL)
2X 储存液的配方:
0.5 M Tris-HCl pH 6.8 | 2.5 mL |
甘油 | 2 mL |
10% (w/v) SDS | 4 mL |
0.1%(w/v) )溴酚蓝 | 0.5 mL |
去离子水 | 至 10 mL |
该缓冲液可在 4℃ 下稳定保存 6 个月。
LDS 上样缓冲液:106 mM Tris HCl、141 mM Tris Base、2% LDS、10% 丙三醇、0.51 mM EDTA、0.22 mM SERVA Blue G250、0.175 mM 酚红,pH 8.5。
4X 储存液的配方:
Tris HCl | 0.666 g |
Tris Base | 0.682 g |
LDS | 0.800 g |
EDTA | 0.006 g |
甘油 | 4 g |
SERVA Blue G250(1% 溶液) | 0.75 mL |
酚红(1% 溶液) | 0.25 mL |
去离子水 | 至 10 mL |
该缓冲液可在 4℃ 下稳定保存 6 个月。切勿使用酸或碱调整 pH 值。
Tris-甘氨酸 SDS 电泳缓冲液:25 mM Tris Base、192 mM 甘氨酸、0.1% SDS、pH 8.3。
10X 储存液的配方:
Tris Base | 29 g |
甘氨酸 | 144 g |
SDS | 10 g |
去离子水 | 至 1000 mL |
Tris-甘氨酸非变性电泳缓冲液:25 mM Tris Base、192 mM 甘氨酸,pH 8.3。
10X 储存液的配方:
Tris Base | 29 g |
甘氨酸 | 144 g |
去离子水 | 至 1000 mL |
MOPS SDS 电泳缓冲液:50 mM MOPS、50 mM Tris Base、0.1% SDS、1 mM EDTA,pH 7.7。
20X 储存液的配方:
MOPS | 104.6 g |
Tris Base | 60.6 g |
SDS | 10 g |
EDTA | 3.0 g |
去离子水 | 至 500 mL |
切勿使用酸或碱调节 pH 值。
MES SDS 电泳缓冲液:50 mM MES、50 mM Tris Base、0.1% SDS、1 mM EDTA,pH 7.3。
20X 储存液的配方:
MES | 97.6 g |
Tris Base | 60.6 g |
SDS | 10 g |
EDTA | 3.0 g |
去离子水 | 至 500 mL |
切勿使用酸或碱调节 pH 值。
Tricine SDS 电泳缓冲液:100 mM Tris Base、100 mM Tricine、0.1% SDS、pH 8.3。
10X 储存液的配方:
Tris Base | 121 g |
Tricine | 179 g |
SDS | 10 g |
去离子水 | 至 1000 mL |
该缓冲液可在室温下稳定保存 6 个月。切勿使用酸或碱调节 pH 值。
Tris-甘氨酸转印缓冲液:12 mM Tris Base、96 mM 甘氨酸,pH 8.3。
25X 储存液的配方:
Tris Base | 18.2 g |
甘氨酸 | 90 g |
去离子水 | 至 500 mL |
Bis-Tris 转印缓冲液:25 mM Bicine、25 mM Bis-Tris、1 mM EDTA,pH 7.2。
20X 储存液的配方:
Bicine | 10.2 g |
Bis-Tris | 13.1 g |
EDTA | 0.75 g |
去离子水 | 125 mL |
该缓冲液可在 4℃ 下保持稳定 6 个月。
切勿使用酸或碱调节 pH 值。
含 Tween 20 的 Tris 缓冲液(TBST)
10X TBS | 100 mL |
Tween 20 | 1 mL |
去离子水 | 至 1000 mL |
含 Tween 20 的磷酸盐缓冲液(PBST)
10X TBS | 100 mL |
Tween 20 | 1 mL |
去离子水 | 至 1000 mL |
5% 脱脂牛奶
脱脂奶粉 | 2.5 g |
TBST 或 PBST | 不超过 50 mL |
过滤以去除未溶颗粒物 |
3% BSA
BSA | 1.5 g |
TBST 或 PBST | 不超过 50 mL |
过滤以去除未溶颗粒物 |
抗体剥离液
0.5 M Tris HCl, pH 6.8 | 12.5 mL |
10% SDS | 20 mL |
2-巯基乙醇 | 0.8 mL |
去离子水 | 67.5 mL |
根据下表制备分离胶。表中所列的体积可制备一块凝胶。根据需要制备的凝胶数量,成比例放大体积。
聚丙烯酰胺浓度% | |||||||||
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溶液 | 4% | 6% | 8% | 10% | 12% | 14% | 16% | 18% | 20% |
SureCast 预混丙烯酰胺(40%) | 0.8 mL | 1.2 mL | 1.6 mL | 2.0 mL | 2.4 mL | 2.8 mL | 3.3 mL | 3.6 mL | 4.0 mL |
SureCast 分离胶缓冲液 | 2.0 mL | 2.0 mL | 2.0 mL | 2.0 mL | 2.0 mL | 2.0 mL | 2.0 mL | 2.0 mL | 2.0 mL |
蒸馏水 | 5.1 mL | 4.7 mL | 4.3 mL | 3.9 mL | 3.5 mL | 3.1 mL | 2.7 mL | 2.3 mL | 1.9 mL |
10% SureCast APS | 80 µL | 80 µL | 80 µL | 80 µL | 80 µL | 80 µL | 80 µL | 80 µL | 80 µL |
SureCast TEMED* | 8 µL | 8 µL | 8 µL | 8 µL | 8 µL | 8 µL | 8 µL | 8 µL | 8 µL |
*最后加入,并在倒胶之前充分混合
根据下表制备浓缩胶。表中所列的体积可制备一块凝胶。根据需要制备的凝胶数量,成比例放大体积。备注:溶液不需要脱气。
溶液 | 4% |
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SureCast 预混丙烯酰胺(40%) | 0.30 mL |
SureCast 浓缩胶缓冲液 | 0.75 mL |
蒸馏水 | 1.92 mL |
10% SureCast APS | 30 µL |
SureCast TEMED* | 3 µL |
*最后加入,并在倒胶之前充分混合
制备以下储存液:所有溶液均可室温保存。
50% 丙烯酰胺/BIS (29:1)
在避光玻璃瓶中可稳定保存长达两个月。 | 分离胶缓冲液(1 M Tris-HCl,pH 8.8)
| 浓缩胶缓冲液(0.375M Tris HCl,pH 6.8)
| 催化剂-过硫酸铵(使用当天新鲜配制)
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10% SDS
| 50% 蔗糖
|
以下配方可制备约 25 mL 分离胶,足以用于灌制四块 1.0-mm 厚的小型凝胶 。根据需要制备的凝胶数量,成比例放大体积。
溶液 | 6%凝胶 | 8%凝胶 | 10%凝胶 | 12%凝胶 | 14%凝胶 | 16%凝胶 | 18%凝胶 | 20%凝胶 |
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50% 丙烯酰胺/BIS | 3.0 mL | 4.0 mL | 5.0 mL | 6.0 mL | 7.0 mL | 8.0 mL | 9.0 mL | 10.0 mL |
分离胶缓冲液 | 9.4 mL | 9.4 mL | 9.4 mL | 9.4 mL | 9.4 mL | 9.4 mL | 9.4 mL | 9.4 mL |
10% SDS | 250 µL | 250 µL | 250 µL | 250 µL | 250 µL | 250 µL | 250 µL | 250 µL |
50% 蔗糖* | 4.0 mL | 4.0 mL | 4.0 mL | 4.0 mL | 4.0 mL | 4.0 mL | 4.0 mL | 4.0 mL |
水 | 7.8 mL | 6.8 mL | 5.8 mL | 4.8 mL | 3.7 mL | 2.7 mL | 1.7 mL | 750 µL |
TEMED** | 6.25 µL | 6.25 µL | 6.25 µL | 6.25 µL | 6.25 µL | 6.25 µL | 6.25 µL | 6.25 µL |
催化剂** | 625 µL | 625 µL | 625 µL | 625 µL | 625 µL | 625 µL | 625 µL | 625 µL |
*可选,但建议使用,因为它有助于在分离胶和覆盖层之间形成理想的界面。如果忽略不用,则增加水量以补齐蔗糖溶液体积(基于上表数据增加 4.0 mL 水量)。
**最后加入,并在倒胶之前充分混合。
以下配方可制备 4% 浓缩胶(12.5 mL)
溶液 | 4% |
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50% 丙烯酰胺/BIS | 1.0 mL |
浓缩胶缓冲液 | 4.2 mL |
10% SDS | 125 µL |
水 | 6.3 mL |
TEMED* | 5.0 µL |
催化剂* | 1.0 mL |
*最后加入,并在倒胶之前充分混合。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。