Microscopic views of fluorescence fade in cultured cells after 24 and 36 s exposure

형광 photobleaching 방지

특히 표적의 발현률이 낮거나 여기(excitation) 광선이 고강도 또는 장기간 노출이 지속되는 경우, 비가역적 광표백 프로세스를 통한 형광 손실로 감도가 크게 감소할 수 있습니다. 광표백과 관련된 메커니즘은 세포 생존력과 데이터 품질에 부정적인 영향을 미칠 수 있는 광독성(phototoxicity)과도 관련이 있습니다.

시료의 광표백을 최소화하기 위해 당사는 live-cell 및 fixed-cell 에서 형광단 광안정성을 향상시키는 광퇴색 방지 시약을 개발했습니다. 당사는 즉각적인 이미징 및 형광 샘플의 장기 보관을 위한 제품과 함께 봉입(Mounting) 및 대조 염색(Counter staining)을 동시에 수행할 수 있는 제품을 제공합니다. 광표백을 감소시킨다는 것은 형광 샘플을 장기간 보관할 수 있도록 하고 감도를 높힐 수 있으며 형광 신호의 더 나은 정량화를 의미합니다.

이 페이지의 내용:

이미징 실험에 사용할 Antifade선택 방법

 ProLong GlassProLong DiamondProLong Gold
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일반 사양
형태바로 사용 가능한 hard-setting mountant
굴절률1.52(경화 후)1.47(경화 후)1.47(경화 후)
어떤 유형의 이미징을 계획하고 있습니까?
검체 유형동물 세포/조직(fixed)
Live-cell 이미징   
Fixed-cell, 즉각적인 이미징   
Fixed-cell, 장시간 이미징(시료 두께 최대 10 µm)
Fixed-cell, 장시간 이미징(시료 두께 최대 150 µm)
  
최상의 결과를 얻을 수 있는 현미경 대물 렌즈 유형은 무엇입니까? (모든 대물 렌즈 유형이 이 시약과 호환됨)
유침(Oil immersion) 대물 렌즈
  
글리세롤 교정 대물 렌즈 
물 또는 공기 교정 대물 렌즈   
시료에 포함되는 형광단에는 어떤 것이 있습니까?
Alexa Fluor 염료
일반 염료
 
형광 단백질
 
봉입제(mountant)에 대조염색제(counterstain)를 첨가하고 싶으십니까?
DAPI로 대조염색
SYTOX Deep Red로 대조염색
대조염색하지 않음
 SlowFade GlassSlowFade DiamondSlowFade Gold
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일반 사양
형태바로 사용 가능한 soft-setting mountant
굴절률1.521.421.42
어떤 유형의 이미징을 계획하고 있습니까?
검체 유형동물 세포/조직(고정)
Live-cell 이미징   
Fixed-cell, 즉각적인 이미징
Fixed-cell, 장시간 이미징(시료 두께 최대 10 µm)   
Fixed-cell, 장시간 이미징(시료 두께 최대 500 µm)
  
최상의 결과를 얻을 수 있는 현미경 대물 렌즈 유형은 무엇입니까? (모든 대물 렌즈 유형이 이 시약과 호환됨)
유침 대물(Oil immersion) 렌즈   
글리세롤 교정 대물 렌즈
물 또는 공기 교정 대물 렌즈   
시료에 포함되는 형광단에는 어떤 것이 있습니까?
Alexa Fluor 염료
일반 염료
 
형광 단백질
 
봉입제(mountant)에 대조염색제(counterstain)를 첨가하고 싶으십니까?
DAPI로 대조염색
SYTOX Deep Red로 대조염색
 
  
대조염색하지 않음
 ProLong Live
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일반 사양
형태100배 농축액
굴절률1.3
어떤 유형의 이미징을 계획하고 있습니까?
검체 유형동물 세포/조직(live)
Live-cell 이미징
Fixed-cell, 즉각적인 이미징 
Fixed-cell, 장시간 이미징(시료 두께 최대 10 µm) 
Fixed-cell, 장시간 이미징(시료 두께 최대 150 µm) 
최상의 결과를 얻을 수 있는 현미경 대물 렌즈 유형은 무엇입니까? (모든 대물 렌즈 유형이 이 시약과 호환됨)
유침(Oil immersion) 대물 렌즈 
글리세롤 교정 대물 렌즈
물 또는 공기 교정 대물 렌즈
시료에 포함되는 형광단에는 어떤 것이 있습니까?
Alexa Fluor 염료
일반 염료
형광 단백질
봉입제에 대조염색제를 첨가하고 싶으십니까?
DAPI로 대조염색
 
SYTOX Deep Red로 대조염색 
대조염색하지 않음
 ProLong Glass
(경화)		SlowFade Glass
(비경화)		CytoVista 시약
(비경화)
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일반 사양
형태바로 사용 가능한 경화(하드 세팅) 봉입제

최대 150 mm 두께 시료의 빠른 이미징용		바로 사용 가능한 비경화(소프트 세팅) 봉입제

최대 500 mm 두께 시료의 빠른 이미징용		바로 사용 가능한 비경화(소프트 세팅) 시약 제품군

3D 세포 배양의 빠른 이미징을 위한 3D 세포 배양 투명화 및 염색 키트(최대 1 mm 두께의 오가노이드 및 스페로이드)

두꺼운 조직(최대 10 mm)의 빠른 이미징을 위한 조직 투명화 및 염색 키트
굴절률1.52(경화 후)1.521.48(최대 1 mm 두께의 오가노이드/스페로이드)

1.53(최대 10 mm 두께의 조직 검체)
어떤 유형의 이미징을 계획하고 있습니까?
검체 유형동물 세포/조직(고정)동물 세포/조직(고정)동물 세포/조직(고정)
Fixed-cell 이미징, 즉각적인 이미징 
Fixed-cell, 장시간 이미징
  
시료의 두께는 얼마입니까?
최대 10 μm
  
최대 150 μm
  
최대 500 μm 
 
최대 1 mm  
최대 10 mm  
최상의 결과를 얻을 수 있는 현미경 대물 렌즈 유형은 무엇입니까? (모든 대물 렌즈 유형이 이 시약과 호환됨)
유침 대물(Oil immersion) 렌즈
글리세롤 교정 대물 렌즈  
시료에 포함되는 형광단에는 어떤 것이 있습니까?
Alexa Fluor 염료
일반 염료
형광 단백질
봉입제(mountant)에 대조염색제(counterstain)를 첨가하고 싶으십니까?
DAPI로 대조염색
 
SYTOX Deep Red로 대조염색
  
대조염색하지 않음
 이미징용 Image-iT 식물조직 투명화 및 봉입 시약
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일반 사양
형태이미징용 식물 조직 투명화 및 봉입을 위한 바로 사용 가능한 시약
굴절률1.45 (투명화 및 소프트 세팅 봉입 옵션)

1.415 (하드 세팅 봉입 옵션)
어떤 유형의 이미징을 계획하고 있습니까?
검체 유형식물 세포/조직 절편/전체 조직(고정)
Live-cell 이미징 
Fixed-cell 이미징
Fixed-cell 이미징, 장시간 이미징(시료 두께 최대 10 μm)
Fixed-cell 이미징, 장시간 이미징(시료 두께 최대 150 μm)
최상의 결과를 얻을 수 있는 현미경 대물 렌즈 유형은 무엇입니까? (모든 대물 렌즈 유형이 이 시약과 호환됨)
유침 대물(Oil immersion) 렌즈 
글리세롤 교정 대물 렌즈
물 또는 공기 교정 대물 렌즈 
시료에 포함되는 형광단에는 어떤 것이 있습니까?
가장 일반적인 조직학 염색
형광 단백질 
봉입제(mountant)에 대조염색제(counterstain)를 첨가하고 싶으십니까?
DAPI로 대조염색 
SYTOX Deep Red로 대조염색 
대조염색하지 않음

광퇴색 방지제, 봉입제 또는 투명화 시약을 사용하는 기법과 방법에 대해 자세히 알아보기

경화(하드 세팅)
 ProLong GlassProLong DiamondProLong Gold
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일반 사양
형태바로 사용 가능한 hard-setting mountant
굴절률1.52(경화 후)1.47(경화 후)1.47(경화 후)
어떤 유형의 이미징을 계획하고 있습니까?
검체 유형동물 세포/조직(fixed)
Live-cell 이미징   
Fixed-cell, 즉각적인 이미징   
Fixed-cell, 장시간 이미징(시료 두께 최대 10 µm)
Fixed-cell, 장시간 이미징(시료 두께 최대 150 µm)
  
최상의 결과를 얻을 수 있는 현미경 대물 렌즈 유형은 무엇입니까? (모든 대물 렌즈 유형이 이 시약과 호환됨)
유침(Oil immersion) 대물 렌즈
  
글리세롤 교정 대물 렌즈 
물 또는 공기 교정 대물 렌즈   
시료에 포함되는 형광단에는 어떤 것이 있습니까?
Alexa Fluor 염료
일반 염료
 
형광 단백질
 
봉입제(mountant)에 대조염색제(counterstain)를 첨가하고 싶으십니까?
DAPI로 대조염색
SYTOX Deep Red로 대조염색
대조염색하지 않음
비경화(소프트 세팅)
 SlowFade GlassSlowFade DiamondSlowFade Gold
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일반 사양
형태바로 사용 가능한 soft-setting mountant
굴절률1.521.421.42
어떤 유형의 이미징을 계획하고 있습니까?
검체 유형동물 세포/조직(고정)
Live-cell 이미징   
Fixed-cell, 즉각적인 이미징
Fixed-cell, 장시간 이미징(시료 두께 최대 10 µm)   
Fixed-cell, 장시간 이미징(시료 두께 최대 500 µm)
  
최상의 결과를 얻을 수 있는 현미경 대물 렌즈 유형은 무엇입니까? (모든 대물 렌즈 유형이 이 시약과 호환됨)
유침 대물(Oil immersion) 렌즈   
글리세롤 교정 대물 렌즈
물 또는 공기 교정 대물 렌즈   
시료에 포함되는 형광단에는 어떤 것이 있습니까?
Alexa Fluor 염료
일반 염료
 
형광 단백질
 
봉입제(mountant)에 대조염색제(counterstain)를 첨가하고 싶으십니까?
DAPI로 대조염색
SYTOX Deep Red로 대조염색
 
  
대조염색하지 않음
Live cell
 ProLong Live
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일반 사양
형태100배 농축액
굴절률1.3
어떤 유형의 이미징을 계획하고 있습니까?
검체 유형동물 세포/조직(live)
Live-cell 이미징
Fixed-cell, 즉각적인 이미징 
Fixed-cell, 장시간 이미징(시료 두께 최대 10 µm) 
Fixed-cell, 장시간 이미징(시료 두께 최대 150 µm) 
최상의 결과를 얻을 수 있는 현미경 대물 렌즈 유형은 무엇입니까? (모든 대물 렌즈 유형이 이 시약과 호환됨)
유침(Oil immersion) 대물 렌즈 
글리세롤 교정 대물 렌즈
물 또는 공기 교정 대물 렌즈
시료에 포함되는 형광단에는 어떤 것이 있습니까?
Alexa Fluor 염료
일반 염료
형광 단백질
봉입제에 대조염색제를 첨가하고 싶으십니까?
DAPI로 대조염색
 
SYTOX Deep Red로 대조염색 
대조염색하지 않음
3D 세포 배양 및 두꺼운 조직
 ProLong Glass
(경화)		SlowFade Glass
(비경화)		CytoVista 시약
(비경화)
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일반 사양
형태바로 사용 가능한 경화(하드 세팅) 봉입제

최대 150 mm 두께 시료의 빠른 이미징용		바로 사용 가능한 비경화(소프트 세팅) 봉입제

최대 500 mm 두께 시료의 빠른 이미징용		바로 사용 가능한 비경화(소프트 세팅) 시약 제품군

3D 세포 배양의 빠른 이미징을 위한 3D 세포 배양 투명화 및 염색 키트(최대 1 mm 두께의 오가노이드 및 스페로이드)

두꺼운 조직(최대 10 mm)의 빠른 이미징을 위한 조직 투명화 및 염색 키트
굴절률1.52(경화 후)1.521.48(최대 1 mm 두께의 오가노이드/스페로이드)

1.53(최대 10 mm 두께의 조직 검체)
어떤 유형의 이미징을 계획하고 있습니까?
검체 유형동물 세포/조직(고정)동물 세포/조직(고정)동물 세포/조직(고정)
Fixed-cell 이미징, 즉각적인 이미징 
Fixed-cell, 장시간 이미징
  
시료의 두께는 얼마입니까?
최대 10 μm
  
최대 150 μm
  
최대 500 μm 
 
최대 1 mm  
최대 10 mm  
최상의 결과를 얻을 수 있는 현미경 대물 렌즈 유형은 무엇입니까? (모든 대물 렌즈 유형이 이 시약과 호환됨)
유침 대물(Oil immersion) 렌즈
글리세롤 교정 대물 렌즈  
시료에 포함되는 형광단에는 어떤 것이 있습니까?
Alexa Fluor 염료
일반 염료
형광 단백질
봉입제(mountant)에 대조염색제(counterstain)를 첨가하고 싶으십니까?
DAPI로 대조염색
 
SYTOX Deep Red로 대조염색
  
대조염색하지 않음
식물 세포
 이미징용 Image-iT 식물조직 투명화 및 봉입 시약
 자세히 알아보기
일반 사양
형태이미징용 식물 조직 투명화 및 봉입을 위한 바로 사용 가능한 시약
굴절률1.45 (투명화 및 소프트 세팅 봉입 옵션)

1.415 (하드 세팅 봉입 옵션)
어떤 유형의 이미징을 계획하고 있습니까?
검체 유형식물 세포/조직 절편/전체 조직(고정)
Live-cell 이미징 
Fixed-cell 이미징
Fixed-cell 이미징, 장시간 이미징(시료 두께 최대 10 μm)
Fixed-cell 이미징, 장시간 이미징(시료 두께 최대 150 μm)
최상의 결과를 얻을 수 있는 현미경 대물 렌즈 유형은 무엇입니까? (모든 대물 렌즈 유형이 이 시약과 호환됨)
유침 대물(Oil immersion) 렌즈 
글리세롤 교정 대물 렌즈
물 또는 공기 교정 대물 렌즈 
시료에 포함되는 형광단에는 어떤 것이 있습니까?
가장 일반적인 조직학 염색
형광 단백질 
봉입제(mountant)에 대조염색제(counterstain)를 첨가하고 싶으십니까?
DAPI로 대조염색 
SYTOX Deep Red로 대조염색 
대조염색하지 않음

광퇴색 방지제, 봉입제 또는 투명화 시약을 사용하는 기법과 방법에 대해 자세히 알아보기

광표백(Photobleaching) 이란?

광표백이란 형광 신호의 저하를 말합니다. 광여기된 형광단이 산소에 노출되면 자유 라디칼이 생성되어 신호 강도가 손실됩니다. 형광단이 빛에 노출되는 강도와 시간을 줄여 광표백 속도를 늦출 수 있습니다. 광표백 효과를 줄여 더 큰 강도로 장시간 형광 신호를 관찰할 수 있도록 하는 광퇴색 방지 시약이 도입되었습니다.

광표백 방지를 위해 광퇴색 방지제(antifade)를 사용하는 방법

Illustration of microscope slide with sample

1단계. 시료를 슬라이드 또는 커버슬립 위에 놓습니다. 이 단계 전후에 모든 염색을 완료합니다.

 

 

Illustration of microscope slide with antifade applied

2단계. 시료 위에 광퇴색 방지 봉입제 (mountant)를 바릅니다. 하드 세팅 봉입제의 경우 밤새 공기에 노출시켜 경화시킵니다.

 

 

Illustration of microscope slide with glycerol applied (hard-setting mountants only)

3단계. 하드 세팅 봉입제를 사용하는 경우만 해당: 봉입된 시료에 100% 글리세롤을 한 방울 떨어뜨린 후 커버슬립을 부착합니다. 글리세롤은 커버슬립 접착력을 돕습니다. ProLong Glass 는 24시간 후 최대 1.52의 최종 RI로 완전히 경화됩니다.

검체를 슬라이드에 봉입하는 방법에 대한 프로토콜 및 정보 보기

소프트 세팅 봉입제와 하드 세팅 봉입제의 차이점은 무엇입니까?

봉입제는 봉입제에 겔화제가 포함되어 있는지 여부에 따라 소프트 세팅 또는 하드 세팅이 될 수 있습니다. 소프트 세팅 봉입제는 완충 글리세롤 용액을 함유하고 있으므로 슬라이드의 빠른 이미징이 필요할 때 사용해야 합니다. 소프트 세팅 봉입제는 세척할 수 있으며 시료를 재염색하거나 단일 세포 RNA 염기서열분석 또는 PCR과 같은 다운스트림 용도로 사용할 수 있습니다. 하드 세팅 봉입제에는 커버슬립을 슬라이드에 영구적으로 부착하는 중합체가 포함되어 있습니다. 이는 시료를 장기간 보관하는 데 사용됩니다.

광퇴색 방지제 및 봉입제 주문 정보

ProLong Glass Antifade Mountants
ProLong Diamond Antifade Mountants
ProLong Gold Antifade Mountants
Slowfade Antifade Mountants
CytoVista Tissue Clearing Reagent

ProLong Antifade Mountant 및 Slowfade Antifade Mountant를 사용한 예

Slowfade Antifade Mountant 예

Slowfade Antifade Mountant Example

그림 1. 100um 두께의 조직 시료를 염색하여 SlowFade Glass로 봉입하고 Zeiss LSM 710 공초점 현미경으로 이미지를 획득했습니다. 왼쪽) GFAP 항체를 사용하여 GFAP에 대해 면역염색되어 Alexa Fluor 594 Plus 로검출된 쥐의 뇌 조직 절편. 핵은 DAPI로 염색되었습니다. 63X 유침 대물 렌즈를 사용하고 그 결과 이미지는 최대 강도 투사로 표현되었습니다. 오른쪽) histome H3 항체 및 토끼 action항체로 염색한 생쥐 유방 조직 절편. 표적은 Alexa Fluor 488 (카탈로그 번호 A11029) 및 Alexa Fluor 594 (카탈로그 번호 A11012) 2차 항체를 사용하여 검출했습니다. 핵은 SYTOX DR (카탈로그 번호 S11381)로 염색되었습니다. 40X 유침 대물 렌즈를 사용하고 그 결과 이미지는 최대 강도 투사로 표현되었습니다.

ProLong Antifade Mountant 예

ProLong Antifade Mountant Example

그림 2. 냉동 보존 쥐 뇌 조직 절편(100-µm 두께)을 tubulin 항체(카탈로그 번호 MA1-118) 및 GFAP(노란색) GFAP 항체(카탈로그 번호 OPA1-06100)를 사용하여 튜불린(빨간색)에 대해 염색했습니다. 핵은 Alexa Fluor Plus 594(카탈로그 번호 A-11032) 및 Alexa Fluor Plus 647(카탈로그 번호 A-32733)를 사용하여 검출했습니다. 핵(청록색)은 DAPI(왼쪽, 카탈로그 번호 D1306)로 염색했습니다. 슬라이드를 ProLong Glass 광퇴색 방지 봉입제로 봉입하고 63× 유침 대물 렌즈를 사용하여 Zeiss LSM 710 공초점 현미경으로 이미지를 획득했습니다.

이미징 후 스트리핑 및 FISH 리프로빙을 보여주는 논문으로 SlowFade Gold Antifade Mountant(S36936) 사용

  • Sountoulidis A, Liontos A, Nguyen HP, Firsova AB, Fysikopoulos A, Qian X, Seeger W, Sundström E, Nilsson M, Samakovlis C. SCRINSHOT enables spatial mapping of cell states in tissue sections with single-cell resolution. PLoS Biol. 2020 Nov 20;18(11):e3000675. PMID: 33216742.

이미징 프로토콜 핸드북

샘플 및 어세이 전처리에서 염색, 라벨링 및 데이터 분석 전략에 이르기까지 이미징에 필요한 프로토콜을 제공합니다.

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