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由于 ExoSAP-IT PCR 产品试剂的实验方案简单以及其短和长扩增子的回收率均为 100%,研究人员因此可以节省有限的样品并提高工作流程效率。
虽然 Sanger 测序法仍然普遍用于验证和长连续 DNA 序列读数(>500 个核苷酸),但许多基因组分析应用正过渡使用新一代测序 (NGS) 技术,因 NGS 具有可扩展性和经济性,可对大量靶点进行测序。
Applied Biosystems ExoSAP-IT Express 试剂是溶于特配缓冲液中核酸外切酶 I 和虾碱性磷酸酶 (SAP) 的专利混合物,可除去 PCR 后多余的引物和 dNTP。Exonuclease I 去除 PCR 中产生的残留单链引物和任何无关的单链 DNA。SAP 可从 PCR 混合物中去除可能干扰后续反应的剩余 dNTP。
图1.使用 ExoSAP-IT Express 试剂进行 PCR 反应的酶解纯化。 用 2 μ L ExoSAP-IT Express 试剂处理 5 μ L PCR 产物。在 37°C 下处理 4 分钟,然后在 80°C 下孵育 1 分钟,以使这两种酶不可逆 灭活。酶失活后,您的 PCR 产物即可用于下游应用, 如测序 (Sanger/NGS)、片段分析、 SNP 分析、体外转录或单碱基延伸。
将 ExoSAP-IT Express 试剂直接加入 PCR 产物中,可省略向管、孔或柱的转移步骤并节省 PCR 扩增子,从而有助于降低交叉污染的可能性;此外,也无需进一步处理。使用 ExoSAP-IT Expres 试剂进行酶解纯化后,引物和 dNTP 将不会再干扰 DNA 测序或其他下游应用。
只需 5 分钟,ExoSAP-IT Express PCR 产物纯化试剂即可从 PCR 反应中除去多余的引物和未结合的核苷酸。与其他纯化方法(如离心柱或微珠)相比,该酶法纯化方法可提供更高的精确度、产量,以及更快的周转时间。
ExoSAP-IT Express 试剂可提供快速的周转时间以及更高的资源使用效率,同时提供与原始 ExoSAP-IT 试剂相同的出色纯化效果。使用新型 ExoSAP-IT 技术无需进行剂离心柱、磁珠、沉降、过滤和凝胶纯化步骤,能够用极少的步骤显著缩短样品纯化时间,提供极简单的工作流程(见图)。
图 2.ExoSAP-IT Express 试剂和其他常用方法比较
ExoSAP-IT 试剂可提供独特的一管/一步酶法进行 PCR 纯化。无论片段大小如何,所有 ExoSAP-IT 试剂均可实现 100% 的PCR 产物回收率。此 PCR 纯化方法可除去多余的引物和 dNTP,不会干扰下游应用。
无论您是在寻找一个快速周转时间解决方案还是高通量解决方案,我们都有适用的 PCR 纯化试剂。请根据我们的选择指南确定最适合您下一次实验的配方。
ExoSAP-IT Express 试剂 | ExoSAP-IT 试剂(原始配方) | HT ExoSAP-IT Fast 高通量试剂 | |
方案时间 | 5 分钟 | 30分钟 | 14分钟 |
产品规格 |
| 单管 |
|
通量水平 | 低至高;建议用于处理任何样品量 | 低至中等;建议用于一次处理 1-96 个样品 | 高;建议用于一次处理 ≥96 个样品 |
检测平台 | 单或多通道移液器、自动液体处理平台(粘度更低,更便于操作) | 单通道移液器 | 自动液体处理平台 (粘度更低,更便于操作) |
-20°C 下 冻结 | 否 | 否 | 是 |
稳定性 | 在 –20°C 条件下最长可稳定2年 | 在 –20°C 条件下最长可稳定2年 | 在 –20°C 条件下最长可稳定2年;解冻后,在 4°C 条件下可稳定1个月,在室温条件下可稳定2天 |
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仅供科研使用,不可用于诊断目的。