• 起始培养物应具有高质量、70-80% 的汇合度，且不含分化的 hESC。
  • 当过渡到不同的培养基时，不同 hESC 细胞系的表现可能各不相同，直到它们完全适应。
  • 非常关键的传代时机。为了获得最佳结果，hESC 在传代时应接近汇合 (70-80%)。如果在太“稀疏”或过度生长时传代，hESC 将会分化。
  • 传代时的接种密度也很关键。如果接种密度过低，hESC 将会分化。
  • hESC 培养物必须每日换液以获得最佳性能。
  • 形态学——在 StemPro hESC SFM 中，集落边缘可能不如集落中心紧凑。然而，这些细胞没有分化，而是表现出正常的干细胞特征。
  • 可能会发生某些分化，并且应在传代之前手动移除。
  • 在适应过程中无需改变解离酶方案。

 

其他无饲养层培养基 → StemPro hESC SFM饲养层依赖型 → StemPro hESC SFM
当使细胞适应来自无饲养层亲本培养物（如小鼠胚胎成纤维细胞 [MEF] 条件培养基或其他无饲养层培养基）的 StemPro hESC SFM 时：
  • 在对照培养基（MEF 条件培养基或其他无饲养培养基）中冻存细胞，接着再进行适应。
  • 在 hESC 适应 StemPro hESC SFM 的整个过程中，在对照培养基中保存储用培养物作为“备份”。
  • 请遵循以下详述的适应方案：
当使细胞适应来自饲养层依赖型亲本培养物的 StemPro hESC SFM 时：
  • 当亲本 hESC 培养物在小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 或人成纤维细胞饲养层 (HFF) 细胞上维持时，可获得理想结果。
  • 我们建议在 Geltrex 上使用 100% MEF 条件培养基作为下述适应方案的对照品。
  • 在适应过程中，可能会在培养物中观察到一些残留的饲养细胞，但在随后的传代中，灭活的饲养细胞将被淘汰。

过渡到 StemPro hESC SFM + Geltrex 的适应方案

连续适应代数——通过逐渐适应 hESC 以获得更好的结果
StemPro hESC SFM + Geltrex：

  • 第 1 次传代：75% 对照培养基 + 25% StemPro hESC SFM 完全培养基 + Geltrex
  • 第 2 次传代：50% 对照培养基 + 50% StemPro hESC SFM 完全培养基 + Geltrex
  • 第 3 次传代：25% 对照培养基 + 75% StemPro hESC SFM 完全培养基 + Geltrex
  • 第 4 次及后续传代：100% StemPro hESC SFM 完全培养基 + Geltrex

 

  • 如果 hESC 为苛养型，则可以在开始下一个适应水平时，在之前的每个传代培养基中保持一个培养物，从而进一步谨慎行事。例如，在对 25/75 对照培养基/StemPro hESC SFM 培养物（如上所述）进行传代时，hESC 可以传代到 100% StemPro hESC SFM 和 25/75 培养基中。如果 100% 培养效果不佳，则可以使用备份 25/75 培养恢复适应。


直接适应代数——如果 hESC 直接传代到 StemPro hESC SFM 完全培养基
+ Geltrex，前 3 次传代建议使用 1:2 的平分比。

直接和部分连续适应战略：

  1. 将细胞分入三个培养板中（培养板 1、2 和 3）
  2. 在第一次传代时，将培养板 1 直接接种到 StemPro hESC SFM 完全培养基 + Geltrex 中，将培养板 2 和 3 接种到无饲养层对照培养基 + Geltrex 中。
  3. 第二天，用 StemPro hESC SFM 完全培养基 + Geltrex 为培养板 2 换液，此后每天换液。
  4. 对于培养板 3，在第二次传代时，可尝试以 1:2 的平分比（如上所述）将这些细胞直接接种到 StemPro hESC SFM 完全培养基 + Geltrex 中。

可在不同稀释度使用的 Geltrex hESC

适合 hESC 应用的薄凝胶法（非凝胶化）：

  1. 按照产品说明书上的说明解冻 Geltrex
  2. 通过缓慢上下移液混匀 Geltrex；注意不要引入气泡。
  3. 将 1mL Geltrex 稀释到 29mL 预冷的（2 至 8°C）DMEM/F12 培养基 (SKU：10565) 中。可能需要根据经验测定适合您应用的优化包被浓度。可相应调整容量。
  4. 大多数客户发现高于 1:30 的稀释度较适合其 hESC 细胞系。可在介于 1:30 和 1:100 之间的任何稀释度进行尝试。
  5. 添加足量的稀释 Geltrex 溶液以覆盖整个生长表面积（35 mm 培养皿为 1.5 mL，60 mm 培养皿为 3 mL）。
  6. 将包被溶液加入到培养皿中，并在 37°C 下放置至少 60 分钟。
  7. 当在 2 至 8°C 下储存并用封口膜密封时，包被后的培养皿可稳定保存两周。请注意不要让包被表面变干，为了防止过早凝胶化，请务必保持 2 至 8°C 的储存温度。
  8. 在使用时，建议在吸液前将培养板在室温下放置一小时。吸出 Geltrex 包被液，并立即将细胞置于预平衡的细胞培养基中进行铺板。

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可在不同稀释度使用的 Geltrex hESC

适合 hESC 应用的薄凝胶法（非凝胶化）：

  1. 按照产品说明书上的说明解冻 Geltrex
  2. 通过缓慢上下移液混匀 Geltrex；注意不要引入气泡。
  3. 将 1mL Geltrex 稀释到 29mL 预冷的（2 至 8°C）DMEM/F12 培养基 (SKU：10565) 中。可能需要根据经验测定适合您应用的优化包被浓度。可相应调整容量。
  4. 大多数客户发现高于 1:30 的稀释度较适合其 hESC 细胞系。可在介于 1:30 和 1:100 之间的任何稀释度进行尝试。
  5. 添加足量的稀释 Geltrex™ 溶液以覆盖整个生长表面积（35 mm 培养皿为 1.5 mL，60 mm 培养皿为 3 mL）。
  6. 将包被溶液加入到培养皿中，并在 37°C 下放置至少 60 分钟。
  7. 当在 2 至 8°C 下储存并用封口膜密封时，包被后的培养皿可稳定保存两周。请注意不要让包被表面变干，为了防止过早凝胶化，请务必保持 2 至 8°C 的储存温度。
  8. 在使用时，建议在吸液前将培养板在室温下放置一小时。吸出 Geltrex 包被液，并立即将细胞置于预平衡的细胞培养基中进行铺板。

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仅供科研使用，不可用于诊断目的。