节省时间的免疫测定工具

Instant ELISA 试剂盒、ProQuantum 高灵敏度免疫分析和 ProcartaPlex 多因子检测

（参见本文中的产品列表。）

40多年来，完善的酶联免疫吸附试验（ELISA）被认为是经典免疫学研究中靶标特异性蛋白质测量的金标准。试剂可方便地包装在即用型或自行包装试剂盒中，基于微孔板的 ELISA 提供比任何其他免疫分析平台更多的靶标选择，以及一系列已发表的参考文献，以验证其使用。然而，尽管有方便使用的试剂盒形式，仍然需要数周或数月才能优化工作方案并完成研究所需的实验分析。随着越来越迫切需要了解和开发治疗多种破坏性人类疾病的方法，今天的生命科学研究人员需要能够以与传统 ELISA 相同的灵敏度和特异性量化蛋白质的分析平台，但速度更快，更容易。

Invitrogen 免疫测定家族提供了许多工具，可用于探索免疫系统的各个方面，并监测病理生理条件下免疫反应的变化。除了传统的 ELISA，我们还开发了不少 Instant ELISA 试剂盒，ProQuantum 高灵敏度免疫分析和 ProcartaPlex 多因子检测，它们提供了先进的功能，以支持实验室中的时间节省和提高生产力（图1，表1）。

表 1.比较常规 ELISA 与三种替代 ELISA 的方案和测定要求。

Instant ELISA 试剂盒提供与 ELISA 相同的特异性和灵敏度，但手动操作时间较短

在典型的夹心 ELISA 中，用已经预涂在微孔板孔上的特异性抗体去捕获抗原，将目标抗原固定在固相载体表面上。然后通过用第二个特异性抗体去定量结合的抗原，这第二个特异性抗体可以是酶标抗体（直接ELISA）、也可以再与酶标二抗或生物素化二抗和酶标链霉亲和素一起检测（间接ELISA）。加入酶底物孵育后，底物被催化产生可测量产物，通过酶活性来报告抗原的量。

与传统的 ELISA 试剂盒相比，Instant ELISA 酶标板孔中不仅包含了包被了捕获抗体。Instant ELISA 96孔酶标板试剂盒里还包含了冻干检测抗体、链霉亲和素 -HRP 和样品稀释液，大大减少了测定过程中的移液时间。这些试剂盒还提供额外即用型的四排每排8孔冷冻干燥的、连续稀释的蛋白标准品。因此，每个 Instant ELISA 试剂盒可以运行比常规 ELISA 试剂盒更多的样品（96个试验，加上4条或32个标准孔），并且不需要平板设置或连续稀释。只需用水重新稀释孔中的试剂，然后添加你的样品。孵育3小时和一步洗涤后，加入酶底物，然后用终止溶液结束反应。使用 Instant ELISA 工作流程，准备时间和手动操作时间都比传统 ELISA 短得多。此外，不需要你每小时都要照看清洗，在完成实验之前，你有一个3小时的时间窗口可以专注于其他东西。了解有关 ELISA 试剂盒的更多信息，包括Instant ELISA 试剂盒。

ProQuantum 免疫分析使用 qPCR 来提供下一代替代品

我们最新的免疫分析平台创新—— ProQuantum 高灵敏度免疫分析——具有简化的工作流程，无需洗涤步骤，每个结果仅消耗 2μL 样品。小样品量要求意味着在测试期间和在样品收集过程中更少的工作。此外，ProQuantum 免疫分析的读数是在 qPCR 仪器上，利用 qPCR 技术的高灵敏度和大动态范围。ProQuantum 免疫分析可以在高达5个数量级或更高的浓度范围内对分析物进行定量分析，从而最大限度地减少对样品稀释的需求。

ProQuantum 免疫分析与 ELISA 相似，因为它们都使用配对抗体对来检测目标分析物（图2）。该测定基于优化的抗体对，其与分析物上紧密接近的特定表位结合。这些抗体被偶联在一条60个碱基寡核苷酸的3’末端或一条40个碱基寡核苷酸的5’末端（图2A）。当添加到含有待定量的特定分析物的样品悬浮液中时，两种抗体结合它们各自的表位，导致两条寡核苷酸链彼此接近（图2A）。该抗体结合提供结构稳定性，使得在DNA连接酶和第三条寡核苷酸（与另外两个 DNA 寡核苷酸的末端互补）的存在下，将两个抗体偶联的寡核苷酸连接在一起形成100个碱基链，作为 DNA 扩增模板（图2B）。温度升高至95℃，连接酶失活并使分析物蛋白质和抗体变性后，通过40个循环的 Applied Biosystems TaqMan 基于荧光的 qPCR 扩增模板。每个循环后的扩增量（荧光增加，参见图2C）与抗体-分析物结合产生的连接模板的数量成正比（图2D）。

每个 ProQuantum 免疫测定试剂盒都提供足够的试剂，可根据用户的小体积移液的舒适度来上调或下调分析。如果移液 5μL/ 孔，则可运行一个96孔板；如果移液2μL/孔，则可运行两个96孔板；甚至 1μL/ 孔，液体自动化处理可运行一块384孔板。不包括 PCR 板，因为它们应与将要使用的 qPCR 仪器兼容。在 ProQuantum 方案中，我们建议使用 “setup plate” 来准备和管理溶液、样品和标准品。准备好溶液和样品后，使用多通道移液器将制备的溶液从 setup plate 转移到实际的 PCR 板上;此步骤有助于避免在使用小体积时蒸发。将 PCR 板在室温下孵育1小时使抗体-分析物结合，然后将 ProQuantum 预混液和连接酶溶液直接添加到每个孔中并将板置于 qPCR 仪器中用于连接和 qPCR 扩增步骤。免费的 ProQuantum 配套软件可轻松实现标准曲线生成和数据分析，并可从 Thermo Fisher Cloud 访问。了解有关 ProQuantum 免疫分析和软件的更多信息。

ProcartaPlex可实现高水平多因子筛选蛋白质

ProcartaPlex多因子免疫检测是基于抗体的磁珠试剂盒和方案，用于使用Luminex仪器平台和相关的xMAP磁珠技术进行多因子蛋白定量。ProcartaPlex分析中的Luminex MagPlex超顺磁性微球珠精确比例的红色和红外荧光团进行内部染色，创建100个光谱独特的特征（图3A），可通过Luminex xMAP检测系统识别，包括Luminex 200，FLEXMAP 3D和MAGPIX系统。与夹心ELISA类似，ProcartaPlex测定使用匹配的抗体对来鉴定目的蛋白质。在ProcartaPlex多因子检测中，每种光谱独特的微球用对靶蛋白特异性抗体标记，该抗体结合靶蛋白，并且用生物素化的二抗和链霉亲和素-R-藻红蛋白（RPE）来鉴定结合的靶蛋白。不同单克隆抗体与不同微球的组合可用于在单孔中进行多个分析物的分析(图3B)。两种类型的免疫测定之间的最大区别在于ProcartaPlex测定中的捕获抗体与磁珠结合并且不像常规ELISA那样被吸附到微孔板上，因此ProcartaPlex测定试剂在溶液中自由漂浮。例如，对于检测，Luminex 200仪器包含两个激光器，一个用于区分每个珠子的光谱特征，另一个用于量化RPE荧光的量，其与样品中存在的蛋白质的量成比例。

ProcartaPlex分析设计用于定量来自多种物种（人，小鼠，大鼠，非人灵长类动物，犬和猪）的200多种细胞因子、趋化因子、生长因子和其他蛋白质靶标。ProcartaPlex分析允许在单个孔中同时测量多达80种蛋白质，这相当于运行80个单独的ELISA，并且ProcartaPlex多因子分析与操作单个ELISA时间相同、具有非常相似的工作流程。此外，使用ProcartaPlex方案，只需25μL样品即可筛选多达80种蛋白质，从而显著节省样品量。这种方法适用于高通量筛选，非常适合考察许多蛋白质，然后再缩小至少量特定蛋白质进行研究。从60多种预先配置的多因子方案（2-至65-plex）或混合单一试剂盒（90％可组合）中进行选择，以创建多达80种不同靶蛋白的定制多因子分析。了解有关ProcartaPlex免疫分析的更多信息。