Para ver datos de rendimiento adicionales de kits y reactivos específicos, siga los enlaces correspondientes de sus n.º de cat. indicados en los títulos de las figuras. Para obtener datos de aplicación adicionales, descargue las notas de aplicación que figuran en esta sección y en la página Recursos .

Pruebas de detección de SARS-CoV-2

Las muestras nasofaríngeas obtenidas con hisopo se enriquecieron con 250 copias/ml (izquierda) o 750 copias/ml (derecha) de ARN vírico del SARS-CoV-2 (1 o 3 veces el límite de detección, respectivamente), y el ARN se extrajo de 200 μl o 400 μl de la muestra enriquecida por triplicado con el kit MagMAX Viral/Pathogen (n.º de cat. A42352) con (+) o sin (-) lavado 3. Tras la elución en 50 μl, las muestras se analizaron mediante qRT-PCR para cuatro dianas de ARN (símbolos en color) por triplicado. Los valores de Ct para cada objetivo fueron muy consistentes (los símbolos se agrupaban estrechamente) y prácticamente idénticos entre los volúmenes de muestra y las condiciones de lavado, lo cual valida los protocolos optimizados para volúmenes inferiores. Todas las muestras negativas tenían valores de Ct de “Undetected” (No detectado) (no se muestran los datos).

Valores de Ct para muestras nasofaríngeas artificiales obtenidas con hisopo positivas para SARS-CoV-2 con diferentes flujos de trabajo de preparación de muestras.

Recuperación y pureza del ADN de sangre completa

Se utilizó un KingFisher Duo Prime para aislar el ADN de la sangre completa de dos donantes mediante el kit de varias muestras MagMAX Ultra 2.0 (n.º de cat. A36570). Las muestras >400 µl se procesaron con el protocolo para grandes volúmenes en una placa de 24 pocillos, y las muestras de 50-400 µl se procesaron con el protocolo para volúmenes pequeños en una placa de 96 pocillos. (No hizo falta normalizar el volumen de las muestras, incluso cuando se analizaron las muestras de 50 µl y 400 µl al mismo tiempo en la misma placa). El tiempo de funcionamiento fue de 45 minutos. (Arriba) Los volúmenes de recuperación fueron lineales con introducciones de volúmenes grandes y pequeños. (Abajo) Las tasas A260/A280 y A260/A230 pusieron de manifiesto una alta pureza en todos los volúmenes de muestra.

Recuperación y pureza del ADN aislado a partir de sangre completa.

Uniformidad de la secuenciación de muestras de cáncer incluidas en parafina y fijadas con formol

Se extrajo ADN y ARN de muestras de biopsia con aguja fina y biopsia con aguja gruesa coincidentes utilizando el kit MagMAX FFPE DNA/RNA Ultra (n.º de cat. A31881) en el modelo KingFisher Duo. Se prepararon librerías y se realizaron plantillas y secuenciaciones de las muestras. Las métricas de secuenciación, como la longitud de lectura media (A) y el mapeo y la uniformidad del ADN (B) fueron consistentes, lo que pone de relieve la recuperación funcional de ácidos nucleicos de diferentes tipos de muestras.

Secuenciación de muestras de investigación de cáncer.

Detección de biomarcadores de miARN para cáncer de próstata

Se aisló el ARN total del suero de 10 personas con cáncer de próstata y 10 personas sanas mediante el kit de aislamiento de ARN total MagMAX mirVana (n.º de cat. A27828) en el KingFisher Flex. Los niveles de expresión de 19 miARN se midieron mediante qRT-PCR utilizando el kit de síntesis de ADNc de miARN TaqMan Advanced (n.º de cat.) A28007) y ensayos de miARN TaqMan Advanced (n.º de cat. A25576). El eje y muestra los valores de ΔCt de cada miARN, normalizados con el ARNm de referencia. Las diferencias grandes entre las muestras de hombres sanos (azul) y las muestras de cáncer de próstata (verde) identifican los posibles biomarcadores de cáncer.

Secuenciación de muestras de investigación de cáncer.

Identificación de microbiota

Se aisló el ácido nucleico total de las muestras fecales, de orina y de saliva de dos donantes utilizando el kit de aislamiento de ácidos nucleicos MagMAX Microbiome Ultra (n.º de cat. A42357 y A42358) en el KingFisher Flex, se enviaron para secuenciación metagenómica indiscriminada y se compararon con perfiles microbianos conocidos. En la figura se muestran mapas de calor de abundancia de las microbiotas seleccionadas en todas las muestras. Los resultados confirmaron que en cada hábitat había diferentes taxones distintivos dominantes, con solo unas pocas especies compartidas, principalmente entre orina y saliva. En cada comunidad, hubo un solapamiento sustancial entre los donantes, pero también se observaron diferencias individuales.

Mapas de calor de microbiota de tres muestras de dos donantes.

Detección de patógenos veterinarios

Para un estudio en la Davis School of Veterinary Medicine de la Universidad de California, se obtuvieron muestras de sangre completa, heces y secreciones nasales de especies caninas, felinas y equinas. Se extrajeron los ácidos nucleicos totales con el KingFisher Flex y un sistema automatizado que emplea vacío y se amplificaron mediante qPCR. Los valores del ciclo de cuantificación (Cq) eran comparables para los dos métodos y el número total de patógenos detectados era similar. Sin embargo, el tiempo de extracción con KingFisher Flex fue tres veces más rápido.

Detección de patógenos veterinarios con qPCR.

Inmunoprecipitación

Se lisaron e incubaron las células de Jurkat con expresión de CD81 utilizando proteína G de Dynabeads (n.º de cat. 10004D) y se recubrieron con un anticuerpo contra la molécula CD81. Se aisló la CD81 del lisado celular por triplicado mediante un protocolo de inmunoprecipitación remota optimizado en los instrumentos KingFisher Duo Prime y Flex y se comparó con el protocolo manual. Mediante electroforesis e inmunoelectrotransferencia se confirmó un rendimiento adecuado en ambos instrumentos, equivalente a los resultados obtenidos con el protocolo manual.

Inmunoprecipitación (IP) de la CD81 mediante métodos manuales frente a automatizados.

Mapeo de péptidos

Se realizó la digestión del fármaco infliximab con el kit de tripsina SMART Digest en el KingFisher Duo Prime. El análisis del mapa de péptidos UV mediante LC-MS confirmó una cobertura de secuencia completa del 100 % para la cadena ligera y pesada del anticuerpo. En otros datos, se detectó que el protocolo automatizado era reproducible y fácil de usar, incluso por aquellos que no tenían experiencia previa con la digestión de proteínas.

Mapa de cobertura de secuencias del fármaco infliximab.

Separación de exosomas

Se aislaron los exosomas CD9+ de las células de cáncer de colon SW480 utilizando el KingFisher Flex con el CD9 como diana y, a continuación, se realizaron la tinción y el análisis por citometría de flujo. Se incluyeron los exosomas CD9– de las células de Jurkat como controles. Los histogramas muestran una clara población de CD9+ (rojo) entre las células SW480 (B) en comparación con los controles de células de Jurkat (C). También se muestra el gráfico de dispersión y el perfil de mecanismo de activación (A).

Citometría de flujo de exosomas aislados con esferas magnéticas Dynabeads.

Para uso exclusivo en investigación. No debe utilizarse en procedimientos de diagnóstico