プロテアーゼ/ホスファターゼ阻害剤

プロテアーゼおよびホスファターゼは、細胞内の様々な生化学的経路において重要性の高い酵素です。細胞修復や細胞外物質の消化をはじめとした数多くの細胞機能には、プロテアーゼが不可欠となります。ホスファターゼは、真核細胞内のシグナル伝達機構を調節する上で重要な役割を果たします。プロテインキナーゼを用いて、リン酸をATPからタンパク質中のセリン/トレオニン/チロシン残基へと移動させます；ホスファターゼは、ホスホリル基を除去します。リン酸化は、タンパク質における最も一般的な翻訳後修飾です。各残基でリン酸化が発生する割合は、以下の通りです：リン酸化全体の約80%がセリン残基で発生；20%がスレオニン残基で発生；0.1～1%がチロシン残基で発生。

全ての生物には、タンパク質分解酵素(プロテアーゼおよびペプチダーゼ)が存在しています。全細胞中において、プロテアーゼおよびホスファターゼの活性は局在化や阻害作用によって厳密に調整されるため、細胞タンパク質のランダムな損傷を防止し、シグナル伝達経路の適切な機能を維持することができます。細胞が溶解すると、厳密に制御された細胞環境が崩壊するため、プロテアーゼやホスファターゼの制御がきかなくなります。こうした未制御状態では、総タンパク質の回収率が低下し、タンパク質活性の状態が生物学的に意義を失う結果に繋がります (リン酸化状態) 。

プロテアーゼ阻害剤は生物学的/化学的な化合物であり、可逆的または不可逆的にプロテアーゼへ結合します。既知プロテアーゼの大半は、ペプチド結合の切断に関与する官能基に基づいて、進化的に異なる4種類の酵素ファミリーいずれかに属します。既知ホスファターゼは、セリン/スレオニン/チロシンいずれかのリン酸基の切断に特異性があります。現在までに多数の化合物が同定され、これらの酵素を不活性化やブロックに使用されてきました。しかし上記のような特異性があるため、あらゆるタイプのプロテアーゼやホスファターゼへ有効に作用する、「万能型」の物質は存在しません(下表をご覧ください)。

むしろ、通例は数種の阻害剤の混合物や「カクテル」を調製することによって、目的ターゲットのタンパク質抽出物の分解を阻止します。プロテアーゼ阻害剤は多くのケースにおいて必須となりますが、ホスファターゼ阻害剤はリン酸化状態(活性化状態)の研究にのみ使用されています。特定の研究実験では単一の阻害剤やカスタマイズされた混合物の使用が必要な場合がありますが、適切なプロテアーゼ阻害剤カクテルを使用すれば、大半のタンパク質は保たれます(下表の次項をご参照ください)。

各プロテアーゼ阻害剤と幅広いready-to-useなプロテアーゼ/ホスファターゼ阻害剤カクテルを取り揃えています。阻害剤カクテルは、100Xカクテル溶液(Halt Cocktails)またはクイック溶解錠剤(Pierce Tablets)の2種類からご選択いただけます。いずれのカクテルも、細胞溶解やタンパク質抽出の特異的/一般的なニーズに対応します。これらの阻害剤は、培養細胞・動物組織・植物組織・酵母・細菌などからタンパク質を抽出する際に、タンパク質を保護する用途に適しています。

当社のプロテアーゼ阻害剤のカクテルと錠剤は、セリン/システイン/アスパラギン酸のプロテアーゼおよびアミノペプチダーゼを標的とします。メタロプロテイナーゼを阻害するには、オプションのEDTAを添加してください (EDTAは、カクテルタイプでは個別バイアルとして同封されていますが、錠剤タイプでは錠剤自体に含まれています) 。ホスファターゼ阻害剤のカクテルと錠剤には、セリン/スレオニン/チロシンなどのホスファターゼを標的とする化学化合物が含有されています。

また、プロテアーゼおよびホスファターゼの2種類の阻害剤を、カクテル/錠剤の両タイプでご購入可能です。この阻害剤は、タンパク質の分解を抑止する上にリン酸化を維持させます。つまり、たったひとつの溶液/錠剤阻害剤を用いるだけで、タンパク質を完全に保護することができます。

Halt 阻害剤カクテルとPierce阻害剤錠剤の全製品は、Thermo Scientific Pierce タンパク質抽出溶液や、自作/他の市販の細胞溶解液に適合性があります。