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使用磁性琼脂糖进行纯化
琼脂糖磁珠由封装铁磁芯的高度交联琼脂糖构成。微珠尺寸为10至40 uM，结合能力高于传统磁珠。我们提供用于免疫沉淀 (IP)、免疫共沉淀 (co-IP)、沉降和其他高通量亲和筛选应用的多种配体，它们利用了固定化蛋白 A/G、Ni-NTA、Ni-IMAC（EDTA 兼容）、谷胱甘肽和抗 FLAG。使用磁力架手动或使用 Thermo Scientific KingFisher Flex 磁珠法核酸提取仪等仪器自动从溶液中去除磁珠。自动仪器对于通量较高的纯化和纯化条件筛选特别有用。
- 高结合力——结合能力最高为传统磁珠的100倍
- 更多选择——多种配体可用于不同的纯化策略
- 兼容自动化——可与磁珠法核酸提取仪配合用于通量较高的应用
- 灵活——可以根据需要使用适合的方案扩大或缩小规模
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使用所有 KingFisher 自动纯化系统仪器附带的 BindIt PC 软件轻松搜索并下载适用于 Pierce 琼脂糖磁珠的自动化方案：
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图1.Pierce 抗 DYKDDDDK 磁性琼脂糖与另一供应商产品的蛋白纯化结果的比较。采用 Thermo Scientific 一步法人高得率 Maxi IVT 试剂盒表达 C 端 DYKDDDDK 标记绿色海肾荧光素酶蛋白，并通过 KingFisher Flex 纯化系统使用 Pierce 抗 DYKDDDDK 磁性琼脂糖或 Sigma-Aldrich 抗 FLAG™ M2 磁珠对其进行免疫沉淀。使用 Pierce 3x DYKDDDDK 肽对标记蛋白进行竞争性洗脱，然后，使用蛋白免疫印迹 (A)、银染色 (C) 和 Pierce 海肾荧光素酶辉光检测试剂盒 (B) 分析。比较起始裂解物 (L)、洗脱物 (E) 和微珠煮沸样本 (BB) 的结果显示有效捕获和洗脱了 DYKDDDDK 标记蛋白且无背景噪声。蛋白和活性水平的相关性表明，在纯化和竞争性肽洗脱后，绿色海肾荧光素酶保持高活性水平。
图2.从细胞培养上清液中纯化蛋白时，Pierce 高能力 Ni-IMAC 磁珠（兼容 EDTA）的性能优于供应商 C 的磁珠。将含过度表达 His 标记的 EPO（40 mg 总蛋白）的细胞培养上清液 (Expi293) 涂在“Pierce 高能力 Ni-IMAC 磁珠（兼容 EDTA）”以及竞争对手 C 的微珠。使用制造商推荐的方案和缓冲液处理这些微珠。所有的样本都进行了30分钟的结合。将微珠收集在磁力架上，保存流过物（未结合）组分以供分析。然后洗涤微珠两次，在洗脱缓冲液中孵育15分钟来洗脱结合的蛋白。在 SDS-PAGE 凝胶上分离洗脱液并使用 GelCode 蓝（货号24594）染色。按照体积对凝胶泳道进行标准化。 M = 分子量标记物、L = 裂解液上样、FT = 流过物、W = 洗涤、E = 洗脱。
*HC = 高能力。
图3.在 Kingfisher Flex 仪器上 Pierce 高能力 Ni-IMAC 磁珠（兼容 EDTA）的能力高于竞争对手 C 的磁珠。将纯化的过度表达的 6xHis-GFP 涂在“Pierce 高能力 Ni-IMAC 磁珠（与 EDTA 兼容）”以及竞争对手 C 的微珠上（每 10ul 沉淀的微珠 0-100mg GFP）。在 Kingfisher Flex 上使用制造商推荐的方案和缓冲液处理微珠。所有的样本都进行了30分钟的结合。收集微珠，保存流过物（未结合）组分以供分析。然后洗涤微珠两次，在洗脱缓冲液中孵育15分钟来洗脱结合的蛋白。
*HC = 高能力
图4.Pierce Ni-NTA 磁性琼脂糖和其他供应商产品的蛋白得率比较。用 0.5 mL 结合缓冲液稀释 6xHis 标记的 BirA 蛋白的样本 (0.5 mL) 并用 25 mL 沉淀微珠进行手动纯化。有关缓冲液成分和体积，遵循各供应商各自的方案。与其他供应商的微珠相比，Pierce Ni-NTA 磁性琼脂糖的得率较高。
图5.Pierce 谷胱甘肽琼脂糖磁珠与其他供应商的产品之间的蛋白得率比较。用 0.25 mL 结合缓冲液稀释 GST-RalGDS 样本 (0.25 mL) 并用 25 μL 沉淀微珠进行手动纯化。有关缓冲液成分和体积，遵循各供应商各自的方案。与其他供应商的微珠相比，Pierce 谷胱甘肽琼脂糖磁珠的得率较高。
图6.Thermo Scientific Pierce 蛋白 A/G 琼脂糖磁珠的纯化得率高于其他市售磁珠。使用 Pierce 蛋白 A/G 琼脂糖磁珠、GE Healthcare™ 的蛋白 A 琼脂糖 Xtra 磁珠、GE Healthcare 的蛋白 G 琼脂糖 Xtra 磁珠、Promega™ Magne™ 的蛋白 A 磁珠、Promega Magne 的蛋白 G 磁珠、GenScript™ 的蛋白 A/G 磁珠、BioVision™ 的蛋白 A/G 磁珠和 Pierce 蛋白 A/G 磁珠进行 IgG 纯化。根据制造商的方案使用结合缓冲液稀释小鼠和人血清 (50 μL) 并加入琼脂糖磁珠。根据制造商的方案纯化 IgG。通过 IgG 在 280 nm 处的吸光度估计 IgG 得率。所有纯化操作都进行两次。
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图1.Pierce 抗 DYKDDDDK 磁性琼脂糖与另一供应商产品的蛋白纯化结果的比较。采用 Thermo Scientific 一步法人高得率 Maxi IVT 试剂盒表达 C 端 DYKDDDDK 标记绿色海肾荧光素酶蛋白，并通过 KingFisher Flex 纯化系统使用 Pierce 抗 DYKDDDDK 磁性琼脂糖或 Sigma-Aldrich 抗 FLAG™ M2 磁珠对其进行免疫沉淀。使用 Pierce 3x DYKDDDDK 肽对标记蛋白进行竞争性洗脱，然后，使用蛋白免疫印迹 (A)、银染色 (C) 和 Pierce 海肾荧光素酶辉光检测试剂盒 (B) 分析。比较起始裂解物 (L)、洗脱物 (E) 和微珠煮沸样本 (BB) 的结果显示有效捕获和洗脱了 DYKDDDDK 标记蛋白且无背景噪声。蛋白和活性水平的相关性表明，在纯化和竞争性肽洗脱后，绿色海肾荧光素酶保持高活性水平。
图2.从细胞培养上清液中纯化蛋白时，Pierce 高能力 Ni-IMAC 磁珠（兼容 EDTA）的性能优于供应商 C 的磁珠。将含过度表达 His 标记的 EPO（40 mg 总蛋白）的细胞培养上清液 (Expi293) 涂在“Pierce 高能力 Ni-IMAC 磁珠（兼容 EDTA）”以及竞争对手 C 的微珠。使用制造商推荐的方案和缓冲液处理这些微珠。所有的样本都进行了30分钟的结合。将微珠收集在磁力架上，保存流过物（未结合）组分以供分析。然后洗涤微珠两次，在洗脱缓冲液中孵育15分钟来洗脱结合的蛋白。在 SDS-PAGE 凝胶上分离洗脱液并使用 GelCode 蓝（货号24594）染色。按照体积对凝胶泳道进行标准化。 M = 分子量标记物、L = 裂解液上样、FT = 流过物、W = 洗涤、E = 洗脱。
*HC = 高能力。
图3.在 Kingfisher Flex 仪器上 Pierce 高能力 Ni-IMAC 磁珠（兼容 EDTA）的能力高于竞争对手 C 的磁珠。将纯化的过度表达的 6xHis-GFP 涂在“Pierce 高能力 Ni-IMAC 磁珠（与 EDTA 兼容）”以及竞争对手 C 的微珠上（每 10ul 沉淀的微珠 0-100mg GFP）。在 Kingfisher Flex 上使用制造商推荐的方案和缓冲液处理微珠。所有的样本都进行了30分钟的结合。收集微珠，保存流过物（未结合）组分以供分析。然后洗涤微珠两次，在洗脱缓冲液中孵育15分钟来洗脱结合的蛋白。
*HC = 高能力
图4.Pierce Ni-NTA 磁性琼脂糖和其他供应商产品的蛋白得率比较。用 0.5 mL 结合缓冲液稀释 6xHis 标记的 BirA 蛋白的样本 (0.5 mL) 并用 25 mL 沉淀微珠进行手动纯化。有关缓冲液成分和体积，遵循各供应商各自的方案。与其他供应商的微珠相比，Pierce Ni-NTA 磁性琼脂糖的得率较高。
图5.Pierce 谷胱甘肽琼脂糖磁珠与其他供应商的产品之间的蛋白得率比较。用 0.25 mL 结合缓冲液稀释 GST-RalGDS 样本 (0.25 mL) 并用 25 μL 沉淀微珠进行手动纯化。有关缓冲液成分和体积，遵循各供应商各自的方案。与其他供应商的微珠相比，Pierce 谷胱甘肽琼脂糖磁珠的得率较高。
图6.Thermo Scientific Pierce 蛋白 A/G 琼脂糖磁珠的纯化得率高于其他市售磁珠。使用 Pierce 蛋白 A/G 琼脂糖磁珠、GE Healthcare™ 的蛋白 A 琼脂糖 Xtra 磁珠、GE Healthcare 的蛋白 G 琼脂糖 Xtra 磁珠、Promega™ Magne™ 的蛋白 A 磁珠、Promega Magne 的蛋白 G 磁珠、GenScript™ 的蛋白 A/G 磁珠、BioVision™ 的蛋白 A/G 磁珠和 Pierce 蛋白 A/G 磁珠进行 IgG 纯化。根据制造商的方案使用结合缓冲液稀释小鼠和人血清 (50 μL) 并加入琼脂糖磁珠。根据制造商的方案纯化 IgG。通过 IgG 在 280 nm 处的吸光度估计 IgG 得率。所有纯化操作都进行两次。
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