简化氧化应激测量

使用CellROX Green和CellROX Orange试剂的简易工作流程

（请参阅本文中讨论的完整产品列表。）

活性氧簇(ROS)的产生在健康的有氧生物中是不可避免的。ROS的产生由自动氧化、光化学反应和各种酶(如线粒体呼吸、细胞色素P450、NADPH氧化酶等)介导,并通过细胞的排毒机制进行控制。当活性氧的产生与细胞清除和解毒能力不平衡时，就会产生氧化应激。这种失衡可导致核酸、蛋白质和膜脂的短暂或永久性氧化损伤。它还与一些疾病的进展有关，包括炎症、动脉粥样硬化和与年龄相关的退行性疾病。

在这里,我们介绍三个细胞可通透的荧光CellROX试剂-CellROX Deep Red试剂、新的CellROX Green和CellROX Orange试剂——用于活细胞中的ROS检测和定量。

检测细胞的氧化应激

这三种CellROX试剂形成一套用于测量活细胞氧化应激的可光致荧光探针。这些ROS传感器与多种平台兼容，包括显微镜（图1）、高含量成像（图2）、流式细胞术和基于微孔板的荧光术，以及与Floid细胞成像站和Attune声波聚焦流式细胞仪兼容。用常规荧光显微镜或高内涵成像和筛选技术检测活性氧比其他实验技术有几个优点。这些成像方法可提供ROS产生的空间和时间分辨率，也可以与其他细胞健康和功能的测量方法进行多重分析。

CellROX系列氧化应激传感器

除了CellROX Deep Red试剂，我们现在提供两种新的CellROX试剂，用于测量活细胞中的氧化应激（表1）。 CellROX Green试剂（图1、图2）是一种弱荧光，细胞渗透染料，在与ROS反应并随后与DNA结合（最大激发/发射=485/520nm）时呈现亮绿色荧光。该试剂与醛类固定剂以及透化去污剂相容，使其非常适合随后的基于抗体的分析。

CellROX橙色试剂（图1）是一种非荧光的细胞渗透染料，在与ROS反应时呈现明亮的橙色荧光（最大激发/发射= 545/565 nm）。虽然它与醛类固定剂不兼容，但CellROX Orange试剂可以与其他荧光活细胞探针轻松复用，包括GFP、CellEvent Caspase-3/7 Green检测试剂、Image-iT DEAD Green活性染料、MitoTracker Green FM、MitoTracker Deep Red FM试剂和NucBlue活细胞染料。

所有三种 CellROX 试剂均可通过传统显微镜和高内涵成像检测到一致明亮和光稳定的荧光，并有效地成像和定量细胞氧化应激。这些试剂产生的信号具有ROS特异性，如通过细胞与N-乙酰半胱氨酸预孵育时信号衰减(图2).。

图 1.使用荧光显微镜检测 ROS。将人主动脉平滑肌（HASM）细胞接种在35mm玻璃底皿（MatTek）中，用500nM血管紧张素II在37°C处理4小时或不处理作为对照。在最后30分钟的孵育中加入Hoechst 33342和CellROX Green试剂（顶行）或CellROX Orange试剂（底行）。然后用 PBS 洗涤细胞 3 次，并使用 40x 物镜在 Zexi®Axiovert 倒置显微镜上成像。经过血管紧张素 II 处理后观察到 CellROX 信号增加，表明经处理细胞中的氧化应激增加。

图 2.使用高内涵成像检测 ROS。牛肺动脉内皮 (BPAE) 细胞置于 96 孔板中，不处理或用 100µM 甲萘醌在 37°C 处理1小时以诱导氧化应激。 此外，一部分对照和甲萘醌处理的孔再使用 50µM N-乙酰半胱氨酸（NAC，一种 ROS 去除剂）处理。 然后将细胞用 5µM CellROX Green 试剂和Hoechst 33342在完全培养基中 37°C 染色 30 分钟，用PBS洗涤，并在 Thermo Scientific Cellomics ArrayScan VTI 上成像。当 NAC 存在时观察到荧光信号减弱，证实了 CellROX Green 信号的产生是由于样品中存在 ROS。

表 1.几种荧光氧化应激传感器的特点。

简化您的工作流程

与传统的二氢二氯荧光素染料（例如H₂DCFDA）不同，CellROX Green、CellROX Orange和CellROX Deep Red试剂可以直接添加到含有血清的培养基中，简化您的实验。此外，所有三种CellROX试剂与H₂DCFDA相比都显示出优异的光稳定性。（来自BioProbes 65的pdf）这种光稳定性有助于确保更可靠和可重复的数据，并且随着时间的推移对荧光成像尤为重要。

多路复用的优势

CellROX ROS传感器可靠地测量氧化应力，并与众多实验平台兼容。随着其他荧光颜色的引入，CellROX试剂现在更容易与其他活细胞探针结合使用，以实现更完整的细胞健康多色分析。

仅供研究使用。不可用于诊断操作。