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磷酸钙沉淀法
什么是磷酸钙沉淀法？
自二十世纪 70 年代早期引入 [1]以来，磷酸钙共沉淀法已经成为一种主流转染方法，原因是它需要的组分轻易可获得且价廉。磷酸钙共沉淀法的原理涉及将 DNA 与氯化钙在缓冲盐水/磷酸盐溶液中混合，以产生钙-磷酸盐-DNA 共沉淀物，随后将这种共沉淀物分散到培养的细胞上。
在磷酸钙沉淀法中，磷酸钙促进共沉淀物中凝聚的 DNA 与细胞表面结合，而 DNA 通过内吞进入细胞。添加DNA-氯化钙溶液的同时对磷酸盐缓冲液通气有助于确保形成的沉淀物尽可能细微，这至关重要，因为聚集的 DNA 将不那么高效地黏附于或进入细胞。
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图 1.化学转染法 (包括磷酸钙沉淀法) 的机制。在磷酸钙沉淀法中，尤其形成磷酸钙-DNA 共沉淀物，其便核酸与细胞表面结合并借助内吞作用进入细胞。
实施磷酸钙共沉淀法的基本步骤
将 DNA 与 氯化钙混合并且以受控方式添加至缓冲盐水/磷酸盐溶液。
在室温孵育以产生极小、不溶性粒子的沉淀物，这些粒子含有凝集的 DNA。
向细胞添加 DNA-磷酸钙共沉淀物，后者黏附于细胞膜。共沉淀物借助内吞作用进入胞质。
对细胞分析瞬时基因表达或选择稳定的转染子。
将 DNA 与 氯化钙混合并且以受控方式添加至缓冲盐水/磷酸盐溶液。
在室温孵育以产生极小、不溶性粒子的沉淀物，这些粒子含有凝集的 DNA。
向细胞添加 DNA-磷酸钙共沉淀物，后者黏附于细胞膜。共沉淀物借助内吞作用进入胞质。
对细胞分析瞬时基因表达或选择稳定的转染子。
磷酸钙基因转移法的优缺点
磷酸钙沉淀法提供许多优势，包括其简单和材料经济；但是，使用这种方法也有几个缺点，包括其细胞毒性和对环境因素 (如 pH 值、温度) 敏感。
缺点
- 易受变化影响，原因是对 pH、温度和缓冲液盐浓度的微小变化敏感
- 潜在的重现性问题
- 对某些细胞 (包括原代细胞) 有细胞毒性
- 不适合在体内向完整动物导入核酸
- 不能配合 RPMI 培养基使用
- 与其他化学转染法相比，转染效率相对差
访问 转染基础知识，更多了解在实验室进行转染。
仅供科研使用，不可用于诊断目的。