HPLC 분석법(Method) 전환

 
 
 
HPLC 분석법(Method) 전환

 
 
 
그래디언트 지연

그래디언트 지연 부피(GDV)    

그래디언트 지연 부피는 용리액의 혼합 지점에서 컬럼 헤드까지의 부피를 나타냅니다.

• 기기의 GDV는 성공적인 HPLC 또는 UHPLC 분석법(Method) 전환에 있어 중요한 역할을 합니다. 자세히 알아보기 › 
• 기기 간 GDV 수정을 통해 분해능과 머무름 시간을 변경할 수 있으므로, GDV 변경은 분석법(Method) 전환의 일반적인 솔루션입니다.   자세히 알아보기 ›

GDV는 모든 기기에 대해 가변적이므로 부피 차이를 매칭시키는 작업이 항상 쉽지만은 않습니다.

그래디언트 지연 부피에 영향을 미치는 요소

GDV는 이동상 혼합 지점과 컬럼 헤드 사이의 전체 부피에 의해 영향을 받지만 펌프가 일반적으로 가장 큰 영향을 줍니다. 혼합기 부피 외에 저압 혼합 펌프가 고압 혼합 펌프에 비해 훨씬 높은 GDV를 나타내므로 펌프 유형이 매우 중요합니다.

시료 부피와 주변 이동상의 혼합 효과도 새로운 시스템에서 피크 형상의 재구성과 관련이 있습니다. 작은 튜브 크기는 컬럼 전후에서의 피크 분산을 줄이는 데 도움이 될 수 있습니다. 부피가 클수록 시료 플러그의 컬럼 주입 전 혼합 효과가 개선되며, 시료 용매의 용리 강도가 높은 경우 특히 조기 용리 피크에 긍정적인 영향이 있습니다.

검출 전 모든 부피가 피크 분산에 영향을 주기 때문에 분석법(Method) 전환 시 검출기 플로우 셀 부피에 주목할 필요가 있습니다. 플로우 셀 부피는 피크 부피에 비해 적어야 하며 검출기는 일관적이고 적절한 형상을 투영할 수 있도록 설정되어야 합니다.    

 
 
 
가열 모드

가열 모드의 효과

분석법(Method) 전환 시 컬럼 및 이동상의 온도 조절 또는 가열의 역할이 과소평가되는 경우가 많습니다.

정지 공기 및 강제 순환 공기 등의 다양한 컬럼 가열 모드와 컬럼 전 가열은 방사형 또는 축 방향 온도 그래디언트로 인한 분리 선택성에 다양하게 영향을 줍니다. 이러한 효과는 컬럼 재료의 마찰 가열이 발생하는 400 bar를 초과하는 압력에서의 분리에서 주로 나타납니다.

 
 
 
추가 부피

추가 컬럼 부피의 효과

새 기기의 추가 컬럼 부피(ECV)가 원래 시스템과 일치하는지 확인하여 재검증 없이 분석법(Method)을 성공적으로 전환할 수 있습니다.

컬럼 전 부피는 시료 플러그를 확장하고 부드러운 그래디언트를 만들어 줍니다. 컬럼 후 부피는 분석물 밴드 확장에 영향을 미칩니다. 컬럼 전후 부피 모두 분석물의 머무름 시간에 영향을 줍니다.

특히 HPLC에 비해 UHPLC 분석법(Method)에서 데이터 변동성이 더욱 두드러집니다. 특히 서로 다른 시스템 모델이나 제조업체 사이에서 기존에 확립된 분석법(Method)을 전환할 때는 분석법(Method) 전환 과정에서 ECV의 변화를 염두에 두어야 합니다. 

분석법(Method) 전환 시 머무름 시간 재현성 문제를 비롯한 몇 가지 문제의 발생 가능성과 복잡성을 간과해서는 안 됩니다. 전환 프로세스를 성공적으로 진행할 수 있도록 분석법(Method) 매개변수, 시스템 특징 및 호환성을 신중하게 분석해야 합니다. 다음은 분석법(Method) 전환을 준비하고 문제를 해결하는 데 도움이 되는 몇 가지 전문적인 리소스입니다.

 
 
 
리소스

 
 
 
문의하기

* 필수 항목