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BigDye Direct Sanger 测序试剂盒
更少的测序步骤
BigDye Direct 循环测序试剂盒是 BigDye 产品系列的最新创新产品，通过将 PCR 后纯化和循环测序合并为一个步骤，简化了行业标准 Sanger 测序工作流程。
" 极佳的试剂盒。工作流程非常简单，跳过了 PCR 后纯化步骤。单流处理可保护样本完整性和同一性，这在我们的环境中非常重要。该试剂盒经济。”— Andrew Hadd，Asuragen, Inc. 的高级科学家。
SSCP 技术概述图
优势
- 数据的准确性：通过在单个试管中执行从 PCR 到毛细管电泳的所有步骤，降低引入实验差异性的可能性
- 测序质量：在使用 POP-7™ 聚合物进行基因特异性引物测序后，读长尽可能接近一个碱基
- 简化的测序工作流程：减少手动处理步骤，节省时间。将 M13 通用测序引物（正向和反向）整合到试剂盒中，无需采购多种试剂
- 节省时间：使用 BigDye Direct 循环测序试剂盒，获得序列读段的速度最高可提高 40%，同时缩短手动操作时间。
BigDye Direct | 3500 系列基因分析仪 |
1.BigDye® Direct 循环测序中包括哪些组分，组分含量是多少。 答案
| 试剂盒组分和含量 | |||||
| P/N | BigDye® Direct | BigDye® Direct | BigDye Direct | BigDye® Direct | DNA 对照品 |
| 4458689 | 24 rxn | 24 rxn | 24 rxn | 24 rxn | 足够用于 200 rxns |
| 4458687 | 100 rxn | 100 rxn | 100 rxn | 100 rxn | 足够用于 200 rxns |
| 4452688 | 100 rxn | 100 rxn | 100 rxn | 100 rxn | 足够用于 200 rxns |
2.在什么平台上支持 BigDye® Direct 循环测序试剂盒？ 答案
| 仪器 | OS | 数据采集 |
| 3130/XL | XP SP2 | 3.0 和 3.1 |
| 3500/XL（也称为 DX） | Vista SP1 | 1.0 |
| 4452688 | XP SP2 | 3.0 和 3.1 |
| 辅助分析软件 | 版本 |
| Seq A | 5.4、5.3.1 和 5.3 |
| SeqScape | 2.7 和 2.6 |
| Variant Reporter | 1.1 和 1.0 |
3.在什么平板规格上兼容 BigDye® Direct 循环测序试剂盒？ 答案
96 孔和管（联排管或单管）。
4.BigDye® Direct 循环测序试剂盒的储存条件是什么？ 答案
| 描述 | 储存 条件 | 稳定性 | 冻融
|
| BigDye® Direct PCR 预混液 | -20°C | 参阅有效期 | 5 个循环 |
| 4°C | 参阅有效期 | ||
| BigDye® Direct 测序预混液 | -20°C | 参阅有效期 | 5 个循环 |
| 4°C | 4 周 | ||
| BigDye® Direct 测序引物（正向/反向） | -20°C | 参阅有效期 | 5 个循环 |
| 4°C | 4 周 | ||
| 对照 CEPH DNA | -20°C | 参阅有效期 | N/A |
*如果 BigDye Direct 循环测序试剂盒已在室温下放置 >8 小时，建议客户不要再使用该试剂盒。
5.在什么条件下 DNA 可在各 BigDye Direct 循环测序步骤中均保持稳定？ 答案
| 描述 | 储存条件 | 稳定性 |
| 已配制 PCR 反应混合物 | 环境条件 | 16 h |
| 扩增 PCR | -20°C | 4 周 |
| 4°C | 16 h | |
| 已配制测序反应混合物 | 环境条件 | 16 h |
| 测序产品（未纯化） | -20°C | 4 周 |
| 4°C | 16 h | |
| 测序产品（BDx 纯化后） | -20°C | 10 天 |
| 4°C | 10 天 | |
| 环境条件 | 16 h |
6.客户能否将其他 PCR 混合物与 BigDye Direct 循环测序试剂盒配合使用？ 答案
不可以，BigDye Direct 循环测序试剂盒的所有组分经过专门配制和优化才能够配合使用，不能与其他 PCR 预混液结合使用。
7.客户是否可以使用标准基因特异性 PCR 引物？ 答案
不可以，客户不能使用 BigDye Direct 循环测序试剂盒的标准基因特异性 PCR 引物。要求客户使用通用引物，特别是 M13 通用引物。序列如下所示：用于引物设计的 M13 通用序列
- M13 正向引物序列：5’ TGTAAAACGACGGCCAGT 3’
- M13 反向引物序列：5’ CAGGAAACAGCTATGACC 3'
8.客户是否可以使用标准基因特异性测序引物？ 答案
不可以，客户不能使用 BigDye Direct 循环测序试剂盒的标准基因特异性测序引物。要求客户使用试剂盒中包括的 M13 通用引物。
9.推荐的模板 DNA 浓度（PCR 前）是多少？ 答案
推荐的 DNA 浓度为 4 ng
10.BigDye XTerminator® 纯化试剂盒中样本的 DNA 在什么温度和时间条件下保持稳定？ 答案
样本可储存在 BigDye Xterminator 纯化试剂盒中，有关储存条件，请参阅问题 #4。
11.与 BigDye Direct循环测序试剂盒配合使用时，最好使用新鲜的 PCR 产物，还是最好使用储存的产物？如果要进行储存，应使用什么温度条件？ 答案
始终建议使用新鲜 PCR 产物，但如果需要储存，请参阅问题 #4，以了解储存条件。
12.样本最好进行干燥储存还是保存在 Hi-Di™ 甲酰胺中？哪种温度最合适？ 答案
建议在 -20°C 下干燥储存样本。
13.客户是否可以稀释 BigDye Direct 循环测序试剂盒？ 答案
BigDye Direct 循环测序试剂盒的配方经过优化，请在原始浓度下使用。稀释本产品将导致不良结果。
14.是否需要更新当前数据采集软件或辅助分析软件？ 答案
客户需要下载 BigDye Direct 循环测序试剂盒安装程序来更新迁移文件。
15.使用什么染料组进行光谱校准？ 答案
请使用 BigDye Terminator v3.1 长读测序标准品对仪器的染料组 Z 进行光谱校准。
16.如果出现由异常数据引起的上拉峰，可采取何种措施？ 答案
建议尝试以下方法之一：
- PCR 循环次数减少 2-3 次
- 对受影响的样本进行重新进样
- 通过缩短时间或降低电压优化进样参数
BigDye Direct | 3500 系列基因分析仪 |
1.BigDye® Direct 循环测序中包括哪些组分，组分含量是多少。 答案
| 试剂盒组分和含量 | |||||
| P/N | BigDye® Direct | BigDye® Direct | BigDye Direct | BigDye® Direct | DNA 对照品 |
| 4458689 | 24 rxn | 24 rxn | 24 rxn | 24 rxn | 足够用于 200 rxns |
| 4458687 | 100 rxn | 100 rxn | 100 rxn | 100 rxn | 足够用于 200 rxns |
| 4452688 | 100 rxn | 100 rxn | 100 rxn | 100 rxn | 足够用于 200 rxns |
2.在什么平台上支持 BigDye® Direct 循环测序试剂盒？ 答案
| 仪器 | OS | 数据采集 |
| 3130/XL | XP SP2 | 3.0 和 3.1 |
| 3500/XL（也称为 DX） | Vista SP1 | 1.0 |
| 4452688 | XP SP2 | 3.0 和 3.1 |
| 辅助分析软件 | 版本 |
| Seq A | 5.4、5.3.1 和 5.3 |
| SeqScape | 2.7 和 2.6 |
| Variant Reporter | 1.1 和 1.0 |
3.在什么平板规格上兼容 BigDye® Direct 循环测序试剂盒？ 答案
96 孔和管（联排管或单管）。
4.BigDye® Direct 循环测序试剂盒的储存条件是什么？ 答案
| 描述 | 储存 条件 | 稳定性 | 冻融
|
| BigDye® Direct PCR 预混液 | -20°C | 参阅有效期 | 5 个循环 |
| 4°C | 参阅有效期 | ||
| BigDye® Direct 测序预混液 | -20°C | 参阅有效期 | 5 个循环 |
| 4°C | 4 周 | ||
| BigDye® Direct 测序引物（正向/反向） | -20°C | 参阅有效期 | 5 个循环 |
| 4°C | 4 周 | ||
| 对照 CEPH DNA | -20°C | 参阅有效期 | N/A |
*如果 BigDye Direct 循环测序试剂盒已在室温下放置 >8 小时，建议客户不要再使用该试剂盒。
5.在什么条件下 DNA 可在各 BigDye Direct 循环测序步骤中均保持稳定？ 答案
| 描述 | 储存条件 | 稳定性 |
| 已配制 PCR 反应混合物 | 环境条件 | 16 h |
| 扩增 PCR | -20°C | 4 周 |
| 4°C | 16 h | |
| 已配制测序反应混合物 | 环境条件 | 16 h |
| 测序产品（未纯化） | -20°C | 4 周 |
| 4°C | 16 h | |
| 测序产品（BDx 纯化后） | -20°C | 10 天 |
| 4°C | 10 天 | |
| 环境条件 | 16 h |
6.客户能否将其他 PCR 混合物与 BigDye Direct 循环测序试剂盒配合使用？ 答案
不可以，BigDye Direct 循环测序试剂盒的所有组分经过专门配制和优化才能够配合使用，不能与其他 PCR 预混液结合使用。
7.客户是否可以使用标准基因特异性 PCR 引物？ 答案
不可以，客户不能使用 BigDye Direct 循环测序试剂盒的标准基因特异性 PCR 引物。要求客户使用通用引物，特别是 M13 通用引物。序列如下所示：用于引物设计的 M13 通用序列
- M13 正向引物序列：5’ TGTAAAACGACGGCCAGT 3’
- M13 反向引物序列：5’ CAGGAAACAGCTATGACC 3'
8.客户是否可以使用标准基因特异性测序引物？ 答案
不可以，客户不能使用 BigDye Direct 循环测序试剂盒的标准基因特异性测序引物。要求客户使用试剂盒中包括的 M13 通用引物。
9.推荐的模板 DNA 浓度（PCR 前）是多少？ 答案
推荐的 DNA 浓度为 4 ng
10.BigDye XTerminator® 纯化试剂盒中样本的 DNA 在什么温度和时间条件下保持稳定？ 答案
样本可储存在 BigDye Xterminator 纯化试剂盒中，有关储存条件，请参阅问题 #4。
11.与 BigDye Direct循环测序试剂盒配合使用时，最好使用新鲜的 PCR 产物，还是最好使用储存的产物？如果要进行储存，应使用什么温度条件？ 答案
始终建议使用新鲜 PCR 产物，但如果需要储存，请参阅问题 #4，以了解储存条件。
12.样本最好进行干燥储存还是保存在 Hi-Di™ 甲酰胺中？哪种温度最合适？ 答案
建议在 -20°C 下干燥储存样本。
13.客户是否可以稀释 BigDye Direct 循环测序试剂盒？ 答案
BigDye Direct 循环测序试剂盒的配方经过优化，请在原始浓度下使用。稀释本产品将导致不良结果。
14.是否需要更新当前数据采集软件或辅助分析软件？ 答案
客户需要下载 BigDye Direct 循环测序试剂盒安装程序来更新迁移文件。
15.使用什么染料组进行光谱校准？ 答案
请使用 BigDye Terminator v3.1 长读测序标准品对仪器的染料组 Z 进行光谱校准。
16.如果出现由异常数据引起的上拉峰，可采取何种措施？ 答案
建议尝试以下方法之一：
- PCR 循环次数减少 2-3 次
- 对受影响的样本进行重新进样
- 通过缩短时间或降低电压优化进样参数
仅供科研使用，不可用于诊断目的。