心肌细胞培养 3 个简单步骤

  • 三种即用型培养基，无需添加混合组分
  • 短短 8 天内即可获得高质量的心肌细胞
  • 表达相关生理标志物的高功能性心肌细胞

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在最近的一次合作中，Stem Cell Theranostics 的科学家使用了赛默飞世尔科技工作流程试剂，从遗传性肥厚型心肌病 (HCM) 患者中开发出由干细胞衍生的心肌细胞。

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对于更难分化的 iPSC 细胞系，我们的补充富集实验方案可将效率提高 10–30%。使用 Invitrogen 人心肌细胞免疫细胞化学试剂盒分化后，可对细胞进行表征。

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使用 PSC 心肌细胞分化试剂盒收缩心肌细胞

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短短 8 天内即可生成心肌细胞

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借助此简单方案，在可短至 8 天的时间内即可启动多能干细胞 (PSC) 向心肌细胞分化的诱导。

可在左侧查看实验方案，其中包括：

  1. 收获 PSC
  2. 在 Essential 8 培养基中进行 PSC 传代
  3. 在 Essential 8 培养基中扩增 PSC
  4. 用 Essential 8 培养基为 PSC 重新补料
  5. 将培养基更换为心肌细胞分化培养基 A
  6. 将培养基更换为心肌细胞分化培养基 B
  7. 将培养基更换为心肌细胞维持培养基
  8. 每隔一天使用心肌细胞维持培养基重新补料一次
  9. 表征心肌细胞

如何将多能干细胞分化成心肌细胞

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图 1.多个 PSC 细胞系的不同效率。将 TrypLE 解离的 PSC 细胞系以特定密度接种于 Geltrex 包被表面，并在 Essential 8 培养基中培养。经三天扩增后，根据实验方案使用 PSC 心肌细胞分化试剂盒在优化的融合度条件下诱导 PSC 细胞系并培养两周。收获细胞并通过流式细胞术分析 TNNT2+ 细胞。结果显示，在优化的融合度条件下诱导时，所有细胞系均表现出较高的心肌细胞分化效率。

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图 2. 使用 PSC 心肌细胞分化试剂盒对 iPSC 进行 14 天分化。使用人心肌细胞免疫细胞化学试剂盒对细胞进行染色，所用标志物如下：NKX2.5（红色）用于早期心脏中胚层，TNNT2/cTNT（绿色）用于心肌细胞以及 DAPI 核 DNA 复染（蓝色）。

图 3.心脏活性化合物可调节 PSC 衍生的心肌细胞的收缩。 在这里，我们展示了使用多电极阵列测定的经 PSC 心肌细胞分化试剂盒诱导分化的心肌细胞所产生的自发性心搏率变化反应。 (A) 基线条件下的心肌细胞波形。 (B) 维拉帕米治疗条件下的心肌细胞波形。 (C) L 型 Ca2+ 维拉帕米对 H9 衍生的心肌细胞自发性心搏率的影响；达到最高剂量水平时，心肌细胞收缩停止。 (D) 异丙肾上腺素（β-肾上腺素能受体激动剂）对 H9 衍生的心肌细胞自发搏动率的影响。

图 4.使用 PSC 心肌细胞分化试剂盒将 H9 细胞分化为心肌细胞，并使用 Fluo-4 NW 钙含量测定试剂盒标记。将心肌细胞放回心肌细胞维持培养基中，并使用 liteCam HD 软件以每秒 30 帧的速度在 EVOS FL Auto 上以 4X 放大倍率成像。

通过以下简单步骤生成收缩心肌细胞：

  1. 使用 CytoTune-iPS 2.0 重编程试剂盒将体细胞高效重编程为多能干细胞 (PSC)。
  2. 使用 Essential 8 培养基进行 PSC 无饲养层培养。
  3. 使用 PSC 心肌细胞分化试剂盒，在可短至 8 天的时间内生成能够搏动的心肌细胞。
  4. 使用单个试剂盒中提供的所需工具，有效地将心肌细胞标志物可视化。
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相关资源

仅供科研使用。不可用于诊断程序。