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凝胶上蛋白检测的最常用方法是进行考马斯亮蓝染色。考马斯染色易于操作,因为它只涉及一种现成的试剂,而且不会永久性地对目标蛋白质进行化学修饰。由于未发生化学修饰,切下的蛋白质条带可以完全脱色,然后通过质谱或测序对回收的蛋白质进行分析。我们基于考马斯染色法的蛋白质染料简单易用,可轻松对通过电泳分离的蛋白质进行可视化。
Simply Blue Safe Stain 染料 | Colloidal 蓝色染料 | GelCode 蓝色染料 | GelCode 蓝色安全染料 | Imperial 蛋白质染料 | Pageblue 蛋白质染料 | ||
---|---|---|---|---|---|---|---|
检测限 | > 7 ng | < 10 ng | 8 ng | 9 ng | ≤3 ng | 5 ng | |
大致染色时间 (用于凝胶) | 标准 方案 | 135 分钟 | 10 小时 | 135 分钟 | 135 分钟 | 135 分钟 | 95 分钟 |
微波 方案 | 12 分钟 | 30 分钟 | 30 分钟 | 12 分钟 | 30 分钟 | ||
组分数量 | 1(即用型) | 2 | 1 (即用型) | 2 | 1 (即用型) | 1(即用型) | |
染色步骤 | 2 | 3 | 2-3 | 3 | 3 | 3 | |
染色剂 | G-250 | G-250 | G-250 | G-250 | R-250 | G-250 | |
产品优势 | 无害处置 | 染色灵活,可用于多种应用 | 无害运输 | 紫色染料 | 染料可重复使用3次 | ||
无需酸固定剂或甲醇 | ✓ | 染色需使用甲醇,Bis-tris 凝胶在染色前需要固定 | ✓ *Bis-tris 凝胶在染色前需要固定 | ✓ | ✓ | ✓ | |
凝胶染色 | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | |
PVDF膜染色 | ✓ *膜必须干燥 | × | ✓ | ✓ | × | ✓ *膜必须干燥 | |
硝酸纤维素膜染色 | × | × | ✓ | ✓ | ✓ | × | |
质谱或测序分析 | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | |
货号 | LC6065 | LC6025 | 24592 | 24594 | 24615 | 24620 |
染色前,建议用水进行漂洗以去除残留的 SDS,避免对染料结合的干扰。然后加入染料,通常摇晃孵育约1小时。凝胶即可在染料中直接分析。如果需要进一步提高灵敏度,也可以使用水或甲醇:乙酸进行脱色,从凝胶基质中洗去多余的未结合染料。为了加快染色过程,可选用微波方案进行不需要甲醇或乙酸的考马斯染色。
考马斯染色法通常可以在5分钟内检测到3-10μg 的蛋白质。如果进行了额外的水脱色处理,则可以检测到低至7ng 的蛋白质 (BSA)。
泳道 1:6µg 蛋白质混合物
泳道 2:1µg 兔免疫球蛋白
泳道 3:1µg 还原牛血清白蛋白
泳道 4:5µg大肠杆菌裂解物
泳道 5:20ng 还原牛血清白蛋白
泳道 6:10ng 还原牛血清白蛋白
泳道 7:7ng 还原牛血清白蛋白
泳道 8:3ng 还原牛血清白蛋白
泳道 9:10µl Mark12标准品
泳道 10:5µl Mark12标准品
NuPAGE Bis-tris凝胶通过Simply Blue Safe 染料染色1小时,并在水里进行过夜脱色。
考马斯亮蓝染料可在一定蛋白质范围内定量结合蛋白质,从而进行光密度分析。PageBlue 蛋白质染料具有〜5ng至〜500ng的动态范围。
PageBlue 蛋白质染料可实现灵敏且线性动态范围宽的染色方案。将一系列含有β-半乳糖苷酶和牛血清白蛋白的样品(各为0-500ng)在12%Tris-甘氨酸SDS-PAGE 胶上通过电泳分离,然后使用PageBlue蛋白质染料染色,并对染色的蛋白条带进行光密度测定。
使用 iBright 智能成像系统对染色的凝胶和膜拍照,获取发表级图像并进行分析。此凝胶成像系统配备了功能强大的硬件,融合了先进的自动化技术,操作界面易于使用,无论你是实验室新手,还是资深研科人员,都能快速上手,拍摄清晰成像图片并进行快速分析。
Simply Blue Safe Stain 染料 | Colloidal 蓝色染料 | GelCode 蓝色染料 | GelCode 蓝色安全染料 | Imperial 蛋白质染料 | Pageblue 蛋白质染料 | ||
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检测限 | > 7 ng | < 10 ng | 8 ng | 9 ng | ≤3 ng | 5 ng | |
大致染色时间 (用于凝胶) | 标准 方案 | 135 分钟 | 10 小时 | 135 分钟 | 135 分钟 | 135 分钟 | 95 分钟 |
微波 方案 | 12 分钟 | 30 分钟 | 30 分钟 | 12 分钟 | 30 分钟 | ||
组分数量 | 1(即用型) | 2 | 1 (即用型) | 2 | 1 (即用型) | 1(即用型) | |
染色步骤 | 2 | 3 | 2-3 | 3 | 3 | 3 | |
染色剂 | G-250 | G-250 | G-250 | G-250 | R-250 | G-250 | |
产品优势 | 无害处置 | 染色灵活,可用于多种应用 | 无害运输 | 紫色染料 | 染料可重复使用3次 | ||
无需酸固定剂或甲醇 | ✓ | 染色需使用甲醇,Bis-tris 凝胶在染色前需要固定 | ✓ *Bis-tris 凝胶在染色前需要固定 | ✓ | ✓ | ✓ | |
凝胶染色 | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | |
PVDF膜染色 | ✓ *膜必须干燥 | × | ✓ | ✓ | × | ✓ *膜必须干燥 | |
硝酸纤维素膜染色 | × | × | ✓ | ✓ | ✓ | × | |
质谱或测序分析 | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | |
货号 | LC6065 | LC6025 | 24592 | 24594 | 24615 | 24620 |
染色前,建议用水进行漂洗以去除残留的 SDS,避免对染料结合的干扰。然后加入染料,通常摇晃孵育约1小时。凝胶即可在染料中直接分析。如果需要进一步提高灵敏度,也可以使用水或甲醇:乙酸进行脱色,从凝胶基质中洗去多余的未结合染料。为了加快染色过程,可选用微波方案进行不需要甲醇或乙酸的考马斯染色。
考马斯染色法通常可以在5分钟内检测到3-10μg 的蛋白质。如果进行了额外的水脱色处理,则可以检测到低至7ng 的蛋白质 (BSA)。
泳道 1:6µg 蛋白质混合物
泳道 2:1µg 兔免疫球蛋白
泳道 3:1µg 还原牛血清白蛋白
泳道 4:5µg大肠杆菌裂解物
泳道 5:20ng 还原牛血清白蛋白
泳道 6:10ng 还原牛血清白蛋白
泳道 7:7ng 还原牛血清白蛋白
泳道 8:3ng 还原牛血清白蛋白
泳道 9:10µl Mark12标准品
泳道 10:5µl Mark12标准品
NuPAGE Bis-tris凝胶通过Simply Blue Safe 染料染色1小时,并在水里进行过夜脱色。
考马斯亮蓝染料可在一定蛋白质范围内定量结合蛋白质,从而进行光密度分析。PageBlue 蛋白质染料具有〜5ng至〜500ng的动态范围。
PageBlue 蛋白质染料可实现灵敏且线性动态范围宽的染色方案。将一系列含有β-半乳糖苷酶和牛血清白蛋白的样品(各为0-500ng)在12%Tris-甘氨酸SDS-PAGE 胶上通过电泳分离,然后使用PageBlue蛋白质染料染色,并对染色的蛋白条带进行光密度测定。
使用 iBright 智能成像系统对染色的凝胶和膜拍照,获取发表级图像并进行分析。此凝胶成像系统配备了功能强大的硬件,融合了先进的自动化技术,操作界面易于使用,无论你是实验室新手,还是资深研科人员,都能快速上手,拍摄清晰成像图片并进行快速分析。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。