HILIC 고정상 | Thermo Fisher Scientific

HILIC에 사용되는 고정상은 매우 다양하며 사용자가 종종 HILIC 컬럼을 서로 바꿔 사용할 수 있다고 오해하는 경우가 있습니다. 특정 컬럼-용매-분석물질 시스템의 HILIC 머무름 메커니즘을 이해하는 것은 올바른 HILIC 고정상을 선택하는 과정에서 매우 중요하며 이는 성공적인 애플리케이션으로 이어집니다.

HILIC 고정상은 다음을 기준으로 특성이 결정됩니다.

친수성의 정도
친수성-소수성 그룹에 대한 선택성
위치 및 구조적 이성질체에 대한 선택성
정전기 상호작용의 정도
고정상의 산-염기 속성

컬럼 선택

극성 분석물질의 최적의 머무름 성능을 위해서는 분석물질 로그 P 또는 로그 D 값을 HILIC 상의 극성의 정도에 매치시키는 것이 중요합니다. 이 표는 Thermo Scientific HILIC 컬럼의 상대적 친수성 및 이온 교환 특성을 나타내며 고정상 선택의 예비 가이드로 사용할 수 있습니다.

HILIC 선택성

고정상 특성은 간단한 시각적 평가 및 컬럼 선택성을 비교할 수 있는 2차원 레이더(radar) 그래프로 설명할 수 있습니다. 아래 레이더 그래프의 각 축은 다음 파라미터 중 하나를 나타냅니다.

α (CH2) – 소수성의 정도
α (OH) – 친수성의 정도
α (V/A) – 구조적 이성질체에 대한 분리 인자
α (2dG/3dG) – 위치 이성질체에 대한 분리 인자
α (AX) – 음이온 교환 상호작용의 정도
α (CX) – 양이온 교환 상호작용의 정도
α (Tb/Tp) – 고정상의 산/염기 속성
k U – 절대 머무름

참고: 선택성 값이 1이면 분리가 없는 것입니다(α= k2/k1이므로 k1= k2일 때 α= 1).

Syncronis HILIC

Thermo Scientific™ Syncronis™ HILIC 컬럼은 하전 및 중성 극성 화합물의 머무름을 향상시킵니다. 이 상은 탁월한 피크 모양과 감도를 나타냅니다.

Syncronis HILIC 고정상은 고순도, 고표면적 실리카에 단량체로 결합된 술포베타인형(sulfobetaine type)의 쌍성이온성(zwitterionic) 작용기를 가지고 있습니다. 술포베타인 양성이온은 1:1 비율로 양성(4가 암모늄)과 음성(술폰산)기를 모두 가지고 있어 순 표면 전하가 0입니다. 분석물질과의 더 낮은 2차 정전기 상호작용을 이끄는 평형 정전기력으로 인해, 이 상호작용을 방해하기 위해서는 더 낮은 완충액 농도가 필요합니다. 이 상의 전하 밀도는 pH 독립적이며 이동상 pH의 최적화는 분석물질에 의해서만 결정됩니다.

LC-MS/MS에 의한 혈장 edrophonium, neostigmine 및 pyridostigmine 분석

컬럼: Syncronis HILIC, 1.7 µm, 100 mm x 2.1 mm
보호 컬럼: UHPLC 필터/홀더
이동상 A:acetonitrile / ammonium formate, 100 mM, pH 3.3 (90:10 v/v)
유속: 500 µL/min
컬럼 온도: 25°C
압력: 210 bar
주입량: 2µL
검출: MS, +ESI 275 °C, 3.0 kV

Accucore 150-Amide-HILIC

150Å의 기공(pore) 직경의 고형 코어 입자에 결합된 아미드(Amide) 상
HILIC 모드에서 광범위한 친수성 분석물질(analyte)의 우수한 머무름
글라이칸(glycan) 등의 친수성 바이오분자에 권장

아미드 결합 상은 고정상과 분석물질 사이에 강력한 수소 결합 상호반응을 제공하여 다른 HILIC 상에 비해 고유한 선택성을 갖습니다. Thermo Scientific™ Accucore™ 150-Amide-HILIC 컬럼은 더 큰 기공 크기의 고형 코어 입자와 결합하여 탄수화물 및 펩타이드를 포함한 다양한 친수성 분자를 분리하는 데 적합합니다. 결과적으로 Accucore 150-Amide-HILIC은 글라이칸 분리를 위한 탁월한 선택입니다.

2-AB 표지된 덱스트란 래더(dextran ladder)

컬럼: Accucore 150-Amide-HILIC, 2.6µm, 100 x 2.1mm
부품 번호: 16726-102130
이동상: A) Acetonitrile B) 50mM ammonium formate (pH 4.5)
유속: 500µL/min
배압(Backpressure): 110bar
온도: 60°C
주입: 2µL, 5µL
검출: FLEra 300nm, Era 420nm
시료: 2-aminobenzamide labeled dextran ladder

기울기(gradient)

시간(min) B%
0	20
40	50
45	50
45.5	20
50	20

(A) 시료 2μL 주입, 11개 글라이칸 분리
(B) 시료 5µL 주입, 기울기 상승의 뒷부분 확대. 10개의 글라이칸 추가 검출.

Accucore Urea-HILIC

고형 코어 입자 위에 결합된 요소(urea) 상은 극성 분석물질(analyte)에 고유한 선택성을 제공합니다. Thermo Scientific™ Accucore™ Urea-HILIC 컬럼은 하전 및 중성 극성 화합물에 우수한 머무름 성능을 제공합니다.

진통제 화합물

컬럼:Accucore Urea-HILIC, 2.6µm, 100 x 2.1mm
이동상: A) 물 B) Acetonitrile C) 100mM
pH 4.9로 조정된 Ammonium Acetate.
조성 10:80:10, A:B:C
유속: 300µL/min
실행 시간: 2분 온도: 35°C
주입: 부분 루프(partial loop) 모드로 2µL에서 10µL
주입 세척 용매: 물:아세토니트릴 20:80
검출: UV @ 230nm
배압(Backpressure): 71bar

Acclaim HILIC-10

Thermo Scientific™ Acclaim™ HILIC-10 컬럼은 당사 독점의 친수층으로 공유 변형된(covalently modified) 고순도, 완전 다공성 실리카를 기반으로 합니다. 이 물질에서 확인된 양이온 교환 특성은 탈양자된 실라놀(deprotonated silanol) 작용기(특성 분석 검사에 사용되는 이동상 pH 조건 하에서)의 잔존 때문입니다. Acclaim HILIC-10은 하전 및 중성 극성 화합물에 우수한 머무름 성능을 제공합니다.

이 상은 이동상에서 아세토니트릴 함량의 함수로서 "U 자형" 머무름 프로파일을 갖는 듀얼 모드 머무름 형태를 나타냅니다. 향상된 머무름 성능은 아세토니트릴의 낮은 수준과 높은 수준(각각 RPLC 및 HILIC 모드) 모두에서 입증됩니다.

제약

컬럼: Acclaim HILIC-10, 3µm, 150mm x 4.6mm
이동상: 90/10 v/v CH₃CN/10mM(전체) NH₄OAc (pH 5)
유속: 1mL/min
주입량: 2µL
온도: 30ºC
검출: UV at 230nm
시료: 1) Acetaminophen (0.1mg/mL) 2) Salicylic acid (0.1) 3) Aspirin (0.2) 4) Penicillin G (0.1) 5) Metformin (0.1)

Hypersil GOLD HILIC

Thermo Scientific™ Hypersil GOLD™ HILIC 컬럼은 산성 또는 중성의 극성 화합물 분석에 권장됩니다.

컬럼: Hypersil GOLD HILIC, 5µm, 150 x 4.6mm
이동상: 50nM ammonium acetate 완충액 (pH 5)/Acetonitrile (10:90)
유속: 0.4mL/min
온도: 30°C
검출: 205nm
주입량: 10µL
시료: 1) Cyanuric acid 2) Melamine

Hypersil GOLD Silica

고순도 염기 비활성화 실리카 매질
탁월한 피크 형태 및 감도

Thermo Scientific™ Hypersil GOLD™ Silica 컬럼은 모든 Hypersil GOLD 상의 기초가 되는 것 외에도 HILIC과 정상 조건 모두에서 폭넓게 활용됩니다. 이 물질에서 확인된 양이온 교환 특성은 탈양자된 실라놀(deprotonated silanol) 작용기(특성 분석 검사에 사용되는 이동상 pH 조건 하에서)의 존재 때문입니다.

Hypersil GOLD Silica는 염기성 또는 중성의 극성 화합물 분석에 권장됩니다.

Syncronis Silica

Thermo Scientific™ Syncronis™ Silica 컬럼은 고순도, 고표면적 실리카를 제공합니다.

HILIC 및 정상 모드에서 중간 극성의 산 또는 중성 화합물의 크로마토그래피를 위한 강력하고 효율적인 도구 역할을 합니다. 이 물질에서 확인된 양이온 교환 특성은 탈양자된 실라놀(deprotonated silanol) 작용기(특성 분석 검사에 사용되는 이동상 pH 조건 하에서)의 존재 때문입니다.

Accucore HILIC

이 물질에서 확인된 양이온 교환 특성은 탈양자된 실라놀(deprotonated silanol) 작용기(특성 분석 검사에 사용되는 이동상 pH 조건 하에서)의 존재 때문입니다.

Thermo Scientific™ Accucore™ HILIC 컬럼은 염기성 또는 중성의 극성 화합물 분석에 권장됩니다.

카테콜아민(Catecholamines)

컬럼: Accucore HILIC, 2.6µm, 50 x 2.1mm
이동상: 85:15 (v/v) acetonitrile/100mm ammonium formate (pH 3.2)
유속: 2mL/min
온도: 40°C
검출: UV 280nm
주입량: 5µL
배압(Backpressure): 157bar
분석물질: 1) Catechol 2) 5-HIAA 3) DOPAC 4) Serotonin 5) L-tyrosine 6) Dopamine 7) L-DOPA