面對PBMC和成團細胞等困難樣品,依然輕鬆實現準確的細胞計數

Features of the Countess 3 instruments

搭載AI人工智慧讓Countess 3自動細胞計數儀如同細胞生物學家般"思考",因而能簡單、快速、並自動地生成準確且具再現性的計數結果。其應用範圍不侷限於計數,亦擴展到細胞活性、細胞凋亡、轉染效率等方面。


精準

當您使用自動化設備為您計數細胞時,請相信它的精準度和您一樣—甚至更佳。準確度代表它會正確地進行細胞計數,而精確度則表示無論操作者是誰,它每次都會產生相同的實驗結果。

 

導入人工智慧。Countess 3(明視野)和 Countess 3 FL(明視野和螢光模式)自動細胞計數儀值得您的信任,因為它們運用深度學習神經網路演算法(deep-learning neural network algorithm)開發,每次皆能準確計數。該演算法由專業細胞生物學家,根據觀測數百個培養盤(包含數十種不同細胞類型和樣品)後特徵學習以進行細胞辨識。

 

如此打造出的細胞計數儀能像細胞生物學家一樣"思考",即便是外周邊血單核細胞(PBMC)、成團細胞以及樣品碎片等具有挑戰性的細胞樣品也能輕鬆勝任。在高解析度的Countess螢幕上,您可以看到正在計數的細胞與未計數的碎片。

 

與手動血球計數器相比,使用Countess 3儀器進行全自動細胞計數可以減少諸多因素造成的數據錯誤及變異,包括操作者主觀性與視覺疲勞、計數區域差異和具挑戰性的樣品。Countess 3細胞計數儀兼具手動細胞計數的準確性與流式細胞儀計數的精確度,且無需流式細胞術的費用或培訓。

機器學習演算法(machine-learning algorithm)實現了高準確度的細胞計數,可媲美流式細胞儀。

使用Attune NxT流式細胞儀(紫色長條圖)、Countess 3 FL自動細胞計數儀(紅色長條圖)以及血球計數器和顯微鏡(手動計數,灰色長條圖)對CHO-K1、HeLa、HEK293、Jurkat和人類PBMC(包含各種大小)進行了計數。Countess 3 FL細胞計數儀和血球計數器的長條圖代表6次獨立計數的平均值且其高度一致。可觀察到手動計數的誤差線(計數標準差)比Countess 3計數或流式細胞儀的誤差線更寬。

擴展計數區域。 為了節省手動計數的時間,許多操作員只針對血球計數器網格上的一或兩個方格進行計數。計算更多的方格(更大的區域)通常會獲得更準確的結果,但需花費更多時間。Countess 3自動細胞計數儀可檢測近乎完整的四個方格區域,透過降低細胞分佈變化的影響來提高準確性。Countess 3可以在30秒的時間以內完成自動對焦、自動亮度調整、影像擷取並完成細胞計數。

手動細胞計數與自動化細胞計數的計數區域比較

Countess 3計數儀的計數面積約為標準血球計數器的3.8倍。

處理成團細胞和碎片。 由於細胞之間的邊界難以辨別,手動計數成團的細胞極具挑戰性,即使使用自動計數器亦然,包含碎片的樣品更進一步增加了計數的複雜性。Countess 3自動細胞計數儀可以在進行細胞計數時自動排除碎片,其先進的演算法可以清晰地識別成團細胞內的細胞邊界,從而實現高度準確的細胞計數。

先進的演算法可準確計數成團細胞和碎片

使用Countess 3 FL自動細胞計數儀,在明視野模式下針對微小且易成團的RAW細胞(小鼠微噬細胞)進行計數。計數演算法可靠地對團塊中的細胞進行辨識,正確區分出細胞並加以計數。活細胞以綠色輪廓表示,死細胞則是紅色輪廓。碎片(未圈出輪廓)在計數時會自動忽略。


Simple and easy cell counting

Counting cells in brightfield mode with a Countess 3 or Countess 3 FL Automated Cell Counter is simple and easy. Simply prepare the slide, enable Rapid Capture and Autosave, and insert the slide. The instrument does the rest automatically: illuminate, focus, and count.

簡單

使用Countess 3或Countess 3 FL自動細胞計數儀,在明視野模式下進行細胞計數,簡單又輕鬆!您僅需準備好玻片,啟用快速影像擷取和自動儲存,然後插入玻片。儀器會自動完成其餘工作:光源亮度調節、對焦和計數。

The touchscreen interface makes it easy to visualize the cell population counted and, for example, to create “gates” that exclude unwanted cells from counts based on cell size, brightness, circularity, and/or fluorescence intensity. View your cells in a histogram or scatter plot by selecting the graph icon in the upper right of the results screen. As you use the slider controls to adjust your gate parameters, you can see the histogram or scatter plot change in real time. For convenience, the average cell size (for brightfield counts) or fluorescence intensity (for fluorescence counts) is displayed at the bottom of the histogram.

 

The touchscreen interface can quickly move you from the results screen to histogram and scatter plot screens.  The histogram and scatter plots enable visualization of the cell population and gating based on size, brightness, and circularity.

Intuitive gating interface

In this scatter plot, the cell population is seen as Live (green) and Dead (red) populations.  The axis’ can be changed between size and circularity.

In this histogram, the cell population is graphed based on cell number and relative fluorescence units (RFU). Using the gating fields on the right with brightfield (BF), you can gate based on size, brightness, and circularity using the slider bar just to the left of the gating menu. If Texas Red (TX Red) or GFP is selected, gating of RFU intensity could be performed.


快速

Countess 3自動細胞計數儀可在30秒內產生結果。透過快速影像擷取、自動亮度調整、自動對焦和自動儲存等功能,您僅需要注入樣品和插入玻片即可。細胞培養室的時間寶貴,使用Countess 3計數儀,您可以快速完成多種細胞實驗應用。

 

除了計數速度飛快之外,Countess 3系統還簡化了細胞計數流程,刪除了許多與手動細胞計數相關的繁瑣步驟,包括亮度與焦距調整、計算細胞濃度以及製作報告。如此省下的時間可快速作為它用。如果您的實驗室每天計數5張玻片,您每個月可以省下10-15小時(具體取決於所選玻片);如果您每天計數25張玻片,您則可以節省50–75小時!從手動細胞計數切換至自動細胞計數時的顯著優勢,是獲得更多額外時間以完成細胞培養或其他實驗室工作。

手動血球計數器與自動細胞計數過程的比較

下表顯示了手動血球計數與Countess 3自動細胞計數儀之間的實際步驟比較。使用Countess可重複使用玻片時已顯著節省時間,而使用一次性玻片時則更加明顯。

觸控式螢幕介面讓您更輕鬆!例如,在計數時設定"gates",則可根據細胞大小、亮度、圓度和/或螢光強度排除不想要的細胞。透過選定圖標後可在長條圖中查看您的細胞。當您上下滑動控制項以調整gate參數時,可以觀察到長條圖的即時變化。為方便起見,長條圖的底部顯示平均細胞大小(於明視野計數模式)或螢光強度(於螢光計數模式)。


自動

使用Countess 3自動細胞計數儀,不僅計數會自動化完成,系統還會自動調整亮度和對焦以獲得最佳對比度和解析度,並自動儲存細胞計數和數據(如果您選擇該選項)。本軟體還包括便利的內建預稀釋和細胞繼代計算器,這些功能對於進行細胞培養工作特別方便。

預稀釋計算器

如果您的細胞樣品經過濃縮,而在計數前需對其進行稀釋,請在此處輸入樣品和緩衝液體積,Countess 3細胞計數儀將自動重新計算樣品濃度。該濃度亦考慮到trypan blue溶液的添加,以在明視野模式下進行細胞活性測量。

細胞繼代計算器

如果您的下游實驗需要特定的樣品濃度,請在此處輸入所需的濃度和體積,Countess 3細胞計數儀將自動計算所需的細胞樣品數量以及細胞培養基或緩衝液容量。您的細胞計數結果會自動包含於計算中。

Fluorescence intensity excitation lock

 

When running many similar samples back-to-back, fluorescent intensity locks can adjust and lock position, reducing workflow time with subsequent runs.

Nominal focus

 

Countess 3 autofocus is able to easily detect and focus on cells enabling accurate counts. When users want to adjust the start point of the autofocus, the nominal focus is easily adjusted and can be applied.

Using protocols. Creating and using saved protocols is simple and easy. After specifying which count mode and which light cubes are used, users can then set specific calculations and gating parameters to the count for customized counts.

保存數據結果和報告。 您可以將細胞計數結果、細胞數據和影像存入USB隨身碟,或透過Wi-Fi dongle儲存到Thermo Fisher™ Connect雲端平台。資料結果可儲存為兼容電子試算表的CSV檔案,細胞數據可保存為流式細胞儀標準FCS文件,而影像則可以TIFF、PNG或JPG格式進行儲存。您可以隨時隨地讀取這些文件,無論是否身處實驗室—不論時間或地點,在您需要時輕鬆獲得數據。

 

您還可以整合結果、影像以及機器設定參數,儲存成可列印的PDF報告。

結果、影像和機器設定參數,儲存成可供列印的PDF報告。


兼容可重複使用玻片

兩款型號的Countess 3計數儀均可相容於Invitrogen Countess可重複使用玻片,這種環保且經濟的選擇,可避免一次性玻片的浪費和成本。即使您的實驗室每天只使用五張玻片,透過可重複使用玻片,您可顯著減少每年產生的廢棄物。這項創新讓實驗室能夠負擔自動化細胞計數的成本,而不需持續支出一次性玻片的費用。

Invitrogen Countess一次性細胞計數腔室玻片依然好用,其無需像可重複使用玻片般進行清潔並等待其乾燥。一次性玻片的優勢在於可便利且快速的處理大量細胞樣品,或是對污染性與危險樣品的處理進行簡化。


符合21 CFR Part 11的軟體

Countess SAE軟體解決方案是一個支援電子保存記錄的選配軟體模組,其符合美國食品藥物管理局的電子記錄和簽名規範,以及聯邦法規21 CFR Part 11的要求。該法規對以電子檔案取代紙本文件定義出規則。

 

21 CFR part 11的合規性包含程序要求和技術要求。

  • 程序要求是最終用戶機構所制定的標準操作程序。

  • 技術要求是所使用的合規性管理軟體的功能特徵。

僅滿足技術要求並不能保證符合21 CFR part 11。合規性是由機構工作流程和所用系統兩者共同決定。

 

本款軟體的功能包括可限制未經授權的用戶,密碼設定原則和失效日期,用戶權限或角色的定義,透過審查登入紀錄、報告與工作流程電子簽章來追蹤所有數據修改。購買Countess SAE授權軟體後,所有Countess 3和Countess 3 FL自動細胞計數儀都可以在SAE模式下運行。為實現21 CFR Part 11合規性,您的機構尚需以合規方式制定並記錄標準操作程序。

組成

Countess SAE軟體解決方案由三個緊密連接的元件組成

  1. SAE軟體用於配置Countess自動細胞計數儀的安全性、審核和電子簽章(SAE)設定。SAE軟體包含SAE管理控制台(安裝於具備靜態IP位址的網路伺服器)與SAE應用設定檔。
  2. SAE授權碼以啟用Countess自動細胞計數儀的SAE設置。
  3. SAE模式在Countess自動細胞計數儀上運行,並遠端連接到SAE管理控制台。

1. SAE軟體—SAE管理控制台

SAE管理控制台是符合21 CFR Part 11的Countess SAE軟體解決方案的一部分,使用者可透過它對Countess儀器進行配置以滿足特定需求。另一部分即為Countess應用設定檔,必須先安裝在SAE管理控制台上,然後才能使用Countess儀器上的SAE設置。在SAE管理控制台上安裝Countess應用設定檔軟體後,將透過SAE伺服器連接Countess儀器。SAE管理控制台必須在具備靜態IP位址的網絡伺服器上運行。

SAE管理控制台和Countess應用設定檔的介面圖。

2. 適用於21 CFR Part 11合規性Countess SAE軟體解決方案的SAE授權軟體

符合21 CFR Part 11的Countess SAE授權軟體,適用於Countess 3和Countess 3 FL自動細胞計數儀,並使用SAE管理控制台以遵守FDA 21 CFR Part 11對安全性、審核和電子簽章(SAE)的規範。在每台Countess 自動細胞計數儀上啟用SAE模式皆需要一個SAE授權軟體。

3. Countess 3自動細胞計數儀上的SAE模式

在Countess儀器透過SAE管理控制台軟體啟用SAE模式,以實現21 CFR Part 11合規性。當SAE模式啟用後,Countess儀器會透過SAE伺服器連接至SAE管理控制台。接著Countess儀器將根據SAE管理控制台的定義,實施安全性、審核和電子簽章等設定。

 

本軟體特點包括限制未經授權的用戶進入系統,密碼設定原則和失效日期,定義用戶權限和角色,透過審查登入紀錄、報告和工作流程電子簽章以追蹤所有數據更改。購買Countess SAE授權軟體後,所有Countess 3和Countess 3 FL自動細胞計數儀都可以在SAE模式下運行。

啟用Countess 3或3 FL儀器上的SAE模式

功能

SAE管理控制台的功能

 

系統安全性 透過用戶ID、密碼、角色和權限,控制用戶對軟體的使用。軟體預設三種用戶角色,其一具備完整權限(管理員),其二刪除部分權限(首席科學家),其三完全沒有權限(技術人員)。可以編輯預設角色,亦可以創建更多用戶角色及權限。
審核 可追蹤用戶執行的操作,並變更SAE管理控制台的設置。本軟體會以靜默方式自動審核某些操作。您可以選擇其他項目進行審核並指定審核模式。審核功能為SAE管理控制台的變更和操作提供審核報告。
電子簽章(e-signature) 用戶需提供使用者名稱和密碼以確定執行。您可以配置電子簽章,以便用戶可以輸出簽名文件並列印具簽名的報告。您還可以配置電子簽章事項的需求為多個簽名,或是要求具特定權限的用戶進行簽名。

系統安全

僅限授權人員透過使用者ID和密碼進行訪問。

SAE管理控制台介面,顯示為正在創立新使用者帳戶。

審核

SAE管理控制台的審核功能,包括追蹤使用者的操作以及任何SAE設定變更。本軟體以靜默方式追蹤的操作包括登入和登出、影像採集和影像輸出。

SAE管理控制台審核歷史紀錄

SAE管理員控制台的審核歷史紀錄的選項有 (1) 列出操作、系統配置和應用物件記錄。對於每個事件,可顯示 (2) 應用程序、(3) 操作和 (4) 日期和使用者。您還可以 (5) 記錄輸出為可閱讀或可列印格式(.txt或PDF)。

在審核功能中,可針對特定使用者進行審核,以及提供審核是否靜默、可供選擇或是必需等選項。此外,可將使用者的操作、SAE模組變更、以及軟體或儀器操作與事件等以報告輸出。

電子簽章(e-signature)

SAE管理控制台的電子簽名功能可決定用戶必須滿足簽名需求。

SAE管理控制台的電子簽章設置

SAE管理員控制台的電子簽章選項允許您 (1) 自定義電子簽章的含義,(2) 根據含義和角色選擇所需簽名數量,以及 (3) 選擇特定含義簽名的資料類型。

在電子簽章功能中,您可以在每個電子簽名事項中配置不同角色的使用者必須簽署的數量。您還可以創建不同的簽名含義並為每個簽名客製化需求。


Software updates

To download the latest software for Countess 3 Automated Cell Counters, including the 21 CFR Part 11 compliance option, see our software download page.  

Explore the Interactive 3D Virtual Tour

Applications beyond counting

Countess 3 Automated Cell Counters do much more than simply count cells. With trypan blue staining, you can assess the percentage of cells in your sample that are viable. Or, by staining your samples with one of the many fluorescent dyes that can be detected with the Countess 3 FL system, you can perform more sophisticated viability analysis, detect different stages of apoptosis and cell death, measure transfection efficiency, and much more. 

Viability measurement using trypan blue

 

Murine PBMCs, often difficult to count due to their small size and low contrast, were counted with the Countess 3 Automated Cell Counter. In this brightfield count, 0.4% trypan blue stain was used to distinguish viability, with live cells remaining translucent and dead cells staining dark. Red contours (circles) indicate cells counted as dead, while green contours indicate cells counted as live.

 

 

Viability measurement using fluorescence 

 

In a second experiment, murine PBMCs were stained with ReadyCount Green/Red Cell Viability Stain and counted with the Countess 3 FL Automated Cell Counter. In fluorescence mode, this reagent’s pre-optimized mixture of acridine orange and propidium iodide (AO/PI) results in greater live/dead specificity. Dead cells (38%) are stained red by PI and are detected with the EVOS Texas Red light cube, while all nucleated cells (99%) fluoresce green with AO and are detected with the EVOS GFP light cube.

Single-cell data. Countess 3 cell counters analyze and store data for every cell in your sample. You can zoom in on any cell and display its size, brightness, circularity, and fluorescence values. You can also generate a dot-plot in Flow Cytometry Standard (FCS) format and analyze, transform, and reformat the data in many flow cytometry software analysis programs.

With single cell data, zoom in on any cell and get a readout of its size, brightness, circularity, and fluorescence intensity.

Single-cell data for all the cells in a sample can be exported to an FCS dot-plot file and analyzed, transformed, and reformatted like flow cytometry data. This graph plots GFP fluorescence intensity vs circularity.

Counting isolated nuclei. Nuclei isolation allows characterization of heterogeneity among samples for single-cell assays like gene expression or ATAC sequencing. The Countess 3 FL Automated Cell Counter enables small object counting of as small as 3 microns when using fluorescence-only counting mode to facilitate an accurate count of isolated nuclei for downstream applications.

Mouse brain nuclei precisely counted with Countess 3 FL Automated Cell Counter using FL-based count.

Nuclei isolations from brain tissue are difficult to produce accurate counts due to the amount of cellular debris seen in brightfield images. *Image taken by 10x Genomics R&D.

不限於計數的更多應用

單細胞數據。 Countess 3細胞計數儀可分析和儲存您樣本中每個細胞的數據。您可以放大任何細胞並顯示其大小、亮度、圓度和螢光數值。您還可以生成流式細胞儀標準(FCS)格式的點狀圖,並在多種流式細胞術軟體程式中進行分析、轉換與重新設置數據格式。

Cell lines verified on the Countess 3 Automated Cell Counters

Explore our comprehensive table showcasing the cell lines verified using the Countess automated cell counters, providing insight into their performance and suitability for your research needs.


訂購資訊

您的Countess 3自動細胞計數儀如需搭配Countess SAE軟體解決方案一起使用,您可以單獨購買授權軟體,或是購買Countess 3 FL儀器加上授權軟體的組合。


僅供研究用途,不得用於診斷程序。