Kits, reactivos y protocolos

Los kits MagMAX Viral/Pathogen están diseñados para la recuperación de gran capacidad de ácidos nucleicos y son compatibles con muestras de bajo valor cuantitativo. Solo hay dos protocolos para el intervalo de entrada de volumen bajo a volumen alto. No se requiere portador, lo que significa menos interferencia con la NGS posterior y menos pasos necesarios.

Los kits de aislamiento de ácidos nucleicos MagMAX Viral/Pathogen I y Viral/Pathogen II (MVP I y II) se recomiendan para su uso en laboratorios de investigación. Ambos kits se han validado con protocolos optimizados y desarrollados recientemente, lo que permite un volumen de entrada de muestras de 200 µl (frente al volumen estándar de 400 µl) con la mitad de la cantidad de reactivos de extracción.

El funcionamiento de ambos kits MagMAX es idéntico, así como las químicas que llevan el ARN a las esferas y el flujo de trabajo general. Las dos diferencias son: (A) Un cambio de materia prima en el componente de esferas debido a una demanda sin precedentes para SARS-CoV-2 y (b) el kit MVP II solo está disponible en formato de preparación a gran escala.

Para obtener notas de aplicación y materiales de apoyo sobre el uso de instrumentos KingFisher y kits MagMAX o Dynabeads para pruebas y aislamiento de SARS-CoV-2, consulte la ficha Resources (Recursos).

Para ver datos de rendimiento, notas de aplicación e información detallada sobre protocolos para cualquiera de estos kits, siga el enlace correspondiente de Más información o n.º de cat. indicado anteriormente.

Para ver un vídeo del flujo de trabajo de los kits de aislamiento de ácidos nucleicos MagMAX Viral/Pathogen con instrumentos KingFisher, siga el enlace correspondiente del n.º de cat. indicado anteriormente.

Para obtener información sobre plásticos y productos de configuración de placas para su uso con instrumentos KingFisher, consulte la ficha Accessories (Accesorios).

Utilice el kit de varias muestras de ADN MagMAX Ultra 2.0 para recuperar ADN de alta pureza de introducciones de volúmenes grandes y pequeños. El kit produce el máximo rendimiento al tratar muestras con proteinasa K (PK) y potenciador P, seguido de una solución innovadora de lisis y unión para lisar células, desnaturalizar proteínas y capturar ADNg simultáneamente en las esferas magnéticas de alto grado de unión. Diseñado para ofrecer flexibilidad, el kit le permite omitir los pasos de normalización de volúmenes de muestras y tampones para un procesamiento sin problemas. Por ejemplo, puede ejecutar muestras de 50 µl y 400 µl al mismo tiempo en la misma placa.

Los reactivos para el kit de varias muestras de ADN MagMAX Ultra 2.0 también están disponibles a gran escala, lo que permite procesar 2000 muestras de 50-200 µl o 1000 muestras de 200-400 µl.

Las placas precargadas KingFisher Ready DNA Ultra 2.0 contienen los mismos reactivos y producen los mismos resultados de alta calidad que el kit de varias muestras de ADN MagMAX Ultra 2.0, pero las placas ya están convenientemente cargadas con reactivos. Esto suprime la necesidad de dispensar lisis, soluciones de lavado y esferas magnéticas. El protocolo es sencillo: solo tiene que retirar la lámina, añadir la muestra y soluciones de potenciador/proteinasa K e insertarla en el instrumento.

Utilice el kit de saliva para ADNg MagMAX con instrumentos KingFisher para recuperar ADNg de alta pureza a partir de muestras de saliva. El kit trata las muestras con una solución innovadora de lisis y unión para lisar células, desnaturalizar proteínas y capturar ADNg simultáneamente en las esferas magnéticas de alto grado de unión. Diseñado para ofrecer flexibilidad, el kit le permite omitir los pasos de normalización de volúmenes de muestras y tampones para un procesamiento sin problemas. Por ejemplo, puede ejecutar muestras de 50 µl y 400 µl al mismo tiempo en la misma placa. El flujo de trabajo es compatible con dispositivos de recogida de saliva como Oragene™ de Genotek, GeneFiX™ de IsoHelix y SalivaGard® de Biomatrica.

Para ver información sobre protocolos y datos de rendimiento de cualquiera de estos kits MagMAX, siga el enlace Más información anterior.

Para obtener información sobre plásticos y productos de configuración de placas para su uso con instrumentos KingFisher, consulte la ficha Accessories (Accesorios).

Las biopsias líquidas suelen utilizar ADN extracelular procedente de células normales y de células cancerosas. La obtención de ADN solo tumoral en el torrente sanguíneo se conoce con mayor frecuencia como ADN tumoral circulante (ADNtc), que contiene información sobre un tumor a la que de otro modo resultaría difícil acceder. En estos kits, las esferas magnéticas y la química optimizada se combinan para lograr un aislamiento de ácidos nucleicos más eficaz que recupere específicamente el ADN extracelular fragmentado y a la vez deja atrás las moléculas de ADN más grandes. Este aspecto del enriquecimiento para la porción de ADN extracelular del ácido nucleico total garantiza que el ADN extracelular más corto está concentrado y preparado para el análisis posterior mediante qPCR, PCR digital (PCRd) o secuenciación de última generación (NGS).

Si bien se está consolidando la importancia del ADN extracelular, es posible que no sea determinante. Las secuencias de ADN extracelular sirven como biomarcadores críticos en forma de microARN y fusiones de genes. La inclusión de ARN extracelular con ADN extracelular en el kit de ácido nucleico total ofrece a los investigadores la oportunidad de ampliar sus estudios y mejorar la salud de las personas.

Utilice el kit de aislamiento de ADN extracelular MagMAX con instrumentos KingFisher, ensayos Oncomine y otras aplicaciones posteriores para optimizar el flujo de trabajo con biopsias líquidas desde la extracción y purificación hasta el análisis.

Utilice el kit de aislamiento de ácidos nucleicos totales extracelulares MagMAX para ampliar el flujo de trabajo con biopsias líquidas e incluir ADN y ARN extracelulares de la misma muestra.

Para ver datos de rendimiento, notas de aplicación e información detallada sobre protocolos para cualquiera de estos kits MagMAX, siga el enlace correspondiente de Más información indicado anteriormente.

Para ver un vídeo del flujo de trabajo del kit de aislamiento de ADN extracelular MagMAX con instrumentos KingFisher, siga el enlace correspondiente del n.º de cat. indicado anteriormente.

Para obtener información sobre plásticos y productos de configuración de placas para su uso con instrumentos KingFisher, consulte la ficha Accessories (Accesorios).

Utilice el kit de ADN/ARN MagMAX FFPE Ultra para aislar ácidos nucleicos de forma rápida y fiable a partir de muestras incluidas en parafina y fijadas con formol. Incluso puede extraer ADN y ARN secuencialmente de la misma muestra en un solo flujo de trabajo y obtener así datos más completos de sus valiosas muestras. Por ejemplo, puede investigar biomarcadores importantes, como mutaciones en puntos calientes, variaciones en el número de copias, fusiones de genes e indels.

El kit se ha validado para varios tipos de muestras de investigación, incluidas las biopsias de cáncer sólido, las biopsias con aguja gruesa y las biopsias con aguja fina. También es compatible con el agente de limpieza CitriSolv™, una alternativa de desparafinado al xileno que es menos tóxico y se puede utilizar sin una campana de extracción de vapores químicos.

Para acelerar el proceso de desparafinado, combine el kit de ADN/ARN FFPE Ultra con el sistema AutoLys™de Applied Biosystems™. Compuesto de tubos pretratados y un sistema de gradillas para reducir los pasos de pipeteo, los tubos y accesorios del sistema AutoLys permiten prescindir de productos químicos peligrosos y reducen al mínimo la pérdida de muestras de tejido.

Para ver datos de rendimiento, notas de aplicación e información detallada sobre protocolos para este kit MagMAX, siga el enlace de Más información correspondiente anterior.

Para obtener información sobre plásticos y productos de configuración de placas para su uso con instrumentos KingFisher, consulte la ficha Accessories (Accesorios).

Utilice el kit de aislamiento de ARN total MagMAX mirVana para el aislamiento de bajo o alto rendimiento del ARN total real que cubre toda la variedad de tipos de ARN presentes en las células, desde ARN pequeños como los microARN (miARN) hasta el ARN no codificante, el ARN mensajero y el ARN ribosómico. El kit eluye ARN altamente concentrado en tan solo 20 µl de agua sin nucleasas y su química estabiliza y conserva el ARN con el paso del tiempo.

El ARN extraído es adecuado para una gran variedad de aplicaciones de expresión génica posteriores, como miARN-Seq y qRT-PCR. Los flujos de trabajo se han validado para el kit de síntesis de ADNc de miARN TaqMan™ Advanced y otros ensayos de miARN TaqMan Advanced.

Para ver los datos de rendimiento de este kit MagMAX, siga el enlace Más información correspondiente anterior.

Para ver información sobre protocolos y notas de aplicación de este kit MagMAX, o para ver un vídeo del flujo de trabajo de este kit (solo aislamiento manual), siga el enlace correspondiente del n.º de cat. indicado anteriormente.

Para obtener información sobre plásticos y productos de configuración de placas para su uso con instrumentos KingFisher, consulte la ficha Accessories (Accesorios).

Para ver protocolos de cualquiera de estos kits Dynabeads, siga el enlace correspondiente del n.º de cat. indicado anteriormente.

Para obtener información sobre plásticos y productos de configuración de placas para su uso con instrumentos KingFisher, consulte la ficha Accessories (Accesorios).

Los kits MagMAX Viral/Pathogen están diseñados para la recuperación de gran capacidad de ácidos nucleicos y son compatibles con muestras de bajo valor cuantitativo. Solo hay dos protocolos para el intervalo de entrada de volumen bajo a volumen alto. No se requiere portador, lo que significa menos interferencia con la NGS posterior y menos pasos necesarios.

Los kits de aislamiento de ácidos nucleicos MagMAX Viral/Pathogen proporcionan un método sensible y sencillo para la extracción de ARN y ADN de muestras que contienen virus y bacterias gramnegativas, como lo pone de manifiesto la detección eficaz de hasta 50 copias de la entrada en varios tipos de muestras.

El kit de aislamiento de ácidos nucleicos MagMAX Viral/Pathogen Ultra (A42356) contiene los mismos reactivos que los kits estándar de aislamiento de ácidos nucleicos Viral/Pathogen, así como una mezcla de enzimas adicional necesaria para lisar y recuperar ácidos nucleicos de patógenos difíciles como bacterias grampositivas, levaduras y hongos. Se puede utilizar para la detección y la identificación de patógenos desconocidos, incluida la microbiota del aparato respiratorio difícil de detectar. Dado que las enzimas adicionales no son necesarias para el aislamiento del ARN vírico, este kit no se recomienda para las pruebas de detección de SARS-CoV-2.

Nota: Si necesita aislar el ARN del SARS-CoV-2, asegúrese de solicitar el kit de aislamiento de ácidos nucleicos MagMAX Viral/Pathogen II (MVPII) (n.º de cat. A48383R), no el kit de aislamiento de ácidos nucleicos MagMAX Viral/Pathogen Ultra (n.º de cat. A42356). La versión Ultra contiene una mezcla enzimática adicional necesaria para lisar bacterias grampositivas y hongos, que no es necesaria para el aislamiento de ARN del SARS-CoV-2.

Para ver datos de rendimiento, notas de aplicación e información detallada sobre protocolos para cualquiera de estos kits MagMAX, siga el enlace correspondiente de Más información o n.º de cat. indicado anteriormente.

Para ver un vídeo del flujo de trabajo de los kits de aislamiento de ácidos nucleicos MagMAX Viral/Pathogen con instrumentos KingFisher, siga el enlace correspondiente del n.º de cat. indicado anteriormente.

Para obtener información sobre plásticos y productos de configuración de placas para su uso con instrumentos KingFisher, consulte la ficha  Accessories (Accesorios).

El microbioma humano es complejo y multifacético, y cada hábitat alberga diferentes taxones distintivos dominantes. El intestino contiene la mayor parte de la microbiota asociada con el cuerpo humano y ha sido uno de sus ecosistemas más minuciosamente examinados. Se suelen utilizar muestras fecales para estos análisis porque son fáciles de obtener y contienen una gran cantidad de biomasa. Los líquidos y secreciones corporales como la saliva y la orina se estudian menos, pero cada uno contiene comunidades bacterianas únicas.

Utilice el kit de aislamiento de ácidos nucleicos MagMAX Microbiome Ultra para aislar el ácido nucleico total de las heces, la orina, la saliva y otras muestras. Puede extraer ADN y ARN sin inhibidores, de alta calidad, pureza y rendimiento que son ideales para la investigación en metagenómica y otras aplicaciones posteriores. La digestión enzimática permite recuperar ácidos nucleicos de una amplia variedad de microrganismos sin necesidad de realizar pasos de procesamiento adicionales.

El kit puede aislar ácidos nucleicos víricos y bacterianos, y se ha probado con muestras fecales de mamíferos, reptiles, peces y aves; muestras en medio de transporte vírico, de piel y leche, así como cultivos de levaduras y bacterias. Se recomienda para laboratorios de investigación que estén desarrollando sus propias pruebas de microbiomas y necesiten soluciones de bajo o alto rendimiento para aislar el ácido nucleico total.

Para ver los datos de rendimiento y consultar notas de aplicación de este kit MagMAX, siga el enlace Más información correspondiente anterior.

Para obtener información de los protocolos para este kit MagMAX, siga el enlace correspondiente del n.º de cat. indicado anteriormente.

Para obtener información sobre plásticos y productos de configuración de placas para su uso con instrumentos KingFisher, consulte la ficha Accessories (Accesorios).

Las paredes celulares de las plantas pueden ser muy difíciles de interrumpir y los lisados suelen contener cantidades importantes de compuestos como fenólicos taninos y polisacáridos complejos que pueden afectar a la calidad del ácido nucleico e inhibir las reacciones posteriores. A pesar de estos desafíos, estos kits MagMAX pueden aislar eficazmente ADN o ARN de diversas muestras de plantas como Arabidopsis thaliana, hojas de pimiento, hojas de colza, hojas de maíz, cebolla de verdeo, hojas de limón, hojas de avena, naranja, agujas de pino, hojas de espinaca, hojas de tomate y hojas de pasto de trigo.

Utilice los kits de ADN y ARN vegetal MagMAX con instrumentos KingFisher para la purificación automatizada de ADN y ARN de una amplia variedad de especies vegetales y tipos de tejidos, incluidos los hongos de plantas. El ADN o ARN purificado no contiene proteínas, nucleasas ni otros contaminantes, inhibidores y ácidos nucleicos, y se puede utilizar en una gran variedad de aplicaciones posteriores, como PCR, qPCR y NGS. Los kits están optimizados para el aislamiento de ADN y ARN a partir de 10 a 100 mg de muestras vegetales.

Para ver datos de rendimiento y los protocolos de cualquiera de estos kits MagMAX, siga el enlace correspondiente del n.º de cat. indicado anteriormente.

Para obtener información sobre plásticos y productos de configuración de placas para su uso con instrumentos KingFisher, consulte la ficha Accessories (Accesorios).

Hay dos variaciones en el proceso de inmunoprecipitación. Si la proteína objetivo es abundante, puede utilizar el método directo, en el que el anticuerpo primario (Ac) se incuba por primera vez con las esferas magnéticas Dynabeads, seguido de un lavado para eliminar los anticuerpos no unidos. Las esferas unidas al Ac se incuban con la muestra para captura, seguida de lavado y elución.

Si la proteína objetivo no es abundante, puede utilizar el método indirecto, en el que el Ac primario se incuba por primera vez con el lisado celular para formar un complejo de antígeno-Ac. Posteriormente, el complejo se captura añadiendo esferas Dynabeads a la muestra, seguido de lavado y elución.

Aunque la IP se puede realizar manualmente, el número de pasos de lavado y el tiempo práctico aumentan proporcionalmente con el número de muestras. La automatización del proceso con instrumentos KingFisher puede eliminar incoherencias introducidas mediante pipeteo y otras manipulaciones manuales. Los protocolos automatizados replican los protocolos manuales, que proporcionan un rendimiento proteico objetivo igual de alto y la misma unión no específica baja y alta reproducibilidad. Tanto si trabaja con 10 o 96 muestras, el protocolo de IP dura menos de 40 minutos. Solo tiene que cargar los reactivos en las placas, pulsar el botón Start (Empezar) y, para cuando haya preparado el análisis posterior, la IP estará lista. Es posible que sea necesario cierto grado de optimización, como los tiempos de incubación, en función de su Ac y de la abundancia o especificidad de su proteína objetivo.

La decisión entre los kits depende de la proteína objetivo que necesite aislar. Si tiene un anticuerpo primario para la proteína, le recomendamos que utilice la proteína A o G Dynabeads o sus kits asociados. Si tiene un anticuerpo secundario, utilice uno de los productos de IgG Dynabeads M-280. Por último, si tiene un anticuerpo biotinilado o ligando, utilice la estreptavidina Dynabeads M-280. 

Para ver datos de rendimiento, notas de aplicación e información sobre protocolos de cualquiera de estos productos Dynabeads, siga el enlace correspondiente del n.º de cat. indicado anteriormente.

Para obtener información sobre plásticos y productos de configuración de placas para su uso con instrumentos KingFisher, consulte la ficha Accessories (Accesorios).

Los kits SMART Digest de Thermo Scientific combinados con instrumentos KingFisher representan el último avance en digestión automatizada de proteínas para aplicaciones de mapeo y cuantificación de péptidos. Los kits hacen que la digestión de proteínas sea rápida, sencilla, reproducible y fácil de automatizar.

Los kits de digestión de proteínas utilizan enzimas termoestables optimizadas en esferas magnéticas, lo que reduce al mínimo la posibilidad de que se generen modificaciones postraslacionales. La automatización del proceso reduce al mínimo la manipulación manual, garantiza un tiempo óptimo de las reacciones y reduce la exposición a altas temperaturas, lo que aumenta la reproducibilidad de los resultados^[1].

Los kits de inmunoafinidad (IA) combinan la digestión enzimática con la captura mediante IA en una única esfera para una alta sensibilidad. Esta innovación genera una gran confianza en los resultados de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) y de cromatografía líquida-espectrometría de masas (LC/MS). Los kits SMART Digest aportan ventajas especialmente para aplicaciones de cuantificación y caracterización biofarmacéutica y de biomarcadores.

Para aplicaciones de mapeo de péptidos, elija entre digestión enzimática optimizada y termoestable de tripsina, quimotripsina o proteinasa K para la escisión específica de la secuencia de su proteína. La enzima, en esferas magnéticas, se activa a temperaturas elevadas para una digestión acelerada en condiciones de desnaturalización de proteínas.

• La tripsina separa el extremo C terminal de los residuos de los aminoácidos lisina y arginina
• La quimotripsina separa las uniones peptídicas formados por residuos aromáticos como la tirosina, la fenilalanina y el triptófano
• La proteinasa K separa la unión de péptidos adyacente al grupo carboxilo de aminoácidos alifáticos y aromáticos con grupos α-amino bloqueados

Para aplicaciones de cuantificación de péptidos, los kits de IA SMART Digest realizan la digestión de tripsina con captura mediante inmunoafinidad en un solo pocillo. La porción de inmunoafinidad (estreptavidina, proteína A o proteína G) se utiliza habitualmente para aumentar la sensibilidad mediante la purificación de proteínas de bajo nivel a partir de matrices biológicas complejas.

Para ver datos de rendimiento y notas de aplicación para cualquiera de estos productos SMART Digest, siga el enlace correspondiente del n.º de cat. indicado anteriormente.

Para obtener información sobre plásticos y productos de configuración de placas para su uso con instrumentos KingFisher, consulte la ficha Accessories (Accesorios).

Existen tres variaciones en el proceso de aislamiento celular. En el aislamiento de células positivas, los reactivos Dynabeads se unen a las células objetivo y los complejos de células y esferas se desplazan a las puntas magnéticas KingFisher. Después de desechar el sobrenadante, solo permanecen las células objetivo puras.

En el aislamiento de células negativas, los kits Dynabeads Untouched™ se utilizan para agotar las células no deseadas y dejar así células objetivo sin esferas y sin tocar en la muestra. Por ejemplo, el kit de aislamiento de linfocitos T humanos Dynabeads Untouched incluye una mezcla de anticuerpos para eliminar linfocitos B, linfocitos citolíticos naturales, monocitos, plaquetas, células dendríticas, granulocitos y eritrocitos, y deja todos los linfocitos T (y solo los linfocitos T) para su uso posterior. Otros kits Dynabeads Untouched pueden eliminar todos menos los subconjuntos de linfocitos CD4 o CD8.

Si está interesado en varios tipos de células, puede utilizar reactivos Dynabeads de disminución específica para células para eliminar todos los tipos de células no deseados de una muestra heterogénea con una eficiencia >99 %. Solo se dejarán células de interés en el sobrenadante reducido.

Para ver datos de rendimiento, notas de aplicación e información sobre protocolos para cualquiera de estos productos Dynabeads, siga el enlace correspondiente de Más información indicado anteriormente.

Para obtener información sobre plásticos y productos de configuración de placas para su uso con instrumentos KingFisher, consulte la ficha Accessories (Accesorios).