蛋白质凝胶和印迹膜染料

无论您是需要快速的目测判断,或是高灵敏度染料以对低丰度蛋白进行检测,我们都能为您的凝胶内和印迹膜上的检测提供多种易于使用且高效的蛋白染料。查看我们全面的染料目录,其中包括考马斯染料、银染、荧光染色剂、标签融合蛋白染色剂以及翻译后修饰蛋白凝胶染料。

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 考马斯染料考马斯染料银染银染荧光蛋白染色剂荧光蛋白染色剂
灵敏度5-25 ng0.25-0.5 ng0.25-0.5 ng
作用原理考马斯染料通过非共价相互作用与蛋白质的碱性和疏水残基结合,从暗红色变为深蓝色。银离子与羧酸基团(天冬氨酸和谷氨酸)、咪唑(组氨酸)、巯基(半胱氨酸)和胺基(赖氨酸)相互作用并结合。银离子能够被还原成金属银,从而呈现棕黑色。大多数荧光染料通过多肽主链或与蛋白质周围的 SDS 外层相互作用而与蛋白质非共价结合
常规操作时间10-135 min30-120 min60 min
检测方法目视目视带有适当滤镜的成像仪,紫外线或蓝/绿光透照仪
下游应用兼容性兼容质谱、测序和蛋白印迹(仅非固定方法)部分产品兼容质谱大多数染料兼容质谱,蛋白印迹
优势快速简单的染色方案,成本低检测限最低,无需专门仪器线性动态范围广,检测限低
 了解更多了解更多了解更多

考马斯染料染色

考马斯染料(也称为考马斯蓝或考马斯亮蓝)是用于蛋白质(通过蛋白质凝胶电泳分离)可视化的常用染料。基于考马斯的染色剂易于染色,并具有良好的定量线性和灵敏度。基于考马斯的染料不会永久性地化学修饰靶蛋白,而是通过非共价力来相互作用。由于没有发生化学修饰,因此可以完全去除染色的蛋白条带,并将回收的蛋白用于质谱或测序分析。

在酸性条件下,考马斯染料与蛋白质的碱性和疏水残基结合,颜色从暗红色变为深蓝色。与所有染色方法一样,考马斯染料试剂基于其化学作用和蛋白质组分差异,检测某些蛋白质的效果要优于其他方法。因此,考马斯染料可检测到某些低至 8-10 ng 的蛋白条带,对于大多数蛋白检测需要每条带 25 ng。

存在两种形式的染料——R-250(R 代表淡红色)和 G-250(G 代表淡绿色)。两种变体均提供相同的相对灵敏度并易于检测。考马斯 G-250(也称为胶体考马斯染料)提供了更快的染色方案,并消除了脱色的需要。

银染试剂

银染是检测总蛋白最灵敏的比色方法。该技术需要在蛋白条带的位置将金属银沉积到凝胶表面上。银离子(来自染色剂中的硝酸银)与某些蛋白质官能团相互作用并结合。银离子与羧酸基团(天冬氨酸和谷氨酸)、咪唑(组氨酸)、巯基(半胱氨酸)和胺基(赖氨酸)相互作用最强。各种敏化剂和增强剂对于控制银离子与蛋白质结合的特异性和效率,以及结合的银向金属银的有效转化(显影)至关重要。显影过程与胶卷基本相同:银离子被还原为金属银,形成棕黑色。

银染方案需要几个步骤,受试剂质量、孵育时间和凝胶厚度的影响。商业银染试剂盒的一个优点是,配方和操作规程得到了优化和一致的制造,有助于最大程度地提高实验结果的一致性。具有优化方案的试剂盒功能强大且易于使用,可检测典型凝胶中不到 0.5 ng 的蛋白质。

银染剂使用戊二醛或甲醛作为增强剂。这些试剂可引起凝胶基质中蛋白质的化学交联,从而限制了与用于质谱分析(MS)的脱色和洗脱方法的相容性。因此,当采用银染作为质谱工作流程的一部分时,灵敏度与蛋白质可回收性的优化至关重要。

可以制备银染制剂,以使蛋白条带染黑、蓝褐色、红色或黄色,这取决于它们的电荷和其他特征。这对于区分 2D 凝胶上的重叠斑点特别有用。

荧光染料染色

荧光染色剂具有高灵敏度,并且结合了简单的染色方案。大多数荧光染色剂提供的灵敏度与使用银染色技术获得的灵敏度相似,可以用作 1D 或 2D 电泳中银染色的良好替代方法。与银染剂不同,荧光染剂需要可视化设备。可以使用标准的紫外线或蓝/绿光透射照明器或配备有适当滤镜的成像仪查看典型的染色结果。荧光蛋白凝胶染料提供线性定量范围,有些染料报告超过三个数量级。

膜染料选择指南

硝酸纤维素和PVDF膜染色液

 Pierce 可逆蛋白染色试剂盒丽春红染色液SYPRO Ruby Blot 染料No-Stain 免染型蛋白标记试剂
检测方法显色法
(蓝色)
显色法
(粉红)
荧光法
(Ex: 280 & 450 nm, Em: 618 nm)
荧光法
(Ex: 488 nm, Em: 590 nm)
蛋白检测下限~25-50 ng~250 ng~2-8 ng~20 ng
染色时间~15 分钟~5分钟~60分钟~10分钟
应用检测转阴效率,免疫印迹的总蛋白归一化分析
印迹检测前是否要脱色需要脱色需要脱色无需脱色无需脱色
其他考虑因素 不适用于荧光免疫印迹检测PVDF 染色前需固定 
货号24580 (硝酸纤维素膜)
24585 (PVDF)
A40000279 (500 mL)
A40000278 (1L)
S11791 (200 mL)A44449 (40 次反应)
A44717 (10次反应)

总蛋白染色

比色法染料

产品检测限组分(步骤)*所需时间**质谱兼容性染色剂
GelCode 蓝色安全蛋白染料9 ng2 (5)2 小时 15 分G-250
GelCode 蓝色蛋白染料8 ng1 (5)2 小时 15 分G-250
Imperial 蛋白染料3 ng1 (5)2 小时 15 分R-250
Simply Blue Safe Stain染料>7 ng1 (5)微波法12 分钟
标准方法3 小时
G-250
PageBlue 蛋白染料5 ng1 (5)微波法30 分钟
标准方法90 分钟
G-250
Colloidal 蓝色染料< 10 ng1 (3)10 小时 G-250
Pierce 质谱兼容银染试剂盒0.25 ng6 (17)1 小时 13 分金属银离子
Pierce 银染试剂盒0.25 ng4 (15)2 小时 25 分 金属银离子
Pierce Color 银染试剂盒0.1 ng4 (9)4 小时 5 分 
Pierce Zinc 可逆染色试剂盒0.25 ng3 (4)14 分钟 
SilverXpress 银染试剂盒0.86 ng5 (13)2 小时 金属银离子
SilverQuest 银染试剂盒 0.3 ng7 (8)1 小时 30 分金属银离子
丽春红染色液~250 ng1 (3)15 分钟 丽春红

荧光染料

产品检测限组分(步骤)*所需时间**质谱兼容性激发和发射波长
SYPRO Ruby0.25- 1 ng1 (3)微波法90 分钟
标准方法18 小时
激发波长:280, 450nm
发射:610 nm
SYPRO Orange4-8 ng1 (5)约 1 小时 激发波长:300, 470 nm 发射:570 nm
SYPRO Red4-8 ng1 (5)约 1 小时 激发波长:300, 550 nm 发射:630 nm
SYPRO Tangerine1-4 ng1 (4)约 1 小时激发波长:300, 490 nm 发射:640 nm
SYPRO Ruby 蛋白印迹染料2-8 ng1 (4)约 1 小时激发波长:280, 450 nm 发射:618 nm
考马斯 Fluor Orange8 ng1 (4)约 1 小时 激发波长:300, 470 nm 发射:570 nm
Krypton 荧光蛋白染料0.25 ng1 (7)2 小时 40 分激发波长:520 nm
发射:580 nm

*某些产品需要使用者提供其他试剂。操作步骤的数量包括凝胶漂洗、溶液更换、脱色步骤等。
**时间包括凝胶洗涤步骤以及在小型凝胶中获得最佳灵敏度所需的所有步骤。当需要的灵敏度较低时,某些方案可以使用较短的染色和脱色时间。

官能团蛋白染料

产品官能团检测限组分(步骤)*所需时间**检测方法质谱兼容性
Pro-Q Emerald 488 糖蛋白凝胶和印迹染色试剂盒 高碘酸盐氧化的碳水化合物基团4 ng 糖蛋白/条带2 (13)约 6 小时荧光
Pro-Q Emerald 300 糖蛋白凝胶和印迹染色试剂盒 高碘酸盐氧化的碳水化合物基团0.5 ng 糖蛋白/条带2 (10)约 5 小时UV
Pierce 糖蛋白染色剂唾液酸和其他可氧化的碳水化合物基团160 ng5 (11)2 小时 40 分目测比色未检测
Pro-Q Diamond 磷酸蛋白凝胶染色剂与酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基连接的磷酸基团1-16 ng 糖蛋白/条带1 (5)约 4-5 小时荧光未检测
Pro-Q Diamond 磷酸蛋白印迹染色试剂盒与酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基连接的磷酸基团8-16 ng1 (6)约 75 分钟荧光
Lumio Green 检测试剂盒Lumio, TC-标签1 pmole Lumio 融合蛋白3 (8)即时紫外,荧光未检测
InVision™ His-tag 凝胶染色6X His-tag约 0.5 picomole 的 6X His 标记的融合蛋白2 (4)小于 3 小时紫外,荧光未检测
6xHis 蛋白标记染色试剂盒6X His 标记200 ng4 (9)2 小时 20 分紫外,荧光未检测

*某些产品需要使用者提供其他试剂。操作步骤的数量包括多次凝胶漂洗、溶液更换、脱色步骤等。
**时间包括凝胶漂洗步骤以及在小型凝胶中获得最佳灵敏度所需的所有步骤。当需要的灵敏度较低时,某些方案可以使用较短的染色和脱色时间。

 考马斯染料考马斯染料银染银染荧光蛋白染色剂荧光蛋白染色剂
灵敏度5-25 ng0.25-0.5 ng0.25-0.5 ng
作用原理考马斯染料通过非共价相互作用与蛋白质的碱性和疏水残基结合,从暗红色变为深蓝色。银离子与羧酸基团(天冬氨酸和谷氨酸)、咪唑(组氨酸)、巯基(半胱氨酸)和胺基(赖氨酸)相互作用并结合。银离子能够被还原成金属银,从而呈现棕黑色。大多数荧光染料通过多肽主链或与蛋白质周围的 SDS 外层相互作用而与蛋白质非共价结合
常规操作时间10-135 min30-120 min60 min
检测方法目视目视带有适当滤镜的成像仪,紫外线或蓝/绿光透照仪
下游应用兼容性兼容质谱、测序和蛋白印迹(仅非固定方法)部分产品兼容质谱大多数染料兼容质谱,蛋白印迹
优势快速简单的染色方案,成本低检测限最低,无需专门仪器线性动态范围广,检测限低
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考马斯染料染色

考马斯染料(也称为考马斯蓝或考马斯亮蓝)是用于蛋白质(通过蛋白质凝胶电泳分离)可视化的常用染料。基于考马斯的染色剂易于染色,并具有良好的定量线性和灵敏度。基于考马斯的染料不会永久性地化学修饰靶蛋白,而是通过非共价力来相互作用。由于没有发生化学修饰,因此可以完全去除染色的蛋白条带,并将回收的蛋白用于质谱或测序分析。

在酸性条件下,考马斯染料与蛋白质的碱性和疏水残基结合,颜色从暗红色变为深蓝色。与所有染色方法一样,考马斯染料试剂基于其化学作用和蛋白质组分差异,检测某些蛋白质的效果要优于其他方法。因此,考马斯染料可检测到某些低至 8-10 ng 的蛋白条带,对于大多数蛋白检测需要每条带 25 ng。

存在两种形式的染料——R-250(R 代表淡红色)和 G-250(G 代表淡绿色)。两种变体均提供相同的相对灵敏度并易于检测。考马斯 G-250(也称为胶体考马斯染料)提供了更快的染色方案,并消除了脱色的需要。

银染试剂

银染是检测总蛋白最灵敏的比色方法。该技术需要在蛋白条带的位置将金属银沉积到凝胶表面上。银离子(来自染色剂中的硝酸银)与某些蛋白质官能团相互作用并结合。银离子与羧酸基团(天冬氨酸和谷氨酸)、咪唑(组氨酸)、巯基(半胱氨酸)和胺基(赖氨酸)相互作用最强。各种敏化剂和增强剂对于控制银离子与蛋白质结合的特异性和效率,以及结合的银向金属银的有效转化(显影)至关重要。显影过程与胶卷基本相同:银离子被还原为金属银,形成棕黑色。

银染方案需要几个步骤,受试剂质量、孵育时间和凝胶厚度的影响。商业银染试剂盒的一个优点是,配方和操作规程得到了优化和一致的制造,有助于最大程度地提高实验结果的一致性。具有优化方案的试剂盒功能强大且易于使用,可检测典型凝胶中不到 0.5 ng 的蛋白质。

银染剂使用戊二醛或甲醛作为增强剂。这些试剂可引起凝胶基质中蛋白质的化学交联,从而限制了与用于质谱分析(MS)的脱色和洗脱方法的相容性。因此,当采用银染作为质谱工作流程的一部分时,灵敏度与蛋白质可回收性的优化至关重要。

可以制备银染制剂,以使蛋白条带染黑、蓝褐色、红色或黄色,这取决于它们的电荷和其他特征。这对于区分 2D 凝胶上的重叠斑点特别有用。

荧光染料染色

荧光染色剂具有高灵敏度,并且结合了简单的染色方案。大多数荧光染色剂提供的灵敏度与使用银染色技术获得的灵敏度相似,可以用作 1D 或 2D 电泳中银染色的良好替代方法。与银染剂不同,荧光染剂需要可视化设备。可以使用标准的紫外线或蓝/绿光透射照明器或配备有适当滤镜的成像仪查看典型的染色结果。荧光蛋白凝胶染料提供线性定量范围,有些染料报告超过三个数量级。

膜染料选择指南

硝酸纤维素和PVDF膜染色液

 Pierce 可逆蛋白染色试剂盒丽春红染色液SYPRO Ruby Blot 染料No-Stain 免染型蛋白标记试剂
检测方法显色法
(蓝色)
显色法
(粉红)
荧光法
(Ex: 280 & 450 nm, Em: 618 nm)
荧光法
(Ex: 488 nm, Em: 590 nm)
蛋白检测下限~25-50 ng~250 ng~2-8 ng~20 ng
染色时间~15 分钟~5分钟~60分钟~10分钟
应用检测转阴效率,免疫印迹的总蛋白归一化分析
印迹检测前是否要脱色需要脱色需要脱色无需脱色无需脱色
其他考虑因素 不适用于荧光免疫印迹检测PVDF 染色前需固定 
货号24580 (硝酸纤维素膜)
24585 (PVDF)
A40000279 (500 mL)
A40000278 (1L)
S11791 (200 mL)A44449 (40 次反应)
A44717 (10次反应)

总蛋白染色

比色法染料

产品检测限组分(步骤)*所需时间**质谱兼容性染色剂
GelCode 蓝色安全蛋白染料9 ng2 (5)2 小时 15 分G-250
GelCode 蓝色蛋白染料8 ng1 (5)2 小时 15 分G-250
Imperial 蛋白染料3 ng1 (5)2 小时 15 分R-250
Simply Blue Safe Stain染料>7 ng1 (5)微波法12 分钟
标准方法3 小时
G-250
PageBlue 蛋白染料5 ng1 (5)微波法30 分钟
标准方法90 分钟
G-250
Colloidal 蓝色染料< 10 ng1 (3)10 小时 G-250
Pierce 质谱兼容银染试剂盒0.25 ng6 (17)1 小时 13 分金属银离子
Pierce 银染试剂盒0.25 ng4 (15)2 小时 25 分 金属银离子
Pierce Color 银染试剂盒0.1 ng4 (9)4 小时 5 分 
Pierce Zinc 可逆染色试剂盒0.25 ng3 (4)14 分钟 
SilverXpress 银染试剂盒0.86 ng5 (13)2 小时 金属银离子
SilverQuest 银染试剂盒 0.3 ng7 (8)1 小时 30 分金属银离子
丽春红染色液~250 ng1 (3)15 分钟 丽春红

荧光染料

产品检测限组分(步骤)*所需时间**质谱兼容性激发和发射波长
SYPRO Ruby0.25- 1 ng1 (3)微波法90 分钟
标准方法18 小时
激发波长:280, 450nm
发射:610 nm
SYPRO Orange4-8 ng1 (5)约 1 小时 激发波长:300, 470 nm 发射:570 nm
SYPRO Red4-8 ng1 (5)约 1 小时 激发波长:300, 550 nm 发射:630 nm
SYPRO Tangerine1-4 ng1 (4)约 1 小时激发波长:300, 490 nm 发射:640 nm
SYPRO Ruby 蛋白印迹染料2-8 ng1 (4)约 1 小时激发波长:280, 450 nm 发射:618 nm
考马斯 Fluor Orange8 ng1 (4)约 1 小时 激发波长:300, 470 nm 发射:570 nm
Krypton 荧光蛋白染料0.25 ng1 (7)2 小时 40 分激发波长:520 nm
发射:580 nm

*某些产品需要使用者提供其他试剂。操作步骤的数量包括凝胶漂洗、溶液更换、脱色步骤等。
**时间包括凝胶洗涤步骤以及在小型凝胶中获得最佳灵敏度所需的所有步骤。当需要的灵敏度较低时,某些方案可以使用较短的染色和脱色时间。

官能团蛋白染料

产品官能团检测限组分(步骤)*所需时间**检测方法质谱兼容性
Pro-Q Emerald 488 糖蛋白凝胶和印迹染色试剂盒 高碘酸盐氧化的碳水化合物基团4 ng 糖蛋白/条带2 (13)约 6 小时荧光
Pro-Q Emerald 300 糖蛋白凝胶和印迹染色试剂盒 高碘酸盐氧化的碳水化合物基团0.5 ng 糖蛋白/条带2 (10)约 5 小时UV
Pierce 糖蛋白染色剂唾液酸和其他可氧化的碳水化合物基团160 ng5 (11)2 小时 40 分目测比色未检测
Pro-Q Diamond 磷酸蛋白凝胶染色剂与酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基连接的磷酸基团1-16 ng 糖蛋白/条带1 (5)约 4-5 小时荧光未检测
Pro-Q Diamond 磷酸蛋白印迹染色试剂盒与酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基连接的磷酸基团8-16 ng1 (6)约 75 分钟荧光
Lumio Green 检测试剂盒Lumio, TC-标签1 pmole Lumio 融合蛋白3 (8)即时紫外,荧光未检测
InVision™ His-tag 凝胶染色6X His-tag约 0.5 picomole 的 6X His 标记的融合蛋白2 (4)小于 3 小时紫外,荧光未检测
6xHis 蛋白标记染色试剂盒6X His 标记200 ng4 (9)2 小时 20 分紫外,荧光未检测

*某些产品需要使用者提供其他试剂。操作步骤的数量包括多次凝胶漂洗、溶液更换、脱色步骤等。
**时间包括凝胶漂洗步骤以及在小型凝胶中获得最佳灵敏度所需的所有步骤。当需要的灵敏度较低时,某些方案可以使用较短的染色和脱色时间。

仅供科研使用,不可用于诊断目的。