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最高の結果を得るために、実験を最適化してください。お客様の実験ニーズを満たすために、当社は重要なヒントやコツに関する詳細な知識ベースを集めました。
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ラボの分析の複雑さと、透過型（カラー）カメライメージングと蛍光型（モノクロ）カメライメージングのどちらを必要とするか、またはその両方に基づいて選択する必要があります。日常作業や基礎的な分析では、シンプルな透過光イメージング（通常は細胞培養施設で使用）用のEVOS™XL Core Imaging Systemや、3色蛍光イメージング専用のFLoid™ Cell Imaging Stationを提供しています。EVOS™XL Imaging Systemは、EVOS™XL Core Imaging Systemとは異なり、大型のモニター、5つの対物レンズタレット（EVOS™XL Coreでは4つの対物レンズのみ）を備えており、ネットワーク接続や細胞カウントが可能です。
蛍光波長や細胞カウント、タイムラプスイメージングにより多くのオプションが必要な場合は、EVOS™FL Imaging SystemまたはEVOS™FL Auto Imaging Systemをご検討ください。EVOS™FL Auto Imaging Systemは、自動イメージングなどを備えた、当社の汎用性の高いオプションです。カラーカメラとモノクロカメラのオプションがあり、当社のEVOS™Onstage Incubatorシステムと組み合わせることもできます。
はい、Countess™II FLではEVOS™ Imaging Systemと同じライトキューブを使用します。Countess™IIではライトキューブを使用しません。
すべてのEVOS™ Imaging Systemは倒立顕微鏡です。CC対物レンズの場合、レンズは作動距離が短いため、薄いガラス製またはプラスチック製のカバースリップにのみ適しているため、カバースリップを裏返して対物レンズに直面する必要があります。LWD対物レンズは、マイクロプレート、ペトリディッシュ、または培養フラスコの底から観察できるように設計されています。これらの対物レンズの作動距離が長いため、さまざまな容器のプラスチック底などの厚い材質に対応します。
FLoid™ Cell Imaging Stationは、シンプルで使いやすい透過光および3色蛍光顕微鏡です。青、緑、可視赤色光（Texas Red™色素）の3つの蛍光色が設定されており、他のフィルターセットには変更できません。倍率は20x対物レンズでも設定されます。この対物レンズは取り外したり変更したりすることはできません。
一方、EVOS™FL Imaging Systemは使いやすい透過光および蛍光顕微鏡であり、対物レンズタレットやライトキューブトレイを制御できるため、倍率や蛍光検出の複数のオプションを可能にします。EVOS™FL Imaging Systemでは、23種類のライトキューブと18種類の対物レンズ（2倍~100倍）を使用できます。
GFPライトキューブ（Ex = 470/22、Em = 510/42）は、459～481 nmの総励起範囲、各サイド11 nmをカバーする470 nmの励起を行います。その発光は、各側面に21 nmで510 nmの中央に配置され、489～531 nmの総発光バンドパス範囲になります。
自動細胞カウント機能を備えているのは、EVOS FL Auto Imaging SystemとEVOS FL Auto 2 Imaging Systemのみです。EVOS XL、EVOS FLおよびEVOS FL Color Imaging Systemは、画面画像上に最大6種類のラベルをタグ付けできる手動細胞カウントツールを提供します。
カスタムベッセルホルダーの作成オプションもご用意しています。カスタム注文の開始については、営業担当者にお問い合わせください。
ベッセルホルダーを70%エタノールまたは4,000 ppm過酸化水素（H2O2）で湿らせたペーパータオルまたはKimwipes組織で拭きます。
EVOSベッセルホルダーは、歪む可能性があるため、重い物体との接触から保護してください。ホルダーが歪んでステージ上に平らに置けないと、ホルダーは使用できません。個別に蓋付きのプラスチック容器または頑丈な箱に入れて保管してください。
可能ですが、当社では温度だけでなく湿度やガス濃度もコントロールできるEVOS Onstage Incubator（カタログ番号AMC1000）もご用意しています。EVOS Onstage Incubatorは、EVOS XLおよびFL Imaging Systemで使用することはできません。
はい、EVOS Light ShieldボックスをTokai Hit Thermoplateおよびステージホルダーの上に配置できます。
Thermoplateとベッセルホルダーを、70%エタノールで湿らせたペーパータオルまたはキムワイプで拭きます。
ガラス製加熱プレートは厚さ0.5 mmで、培養プレートやガラス底ディッシュの厚さを含めて、長い作動距離（LWD）対物レンズの使用をお勧めします。
基本的な違いは、励起用のチャンネル数（5と7）、明視野、広視野、共焦点でイメージングする機能、対物レンズタレットで使用できるポジションの数です。CellInsight™CX5システムは、5チャンネルでの照射、明視野および広視野でのイメージング、1ポジション対物レンズタレットを備えたもっとも基本的なHCSシステムです。CellInsight™CX7システムとArrayScan™システムは、7チャンネルでの照明、明視野、広視野、共焦点でのイメージングおよび3ポジション（CX7）または4ポジション対物レンズタレット（ArrayScan™システム）のいずれかを備えています。ArrayScan™Systemにはライブセルイメージングのオプションが追加されています。詳細については、こちらをご覧ください。
CellInsight™システムおよびArrayScan™システムに関する問題は、機器カスタマーサービスにお問い合わせください。連絡先はinstrumentservices@thermofisher.comです。
一部の細胞種はフェノールレッドを蓄積するため、多くの蛍光プローブを使用する際に問題が生じる可能性があります。フェノールレッドは可視波長色素を消光させることができ、フェノールレッドは非蛍光ですが、さまざまな不純物が蛍光を発する場合があります。当社では、フェノールレッドフリー培地を多数ご用意しています。当社のLive Cell Imaging Solution（HEPESベース）およびFluoroBrite™DMEは、フェノールレッドフリーであり、非自己蛍光となるように最適化されています。
ほとんどの培地にはフェノールレッドが含まれており、可視波長で蛍光色素を消光させる可能性があります。ほとんどの培地には、シグナル/バックグラウンドを低減できるリボフラビンなどの自己蛍光成分も含まれています。当社は蛍光イメージング用に最適化された FluoroBrite™DMEM およびHEPESベースの Live Cell Imaging Solutionを提供しています。フェノールレッド不含の培地も多数ご用意しています。しかし、これらのどれも実験に適切なオプションでない場合は、Backdrop™Background Suppressor ReadyProbes™Reagentも提供しています。この試薬は、培地の自己蛍光を消光するために添加できます。
イメージングのために色素を照射すると、色あせたり「光退色」したりするため、不要な調光が発生し、時間の経過とともに検出効率が低下します。退色防止封入剤は、光退色を大幅に低減することができます。生細胞に標識を付けるには、ProLong™Live Antifade試薬の使用が有用です。ラベリング後に固定細胞を封入し、すぐにイメージングしてから廃棄する場合、SlowFade™Diamond Antifade Mountantは液体のままですが、屈折率は良好です。サンプルを封入してスライドを保存する場合、ProLong™Diamond Antifade Mountantは屈折率が向上し、サンプルを数週間または数カ月保管できます。他の褪色防止封入剤とは異なり、これらは蛍光タンパク質での迅速な観察に適しており（蛍光タンパク質の保管は不可）、DAPI含有タイプと不含タイプがあります。これらの詳細については、以下を参照してください。
これはすぐに確認できますが、ProLong Live Antifade Reagentでサンプルをアーカイブすることはできません。
はい。ProLong Live Antifade Reagentをあらかじめ温めておいたバッファーまたは培地で洗浄し、標準的な固定および透過処理ステップに進むことをお勧めします。
水の蒸発は、ProLong、ProLong Gold、ProLong DiamondおよびProLong Glass褪色防止用封入剤の「硬化」プロセスです。水の蒸発はポリマーを硬化させます。化学反応はありません。SlowFade試薬またはProLong Live製品には硬化は、ありませんのでご注意ください。
いいえ、使用できません。ProLong、ProLong Gold、ProLong DiamondおよびProLong Glass試薬は、固定または固定/透過サンプルでの使用を目的としています。ProLong Live Antifade Reagentのみ（カタログ番号 P36974およびP36975）は、生細胞での使用を目的としています。
DyLight色素共役タンパク質や他の有機色素でのProLong、ProLong Gold、ProLong DiamondまたはProLong Glassの試験は行っていませんが、適合性が高い可能性があります。
この製品のNucBlue色素の濃度は独自に調整したもののため、開示できません。
まず、適切なレベルの取り込みを確保するために、EdUの量と細胞とのインキュベーション時間を最適化することをお勧めします。増殖培地中のEdUに曝露される時間を最適化する際に、細胞の通常の複製速度を考慮してください。
次に、銅保護剤の使用を最適化することをお勧めします。
いいえ。30分経過すると、緩衝剤添加剤の大部分は酸化されます。
目的の細胞の通常の複製速度を考慮し、複数回のEdUを用いて1サイクルの培養を行います。たとえば、細胞が24時間ごとに分裂する場合は、6～8時間ごとに新鮮なEdUを3または4回添加し、最終添加後2~3時間以内に固定および透過処理を行うことを検討します。これにより、複製されている集団の大部分で高レベルのEDU組み込みが保証されます。このポジティブコントロールにより、クリック反応と成分が適切に機能していることを証明できます。
SuperBoostチラミドキットはポリHRP標識抗体を使用します。これにより、抗体あたりにより多くの西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）分子が得られます。オリジナルのキットでは、HRPと直接結合した抗体とストレプトアビジンを使用していたため、抗体またはストレプトアビジンあたりの数が制限されていました。
はい。このキットには、抗体とチラミドを順次適用し、抗体の間のH2O2を用いてHRPをクエンチするステップが含まれます。
バックグラウンドを制限するには、内在性ペルオキシダーゼを不活性化するために、3% H2O2で60分間プレブロッキングステップを実行することをお勧めします。標識の局在を低減させるには、一次および二次抗体および色素チラミドの最終濃度を最適化することをお勧めします。サンプル上の色素とチラミドのインキュベーション時間の制限もできます。
既存のAlexa Fluor二次抗体と比較して、新しいAlexa Fluor Plus二次抗体は、独自の色素化学的性質を利用しており、高い感度とシグナル対ノイズ比を実現します。
明るいため、オリジナルのAlexa Fluor二次抗体よりも低いAlexa Fluor Plus二次抗体の最終濃度を使用できる可能性が高くなります。
すべてのAlexa Fluor Plus二次抗体は、SlowFade DiamondおよびProLong Diamond退色防止用封入剤に対応しています。
これを行うことはお勧めしません。Image-iT固定液はPBS中で4%のホルムアルデヒドです。そのため、培地と直接混合すると、固定剤の最終濃度が希釈され、最適な固定が得られなくなる可能性があります。培地に直接固定剤を加える必要がある場合は、ホルムアルデヒドなどの高濃度での固定剤の16%（カタログ番号28906）または37%（カタログ番号9311)を使用を検討してください。
はい、アルコールは含まれていません。
はい。アルデヒドベースの固定は、サポニンなどの他の透過化試薬と互換性があります。
BODIPY FL色素はLDLの疎水性ドメインに複合体化されており、共有結合していません。
いや 界面活性剤や界面活性剤に曝露すると、BODIPY FL色素がLDLから解離できます。
BODIPY FL LDLを最初に生細胞に適用してから固定する場合は、メタノールまたはアセトン固定の使用はお勧めしません。アルコール、アセトンおよびその他の有機溶媒に曝露すると、BODIPY FL色素がLDLから解離する可能性があります。
BODIPY FL LDLのLDLはアセチル化されていません。
酸化プロセス（硫酸銅による酸化など）によってBODIPY FL色素が分解される可能性があるため、推奨しません。
pHrodo Red色素はLDLに共有結合しています。
pHrodo赤色および緑色色素は、pH感受性色素です。細胞コンパートメントのpHを検出するために生細胞でのみ使用する必要があります。細胞を固定すると細胞膜が損なわれ、サンプルが保持されている緩衝液のpHのみを測定します。
この製品には、アセチル化または酸化LDLは含まれていません。
Image-iT TMRM試薬は、TMRM色素のすぐに使用可能な1,000倍濃縮ストック溶液です。100 µMのTMRMのバイアルを希釈なしDMSOに5本含み、各バイアルに100 µLの容量が含まれています。TMRMパウダー（カタログ番号T668）はこのキットには含まれていません。
TMRMは動的ミトコンドリア染色剤です。TMRMはミトコンドリアへの共有結合がないため、膜電位の変化に応じてミトコンドリアに出入りできます。一方、MitoTracker色素は、ミトコンドリアへの共有結合を可能にする反応性クロロメチル基を有しています。その結果、正常な膜電位を持つミトコンドリア内に蓄積すると保持されます。
はい、血清を含む培地にTMRMを追加できます。血清成分は色素に非特異的に結合することがあるため、非血清培地やバッファーで同じ細胞を染色する場合と比較して、血清を含む培地でサンプルを染色する際には、最終使用濃度が高い場合があります。
研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。