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웨스턴 블랏 단백질 트랜스퍼
어떤 웨스턴 블랏 트랜스퍼 시스템이 적합할까요?
| 습식 트랜스퍼 | 세미-드라이 트랜스퍼 | 드라이 트랜스퍼 | ||
|---|---|---|---|---|
 Mini Blot Module |  XCell II Blot Module |  SureLock Tandem Midi Blot Module |  Power Blotter Systems |  iBlot 3 Western Blot Transfer System |
| 용량: 블랏 모듈당 미니 젤 1개, 탱크당 블랏 모듈 1–2개 | 용량: 최대 2개의 미니 블랏 | 용량: 블랏 모듈당 미디 젤 1개, 탱크당 블랏 모듈 1–2개 | 용량: 미니 젤 1–4개 또는 미디 젤 1–2개 | 용량: 미니 젤 1–4개 또는 미디 젤 1–2개 |
| 트랜스퍼 시간: 60분 | 트랜스퍼 시간: 60–120분 | 트랜스퍼 시간: 30분 | 트랜스퍼 시간: 5–10분 | 트랜스퍼 시간: 3분 미만 |
| 블로팅 영역: 9 x 9 cm | 블로팅 영역: 9 x 9 cm | 블로팅 영역: 9.2 x 14.4 cm | 블로팅 영역: 10 x 18 cm 또는 21 x 22.5 cm | 블로팅 영역: 8.5 x 13.5 cm |
| 블로팅 영역: 트랜스퍼 버퍼 볼륨: 블랏 모듈당 220 mL | 트랜스퍼 버퍼 볼륨: 200 mL | 트랜스퍼 버퍼 볼륨: 블랏 모듈당 300 mL | 트랜스퍼 버퍼 볼륨: 프리-컷 멤브레인 & 필터: 50–100 mL, 사전 조립형 Select 트랜스퍼 스택: 버퍼 불필요 | 트랜스퍼 버퍼 볼륨: 버퍼 불필요 |
| 전원 공급 장치: 외부 | 전원 공급 장치: 외부 | 전원 공급 장치: 외부 | 전원 공급 장치: 내부 | 전원 공급 장치: 내부 |
| 필요한 장비: Mini Gel Tank: 최대 2개의 미니 블랏 모듈을 수용할 수 있는 용량 | 필요한 장비: XCell SureLock Mini-Cell: 최대 2개의 블랏 모듈 용량 | 필요한 장비: SureLock Tandem Midi Gel Tank: 최대 2개의 블랏 모듈 용량 | ––– | ––– |
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웨스턴 블랏 트랜스퍼 방법 비교
 |  |  | |
| 습식 트랜스퍼 | 세미-드라이 트랜스퍼 | 드라이 트랜스퍼 | |
|---|---|---|---|
| 셋업 | 수작업, 트랜스퍼 버퍼 준비 필요. 약 15–20분 | Select 스택 사용 시 약 5-10분, 프리-컷 멤브레인 및 필터의 경우 약 10–15분 | 약 5분 |
| 세척 | 매번 사용 후 유해 메탄올 폐기물 처리를 포함한 광범위한 세척 | 매번 사용 후 간단한 세척 필요 | 장시간 사용에도 매우 최소화됨 |
| 트랜스퍼 시간 | 30–120분 | 7–10분 | 3분 미만 |
| 처리량 | +++ | +++ | +++ |
| 성능 | +++ | ++ | +++ |
| 간편한 사용 | ++ | +++ | +++ |
| 트랜스퍼 버퍼 요건 | 메탄올 필요 | 메탄올-프리 트랜스퍼 버퍼 또는 사전-조립형 스택 사용 시에는 버퍼 필요 없음 | 버퍼 불필요 |
| 특별 고려 사항 | 장시간 트랜스퍼를 위해서는 냉각이 필요할 수 있습니다. | Towbin 버퍼를 비롯한 여러 시스템을 사용할 수 있습니다. | 사전-조립된 트랜스퍼 스택이 필요합니다. |
습식, 세미-드라이 및 드라이 트랜스퍼 방법 비교
젤에서 블로팅 멤브레인으로의 효율적이고 안정적인 단백질 트랜스퍼는 성공적인 웨스턴 검출 실험의 초석입니다. 결과의 정확성은 웨스턴 블로팅 방법의 트랜스퍼 효율성에 따라 달라집니다. 기존의 습식 트랜스퍼는 효율성이 높지만 시간과 노력이 많이 소요됩니다. 세미-드라이 블로팅은 편리하고 시간이 절약되며, 다양한 유형의 버퍼 시스템 또는 버퍼없이 사전-조립된 스택을 사용할 수 있는 유연성을 제공합니다. 그러나, 세미-드라이 트랜스퍼는 분자량이 큰 단백질(>300 kDa)의 트랜스퍼 효율이 낮을 수 있습니다. 드라이 일렉트로블로팅(electroblotting)은 추가 버퍼가 필요하지 않기 때문에 속도와 편리성을 모두 갖춘 고품질 트랜스퍼 성능을 제공합니다.
SDS-PAGE 또는 네이티브 젤에서 니트로셀룰로오스, PVDF 또는 나일론 멤브레인으로 단백질을 트랜스퍼하는 세 가지 주요 방법:
습식 탱크 일렉트로트랜스퍼
습식 트랜스퍼를 수행할 때 트랜스퍼 버퍼로 젤을 먼저 평형화시킵니다. 그런 다음 젤을 "트랜스퍼 샌드위치"(필터 페이퍼-젤-멤브레인-필터 페이퍼)에 넣고 패드(pad)로 완충시킨 다음 지지 그리드(support grid)로 함께 압착합니다. 지지된 젤 샌드위치를 스테인리스 스틸/플래티넘 와이어 전극 사이의 탱크에 수직으로 배치하고 트랜스퍼 버퍼를 채웁니다.
일정한 전류(0.1 ~ 1 A) 또는 전압(5 ~ 30 V)에서 최소 1시간 ~ 밤새 수행되는 표준 전기장 옵션을 통해 여러 젤을 일렉트로트랜스퍼할 수 있습니다. 일반적으로 트랜스퍼는 발생하는 열을 줄이기 위해 얼음 팩을 사용하여 4°C에서 수행됩니다. 단일 젤에 높은 전기장 옵션을 사용하면 트랜스퍼 시간을 30분 정도로 줄일 수 있지만, 고전압(최대 200 V) 또는 고전류(최대 1.6 A)를 사용해야 하며 이로 인해 생성되는 상당한 양의 열을 분산시키기 위한 냉각 시스템이 필요합니다.
14–116 kDa의 단백질에 대해 80–100%의 트랜스퍼 효율을 달성할 수 있습니다. 트랜스퍼 시간이 증가할수록 트랜스퍼 효율이 향상됩니다. 그러나 시간이 증가함에 따라, 특히 공극 크기가 더 큰(0.45 μm) 멤브레인을 사용할 때 저분자량(<30 kDa) 단백질의 경우 멤브레인을 통해 단백질이 과도하게 트랜스퍼(관통)될 위험이 있습니다.
웨스턴 블로팅을 위한 탱크 트랜스퍼 장치. 전극 위치를 기준으로 젤 위치, 트랜스퍼 멤브레인 및 단백질 방향을 나타내는 일반적인 웨스턴 블랏 장치 어셈블리를 보여주는 개략도
세미-드라이 일렉트로트랜스퍼
세미-드라이 단백질 트랜스퍼의 경우, 트랜스퍼 샌드위치는 세미-드라이 트랜스퍼 장치에서 두 개의 플레이트 전극 사이에 수평으로 놓입니다. 이 세미-드라이 트랜스퍼에서는 트랜스퍼 버퍼로 젤을 미리 평형화시키는 것이 매우 중요합니다. 젤 주위가 아닌 젤을 통과하는 전류를 최대화하기 위해 트랜스퍼 중에 사용할 수 있는 버퍼의 양은 샌드위치에 포함된 양으로 제한되므로 매우 두꺼운 필터 페이퍼(약 3 mm 두께)와 멤브레인을 버퍼에 충분히 적시는 것이 좋습니다. 마찬가지로 필터 페이퍼 시트와 멤브레인을 젤 크기로 절단하는 것이 중요합니다.
1 ~ 4개의 젤을 멤브레인에 신속하게 일렉트로블로팅할 수 있습니다. 트랜스퍼 버퍼에 메탄올은 첨가할 수 있지만, 방향족 탄화수소, 염소화 탄화수소 및 아세톤을 포함한 다른 유기 용매는 세미-드라이 블로터의 손상을 방지하기 위해 사용해서는 안됩니다. 일렉트로트랜스퍼는 10 ~ 60분 동안 일정한 전류(0.1 ~ 최대 0.4 A) 또는 전압(10 ~ 25 V)에서 수행됩니다. 트랜스퍼 시간을 7 ~ 10분으로 줄이려면 메탄올-프리 트랜스퍼 버퍼를 사용하는 것이 좋습니다. 14 ~ 116 kDa의 단백질에 대해 60 ~ 80%의 트랜스퍼 효율을 얻을 수 있으며 더 높은 분자량의 단백질을 트랜스퍼하려면 더 긴 트랜스퍼 시간이 필요합니다.
세미-드라이 일렉트로블로팅 트랜스퍼.Invitrogen Power Blotter는 폴리아크릴아미드 젤에서 니트로셀룰로오스 또는 PVDF 멤브레인으로 10–300 kDa 단백질을 5 ~ 10분 안에 빠르게 세미-드라이 트랜스퍼할 수 있도록 특별히 설계되었습니다. Power Blotter는 일반적으로 사용되는 프리캐스트(precast) 또는 수제 젤(SDS-PAGE) 및 니트로셀룰로오스 또는 PVDF 멤브레인과 함께 사용할 때 일관되고 효율적인 단백질 트랜스퍼가 가능하도록 최적화된 통합 전원 공급 장치를 갖추고 있습니다.
드라이 일렉트로트랜스퍼
드라이 일렉트로블로팅 방법은 기존의 트랜스퍼 버퍼를 사용하지 않는 혁신적인 구성 요소가 포함된 특수 트랜스퍼 샌드위치를 사용합니다. 버퍼 탱크나 적신 필터 페이퍼 대신 버퍼가 포함된 고유한 젤 매트릭스(트랜스퍼 스택)가 사용됩니다. 젤 매트릭스의 이온 밀도가 높아 신속한 단백질 트랜스퍼가 가능합니다. 블로팅 중 구리 애노드는 물 전기분해로 인한 산소 가스를 생성하지 않으므로 블랏의 왜곡이 줄어듭니다. 습식 및 세미-드라이 방식을 포함한 기존의 단백질 트랜스퍼 기술은 산소를 생성하는 불활성 전극을 사용합니다. 일반적으로 전극 간 짧은 거리, 높은 전기장 강도 및 높은 전류로 인해 트랜스퍼 시간이 단축됩니다.
드라이 일렉트로블로팅 트랜스퍼.Invitrogen iBlot 3 Western Blot Transfer System은 버퍼없이 빠른 웨스턴 트랜스퍼가 가능합니다. 이 시스템은 아크릴아미드 젤에서 단 3분 만에 단백질을 효율적으로 블로팅할 수 있으며, PVDF 및 니트로셀룰로오스 멤브레인 모두와 호환됩니다. iBlot 3 시스템은 짧은 시간 내에 기존의 습식 트랜스퍼 방법에 필적하는 성능을 제공합니다.
어떤 웨스턴 블랏 트랜스퍼 시스템이 적합할까요?
| 습식 트랜스퍼 | 세미-드라이 트랜스퍼 | 드라이 트랜스퍼 | ||
|---|---|---|---|---|
Mini Blot Module | XCell II Blot Module | SureLock Tandem Midi Blot Module | Power Blotter Systems | iBlot 3 Western Blot Transfer System |
| 용량: 블랏 모듈당 미니 젤 1개, 탱크당 블랏 모듈 1–2개 | 용량: 최대 2개의 미니 블랏 | 용량: 블랏 모듈당 미디 젤 1개, 탱크당 블랏 모듈 1–2개 | 용량: 미니 젤 1–4개 또는 미디 젤 1–2개 | 용량: 미니 젤 1–4개 또는 미디 젤 1–2개 |
| 트랜스퍼 시간: 60분 | 트랜스퍼 시간: 60–120분 | 트랜스퍼 시간: 30분 | 트랜스퍼 시간: 5–10분 | 트랜스퍼 시간: 3분 미만 |
| 블로팅 영역: 9 x 9 cm | 블로팅 영역: 9 x 9 cm | 블로팅 영역: 9.2 x 14.4 cm | 블로팅 영역: 10 x 18 cm 또는 21 x 22.5 cm | 블로팅 영역: 8.5 x 13.5 cm |
| 블로팅 영역: 트랜스퍼 버퍼 볼륨: 블랏 모듈당 220 mL | 트랜스퍼 버퍼 볼륨: 200 mL | 트랜스퍼 버퍼 볼륨: 블랏 모듈당 300 mL | 트랜스퍼 버퍼 볼륨: 프리-컷 멤브레인 & 필터: 50–100 mL, 사전 조립형 Select 트랜스퍼 스택: 버퍼 불필요 | 트랜스퍼 버퍼 볼륨: 버퍼 불필요 |
| 전원 공급 장치: 외부 | 전원 공급 장치: 외부 | 전원 공급 장치: 외부 | 전원 공급 장치: 내부 | 전원 공급 장치: 내부 |
| 필요한 장비: Mini Gel Tank: 최대 2개의 미니 블랏 모듈을 수용할 수 있는 용량 | 필요한 장비: XCell SureLock Mini-Cell: 최대 2개의 블랏 모듈 용량 | 필요한 장비: SureLock Tandem Midi Gel Tank: 최대 2개의 블랏 모듈 용량 | ––– | ––– |
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웨스턴 블랏 트랜스퍼 방법 비교
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| 습식 트랜스퍼 | 세미-드라이 트랜스퍼 | 드라이 트랜스퍼 | |
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| 셋업 | 수작업, 트랜스퍼 버퍼 준비 필요. 약 15–20분 | Select 스택 사용 시 약 5-10분, 프리-컷 멤브레인 및 필터의 경우 약 10–15분 | 약 5분 |
| 세척 | 매번 사용 후 유해 메탄올 폐기물 처리를 포함한 광범위한 세척 | 매번 사용 후 간단한 세척 필요 | 장시간 사용에도 매우 최소화됨 |
| 트랜스퍼 시간 | 30–120분 | 7–10분 | 3분 미만 |
| 처리량 | +++ | +++ | +++ |
| 성능 | +++ | ++ | +++ |
| 간편한 사용 | ++ | +++ | +++ |
| 트랜스퍼 버퍼 요건 | 메탄올 필요 | 메탄올-프리 트랜스퍼 버퍼 또는 사전-조립형 스택 사용 시에는 버퍼 필요 없음 | 버퍼 불필요 |
| 특별 고려 사항 | 장시간 트랜스퍼를 위해서는 냉각이 필요할 수 있습니다. | Towbin 버퍼를 비롯한 여러 시스템을 사용할 수 있습니다. | 사전-조립된 트랜스퍼 스택이 필요합니다. |
습식, 세미-드라이 및 드라이 트랜스퍼 방법 비교
젤에서 블로팅 멤브레인으로의 효율적이고 안정적인 단백질 트랜스퍼는 성공적인 웨스턴 검출 실험의 초석입니다. 결과의 정확성은 웨스턴 블로팅 방법의 트랜스퍼 효율성에 따라 달라집니다. 기존의 습식 트랜스퍼는 효율성이 높지만 시간과 노력이 많이 소요됩니다. 세미-드라이 블로팅은 편리하고 시간이 절약되며, 다양한 유형의 버퍼 시스템 또는 버퍼없이 사전-조립된 스택을 사용할 수 있는 유연성을 제공합니다. 그러나, 세미-드라이 트랜스퍼는 분자량이 큰 단백질(>300 kDa)의 트랜스퍼 효율이 낮을 수 있습니다. 드라이 일렉트로블로팅(electroblotting)은 추가 버퍼가 필요하지 않기 때문에 속도와 편리성을 모두 갖춘 고품질 트랜스퍼 성능을 제공합니다.
SDS-PAGE 또는 네이티브 젤에서 니트로셀룰로오스, PVDF 또는 나일론 멤브레인으로 단백질을 트랜스퍼하는 세 가지 주요 방법:
습식 탱크 일렉트로트랜스퍼
습식 트랜스퍼를 수행할 때 트랜스퍼 버퍼로 젤을 먼저 평형화시킵니다. 그런 다음 젤을 "트랜스퍼 샌드위치"(필터 페이퍼-젤-멤브레인-필터 페이퍼)에 넣고 패드(pad)로 완충시킨 다음 지지 그리드(support grid)로 함께 압착합니다. 지지된 젤 샌드위치를 스테인리스 스틸/플래티넘 와이어 전극 사이의 탱크에 수직으로 배치하고 트랜스퍼 버퍼를 채웁니다.
일정한 전류(0.1 ~ 1 A) 또는 전압(5 ~ 30 V)에서 최소 1시간 ~ 밤새 수행되는 표준 전기장 옵션을 통해 여러 젤을 일렉트로트랜스퍼할 수 있습니다. 일반적으로 트랜스퍼는 발생하는 열을 줄이기 위해 얼음 팩을 사용하여 4°C에서 수행됩니다. 단일 젤에 높은 전기장 옵션을 사용하면 트랜스퍼 시간을 30분 정도로 줄일 수 있지만, 고전압(최대 200 V) 또는 고전류(최대 1.6 A)를 사용해야 하며 이로 인해 생성되는 상당한 양의 열을 분산시키기 위한 냉각 시스템이 필요합니다.
14–116 kDa의 단백질에 대해 80–100%의 트랜스퍼 효율을 달성할 수 있습니다. 트랜스퍼 시간이 증가할수록 트랜스퍼 효율이 향상됩니다. 그러나 시간이 증가함에 따라, 특히 공극 크기가 더 큰(0.45 μm) 멤브레인을 사용할 때 저분자량(<30 kDa) 단백질의 경우 멤브레인을 통해 단백질이 과도하게 트랜스퍼(관통)될 위험이 있습니다.
웨스턴 블로팅을 위한 탱크 트랜스퍼 장치. 전극 위치를 기준으로 젤 위치, 트랜스퍼 멤브레인 및 단백질 방향을 나타내는 일반적인 웨스턴 블랏 장치 어셈블리를 보여주는 개략도
세미-드라이 일렉트로트랜스퍼
세미-드라이 단백질 트랜스퍼의 경우, 트랜스퍼 샌드위치는 세미-드라이 트랜스퍼 장치에서 두 개의 플레이트 전극 사이에 수평으로 놓입니다. 이 세미-드라이 트랜스퍼에서는 트랜스퍼 버퍼로 젤을 미리 평형화시키는 것이 매우 중요합니다. 젤 주위가 아닌 젤을 통과하는 전류를 최대화하기 위해 트랜스퍼 중에 사용할 수 있는 버퍼의 양은 샌드위치에 포함된 양으로 제한되므로 매우 두꺼운 필터 페이퍼(약 3 mm 두께)와 멤브레인을 버퍼에 충분히 적시는 것이 좋습니다. 마찬가지로 필터 페이퍼 시트와 멤브레인을 젤 크기로 절단하는 것이 중요합니다.
1 ~ 4개의 젤을 멤브레인에 신속하게 일렉트로블로팅할 수 있습니다. 트랜스퍼 버퍼에 메탄올은 첨가할 수 있지만, 방향족 탄화수소, 염소화 탄화수소 및 아세톤을 포함한 다른 유기 용매는 세미-드라이 블로터의 손상을 방지하기 위해 사용해서는 안됩니다. 일렉트로트랜스퍼는 10 ~ 60분 동안 일정한 전류(0.1 ~ 최대 0.4 A) 또는 전압(10 ~ 25 V)에서 수행됩니다. 트랜스퍼 시간을 7 ~ 10분으로 줄이려면 메탄올-프리 트랜스퍼 버퍼를 사용하는 것이 좋습니다. 14 ~ 116 kDa의 단백질에 대해 60 ~ 80%의 트랜스퍼 효율을 얻을 수 있으며 더 높은 분자량의 단백질을 트랜스퍼하려면 더 긴 트랜스퍼 시간이 필요합니다.
세미-드라이 일렉트로블로팅 트랜스퍼.Invitrogen Power Blotter는 폴리아크릴아미드 젤에서 니트로셀룰로오스 또는 PVDF 멤브레인으로 10–300 kDa 단백질을 5 ~ 10분 안에 빠르게 세미-드라이 트랜스퍼할 수 있도록 특별히 설계되었습니다. Power Blotter는 일반적으로 사용되는 프리캐스트(precast) 또는 수제 젤(SDS-PAGE) 및 니트로셀룰로오스 또는 PVDF 멤브레인과 함께 사용할 때 일관되고 효율적인 단백질 트랜스퍼가 가능하도록 최적화된 통합 전원 공급 장치를 갖추고 있습니다.
드라이 일렉트로트랜스퍼
드라이 일렉트로블로팅 방법은 기존의 트랜스퍼 버퍼를 사용하지 않는 혁신적인 구성 요소가 포함된 특수 트랜스퍼 샌드위치를 사용합니다. 버퍼 탱크나 적신 필터 페이퍼 대신 버퍼가 포함된 고유한 젤 매트릭스(트랜스퍼 스택)가 사용됩니다. 젤 매트릭스의 이온 밀도가 높아 신속한 단백질 트랜스퍼가 가능합니다. 블로팅 중 구리 애노드는 물 전기분해로 인한 산소 가스를 생성하지 않으므로 블랏의 왜곡이 줄어듭니다. 습식 및 세미-드라이 방식을 포함한 기존의 단백질 트랜스퍼 기술은 산소를 생성하는 불활성 전극을 사용합니다. 일반적으로 전극 간 짧은 거리, 높은 전기장 강도 및 높은 전류로 인해 트랜스퍼 시간이 단축됩니다.
드라이 일렉트로블로팅 트랜스퍼.Invitrogen iBlot 3 Western Blot Transfer System은 버퍼없이 빠른 웨스턴 트랜스퍼가 가능합니다. 이 시스템은 아크릴아미드 젤에서 단 3분 만에 단백질을 효율적으로 블로팅할 수 있으며, PVDF 및 니트로셀룰로오스 멤브레인 모두와 호환됩니다. iBlot 3 시스템은 짧은 시간 내에 기존의 습식 트랜스퍼 방법에 필적하는 성능을 제공합니다.
리소스
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.