Recuentos de células exactos, incluso para muestras difíciles como CMSP y células grumosas

La inteligencia artificial ayuda a los contadores de células automatizados Countess 3 a "pensar" como un biólogo celular, generando recuentos exactos y reproducibles de forma sencilla, rápida y automática. Las aplicaciones se extienden desde el recuento a la viabilidad, la apoptosis, la eficacia de la transfección y mucho más.


Exacto y preciso

Cuando permite que un dispositivo automatizado cuente las células, debe confiar en que es tan exacto y preciso como usted, o incluso mejor. La exactitud significa que contará las células correctamente y la precisión significa que producirá el mismo resultado cada vez, independientemente de quién lo utilice.

 

Incorpora inteligencia artificial. Puede confiar en los contadores de células automatizados Countess 3 (campo brillante) y Countess 3 FL (campo brillante y fluorescencia) porque se han desarrollado utilizando un algoritmo de red neuronal de aprendizaje profundo para generar recuentos exactos cada vez. El algoritmo fue enseñado a reconocer células por biólogos expertos en células basándose en cientos de placas que contenían docenas de tipos de células y muestras diferentes.

 

El resultado es un contador de células que "piensa" como un biólogo celular, incluso para muestras de células difíciles, como las células mononucleares de sangre periférica (CMSP), las células grumosas y las muestras con residuos. En la pantalla Countess de alta resolución, puede ver las células que se están contando y los residuos que no.

 

En comparación con los recuentos manuales con hemocitómetro, el recuento de células automatizado con instrumentos Countess 3 puede reducir los errores de datos y la variabilidad de muchas causas, incluidas la subjetividad y fatiga del operador, el área de recuento y las muestras complejas. Los contadores de células Countess 3 alcanzan tanto la exactitud de los recuentos de células manuales como la precisión de los recuentos con citómetros de flujo, sin el gasto o el entrenamiento requerido por la citometría de flujo.

Los algoritmos de aprendizaje por máquina dan como resultado recuentos de células muy exactos, comparables con los recuentos con citómetros de flujo.

Se contaron CHO-K1, HeLa, HEK293, Jurkat y CMSP humanos (en una amplia gama de tamaños) con el citómetro de flujo Attune NxT (barras moradas), un Countess Automated Cell Counter 3 FL (barras rojas) y un hemocitómetro y microscopio (recuento manual, barras grises). El instrumento Countess 3 FL y las barras del hemocitómetro representan un promedio de 6 recuentos independientes y son altamente uniformes. Las barras de error (desviación estándar para los recuentos) son más anchas para los recuentos manuales que para los recuentos con Countess 3 o citometría de flujo.

Amplía el área de recuento. Para ahorrar tiempo durante los recuentos manuales, muchos operadores cuentan sólo uno o dos cuadrados en una rejilla de hemocitómetro. Contar más cuadrados (un área más grande) suele producir resultados más exactos, pero lleva más tiempo. Los contadores de células automatizados Countess 3 analizan un área de casi cuatro cuadrados, lo que aumenta la exactitud al reducir los efectos de la variación en la distribución celular. Además, pueden completar el enfoque automático, la iluminación automática, la captura de imágenes y el recuento en menos de 30 segundos.

Área de recuento de recuentos de células manuales frente a automatizados

El área de recuento de los instrumentos Countess 3 es aproximadamente 3,8 veces mayor que con un hemocitómetro estándar.

Gestiona los grumos de células y los residuos. Las células grumosas pueden ser difíciles de contar manualmente o incluso con contadores automatizados, ya que es difícil discernir los bordes entre las células. Las muestras que contienen residuos aumentan la complejidad del recuento. Los contadores de células automatizados Countess 3 excluyen automáticamente los residuos de los recuentos de células y sus algoritmos avanzados pueden identificar claramente los límites de las células dentro de los grupos de células, lo que produce unos recuentos de células muy exactos.

Los algoritmos avanzados generan recuentos exactos con células grumosas y residuos de muestras.

El Countess Automated Cell Counter 3 FL se utilizó en modo de campo brillante para contar células RAW (micrófago de ratón), que son pequeñas y propensas a aglutinarse. El algoritmo de recuento puede resolver de forma fiable las células en los grumos y segmentar correctamente y contar las células. Las células vivas están delineadas en verde y las células muertas, en rojo. Los residuos (no descritos) se omiten automáticamente de los recuentos.

"Gran dispositivo. Amplia gama de densidades celulares que puede manejar. Bueno para distinguir los grumos y contar las células dentro de los grumos".

 

Joanne Rzepka,

Investigación + Desarrollo en Veterinaria

"Un contador de células muy exacto que se puede utilizar para contar células fluorescentes también. Excelente producto. Estoy muy contento con él. Lo recomiendo encarecidamente".

Massimo Ammirante,

Universidad de California, San Diego

"¡Es muy uniforme en los resultados!"

Kim Sylvia,

Sanford Burnham Medical Research Institute


Rapidez

Los contadores de células automatizados Countess 3 producen resultados en menos de 30 segundos. Con captura rápida, iluminación automática, enfoque automático y guardado automático, lo único que tiene que hacer es cargar la muestra e insertar el portaobjetos. El tiempo en el laboratorio de cultivo celular es muy valioso, y con el instrumento Countess 3 puede entrar y salir rápidamente para mantener los protocolos de distancia social.

 

Además de la velocidad de recuento pura, los sistemas Countess 3 agilizan el proceso de recuento de células, eliminando muchos de los tediosos pasos asociados con el recuento de células manual, incluidos los ajustes de iluminación y enfoque, el cálculo de las concentraciones celulares y la preparación de informes. El tiempo ahorrado puede aumentar rápidamente. Si un laboratorio cuenta cinco portaobjetos al día, se pueden ahorrar de 10 a 15 horas al mes (dependiendo de la elección de portaobjetos); si cuenta 25 portaobjetos al día, se pueden ahorrar de 50 a 75 horas. Este tiempo adicional se puede dedicar a completar el procesamiento de cultivos celulares y otras actividades del laboratorio, lo que supone en una ventaja significativa al pasar del recuento de células manual al automatizado. 

Comparación del hemocitómetro manual con los procesos de recuento de células automatizado 

La tabla siguiente muestra una comparación de los pasos de recuento de células prácticos entre el recuento manual con hemocitómetro y los contadores de células automáticos Countess 3. El tiempo ahorrado, significativo cuando se utiliza el portaobjetos reutilizable Countess, es aún más espectacular cuando se utilizan portaobjetos desechables.

"Recuento rápida y buen instrumento, fácil de usar! ¡Me encanta el pequeño contador!"

Dr. Xin Xu,

Baylor College of Medicine


Simple

El recuento de células en modo de campo brillante con un     Countess Automated Cell Counter 3 o Countess 3 FL es simple y sencillo. Solo tiene que preparar el portaobjetos, activar la captura rápida y el guardado automático e insertar el portaobjetos. El instrumento hace el resto automáticamente: iluminar, enfocar y contar.

El recuento de células automatizado no sólo es más sencillo y menos tedioso que el recuento manual, sino que también requiere menos formación. 

 

Pantalla táctil sensible e interfaz intuitiva. El software de recuento celular automatizado Countess 3 es intuitivo y fácil de navegar. La sensible pantalla táctil LCD no precisa un ordenador externo. La resolución 1280 x 800 de la pantalla proporciona imágenes de células de alta calidad, que se pueden complementar con ayudas para identificar los recuentos de células vivas/muertas y, con el Countess Automated Cell Counter 3 FL, con la capacidad de visualizar la fluorescencia. La pantalla está a ras del instrumento, lo que facilita su limpieza. 

La interfaz de pantalla táctil facilita, por ejemplo, crear "compuertas" que excluyan del recuento a las células no deseadas basándose en el tamaño, el brillo, la circularidad y/o la intensidad de fluorescencia de la célula. Para ver las células en un histograma, seleccione el icono del gráfico. A medida que utiliza los controles deslizantes para ajustar los parámetros de la compuerta, puede ver el cambio del histograma en tiempo real. Para mayor comodidad, el tamaño de célula promedio (para recuentos de campos brillantes) o la intensidad de la fluorescencia (para recuentos de fluorescencia) se muestra en la parte inferior del histograma.

Intuitiva interfaz de selección

En este histograma, el control deslizante se ha utilizado para eliminar una población de células con fluorescencia de GFP más baja, centrándose en lugar de ello en la población de células GFP positivas de mayor intensidad.

"Bajo mantenimiento, recuentos de células rápidos y precisos. Fácil de usar y comprender para los estudiantes".

 

Robert Dean,

D'Youville College


Automático

Con los contadores de células automatizados Countess 3, no sólo se cuenta de forma automatizada. El sistema ajusta automáticamente la iluminación y el enfoque para obtener un contraste y una resolución óptimos, y guarda automáticamente los recuentos de células y los datos (si elige esa opción). El software también incluye calculadoras de predilución y división celular, que son especialmente prácticos para el trabajo de cultivo celular.

Calculadora de predilución

Si la muestra de células estaba concentrada y la diluyó antes del recuento, introduzca aquí los volúmenes de la muestra y del tampón y los contadores de células Countess 3 volverán a calcular automáticamente la concentración de la muestra. La concentración también tendrá en cuenta la adición de azul de tripano para la medición de viabilidad de campo brillante.

Calculadora de división celular

Si necesita una concentración de muestra determinada para su experimento posterior, introduzca aquí la concentración y el volumen deseados y los contadores de células Countess 3 calcularán automáticamente la cantidad de muestras de células y de tampón o medios de cultivo celular necesarios. Los resultados del recuento de células se incluyen automáticamente en el cálculo.

"Es muy fácil de usar y también me permite actualizar rápidamente mi cuaderno de laboratorio para que cada experimento utilice el mismo número de células. Rápido y eficaz".

Lakeisha Tillery,

Meharry Medical College

Guardar resultados e informes. Puede guardar los resultados de recuento de células, los datos de células y las imágenes en una unidad USB o, mediante la llave Wi-Fi, en la plataforma basada en la nube Thermo Fisher™ Connect. Los resultados se guardan como archivo CSV de tipo de hoja de cálculo y los datos de células en un archivo FCS estándar de citometría de flujo, mientras que las imágenes se pueden guardar en los formatos TIFF, PNG o JPG. Podrá acceder a estos archivos en cualquier momento, dentro del laboratorio o fuera de él: los datos estarán disponibles cuando y donde los necesite.

 

También puede guardar un informe PDF imprimible que combine resultados, las imágenes y la configuración.

Guarde los resultados, las imágenes y la configuración en un informe PDF imprimible.

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Aplicaciones más allá del recuento

Los contadores de células automatizados Countess 3 hacen muchas más cosas además de contar células. Con la tinción azul de tripano, puede evaluar el porcentaje de células de la muestra que son viables. O bien, tiñendo las muestras con uno de los muchos tintes fluorescentes que se pueden detectar con el sistema Countess 3 FL, puede realizar análisis de viabilidad más sofisticados, detectar diferentes etapas de apoptosis y muerte celular, medir la eficacia de la transfección y mucho más. 

Medición de viabilidad con azul de tripano

 

Las CMSP murinas, a menudo difíciles de contar debido a su pequeño tamaño y bajo contraste, se contaron con el Countess Automated Cell Counter 3. En este recuento de campo brillante, se utilizó una tinción de azul de tripano al 0,4 % para distinguir la viabilidad, permaneciendo translúcidas las células vivas y con una tinción oscura las células muertas. Los contornos rojos (círculos) indican que las células se cuentan como muertas, mientras que los contornos verdes indican que las células se cuentan como vivas.

Medición de viabilidad mediante fluorescencia 

 

En un segundo experimento, se tiñeron CMSP murinas con tinción de viabilidad celular verde/roja ReadyCount y se contaron con el Countess Automated Cell Counter 3 FL. En el modo de fluorescencia, la mezcla preoptimizada de naranja de acridina y yoduro de propidio (AO/PI) de este reactivo da como resultado una mayor especificidad de vivas/muertas. Las células muertas (38%) son teñidas en rojo por PI y se detectan con el cubo de luz roja EVOS Texas, mientras que todas las células nucleadas (99 %) fluorescen en verde con AO y se detectan con el cubo de luz EVOS GFP.

"La Countess II hace que sea muy fácil contar las células con precisión y rapidez; el hecho de que indique el recuento de células muertas y células vivas es la guinda del pastel".

Faryal Mir,

MIT

Datos de una sola célula. Los contadores de células Countess 3 analizan y almacenan los datos para cada célula de la muestra. Puede ampliar cualquier célula y mostrar sus valores de tamaño, brillo, circularidad y fluorescencia. También puede generar un gráfico de puntos en formato FCS (estándar de citometría de flujo) y analizar, transformar y reformatear los datos en muchos programas de análisis de software de citometría de flujo.

Con datos de una sola célula, amplíe cualquier célula y obtenga una lectura de su tamaño, brillo, circularidad e intensidad de fluorescencia.

Los datos de una sola célula de todas las células de una muestra se pueden exportar a un archivo de gráficos de puntos FCS y analizar, transformar y reformatear como datos de citometría de flujo. Este gráfico representa la intensidad de fluorescencia de GFP frente a la circularidad.

Diversas líneas celulares y muestras de células. Debido a que los algoritmos de recuento de Countess 3 se han entrenado en un conjunto diverso de muestras de células, puede estar seguro de que las células se contarán con precisión. La tabla muestra tipos de células y líneas de células que se han probado y verificado en los contadores de células automatizados Countess 3 y Countess 3 FL. 

Líneas celulares verificadas en los contadores de células automatizados Countess 3


Compatible con portaobjetos reutilizables

Ambos modelos de instrumentos Countess 3 pueden usar el portaobjetos reutilizable Invitrogen Countess, una opción económica y medioambientalmente sostenible que elimina los residuos y el coste de los portaobjetos desechables. Aunque su laboratorio solo use cinco portaobjetos al día, puede generar bastante menos residuos al año usando el portaobjetos reutilizable. Esta innovación hace que sea asequible para los laboratorios automatizar sus recuentos de células sin incurrir en el coste continuo de los portaobjetos desechables.

Los portaobjetos desechables de cámara de recuento de células Invitrogen Countess siguen estando disponibles, lo que elimina la necesidad de limpiar el portaobjetos reutilizable y tener que esperar a que se seque entre una muestra de células y la siguiente. Los portaobjetos desechables son adecuados para procesar rápidamente muestras de células cuando hay muchas que procesar o para simplificar la eliminación de muestras contaminadas o peligrosas.


Software de compatibilidad con el cumplimiento de la norma 21 CFR Parte 11

La solución de software Countess SAE es un módulo de software opcional que permite un mantenimiento de registros electrónicos que cumple la norma de firmas y registros electrónicos de la Administración de Alimentos y Medicamentos de EE.UU., parte 11 del título 21 del código de reglamentos federales (21 CFR Parte 11). Esta norma define los requisitos para el uso de documentos electrónicos en lugar de documentos en papel.

 

El cumplimiento de la norma 21 CFR Parte 11 se compone de requisitos técnicos y procedimentales.

  • Los requisitos procedimentales son los procedimientos de funcionamiento estándar establecidos por la institución del usuario final.  

  • Los requisitos técnicos son las características funcionales del software de gestión de conformidad empleado.  

La satisfacción de los requisitos técnicos no garantiza el cumplimiento de la norma 21 CFR Parte 11 por sí mismo. El cumplimiento es la consecuencia tanto del proceso de trabajo como de los sistemas utilizados por la institución.

 

Las capacidades del software incluyen la restricción de usuarios no autorizados, directivas de contraseñas y fechas de caducidad, permisos y funciones de usuario definidos, el seguimiento de todos los cambios de datos a través de un registro de auditoría, informes de auditoría y flujos de trabajo de firma electrónica integrados. Todos los contadores de células automatizados Countess 3 y Countess 3 FL pueden ejecutarse en modo SAE tras la adquisición de la licencia de software de Countess SAE. Para lograr el cumplimiento de la norma 21 CFR Parte 11, su institución también deberá establecer y documentar procedimientos de funcionamiento estándar que sean conformes.

Componentes

La solución de software Countess SAE consta de tres componentes que se comunican entre sí.

  1. El software SAE se utiliza para configurar los ajustes de seguridad, auditoría y firma electrónica (SAE) para el Countess Automated Cell Counter. El software SAE se compone de la consola de administración SAE (instalada en un servidor informático en red con una dirección IP estática) y el perfil de aplicación SAE.
  2. La licencia SAE se utiliza para activar los ajustes de SAE para el Countess Automated Cell Counter.
  3. El modo SAE se ejecuta en el Countess Automated Cell Counter y se conecta de forma remota a la consola de administración SAE.

1. Software-SAE - Consola de administración SAE

La consola de administración SAE es el componente de la solución de software Countess SAE para compatibilidad con el cumplimiento de la norma 21 CFR Parte 11 que permite la configuración del instrumento Countess para que satisfaga los requisitos específicos del usuario. Otro componente, el Perfil de aplicación Countess, debe instalarse en la consola de administración SAE para que se pueda utilizar la configuración de SAE en el instrumento Countess. Una vez instalado el software Perfil de aplicación Countess en la consola de administración SAE, se utiliza un servidor SAE (ordenador en red) para conectarse al instrumento Countess. La consola de administración SAE debe utilizarse desde un ordenador en red con una dirección IP estática. 

Vista de interfaz de la consola de administración SAE y del perfil de aplicación Countess.

2. Licencia SAE para la solución de software Countess SAE para la compatibilidad con el cumplimiento de la norma 21 CFR Parte 11

La licencia de software Countess SAE para 21 CFR Parte 11 se utiliza con los contadores de células automatizados Countess 3 y Countess 3 FL y es compatible con el cumplimiento de las directrices 21 CFR Parte 11 de la FDA sobre seguridad, auditoría y firmas electrónicas (SAE) mediante la consola de administración SAE. Se necesita una licencia de software SAE para activar el modo SAE en cada Countess Automated Cell Counter.  

3. Modo SAE en los contadores de células automatizados Countess 3

El software Consola de administración SAE permite la compatibilidad con 21 CFR Parte 11 al activar el modo SAE en el instrumento Countess. Cuando se activa el modo SAE, el instrumento Countess se conecta a la consola de administración SAE a través del servidor SAE. La configuración de seguridad, auditoría y firma electrónica, tal como se definen en la consola de administración SAE, se implementa en el instrumento Countess.

 

Las características incluyen la restricción de usuarios no autorizados en el sistema, las directivas de contraseñas y las fechas de caducidad, los permisos y funciones de usuario definidos, el seguimiento de todos los cambios de datos mediante el registro de auditoría, los informes de auditoría disponibles y los flujos de trabajo de firma electrónica integrados. Todos los contadores de células automatizados Countess 3 y Countess 3 FL pueden ejecutarse en modo SAE mediante la adquisición de la licencia de software Countess SAE.

Activación del modo SAE en el instrumento Countess 3 o 3 FL

Funcionalidad

Funcionalidad de la consola de administración SAE

 

Seguridad del sistema  Controla el acceso de los usuarios al software mediante los ID de usuario, las contraseñas, las funciones y los permisos. Se proporcionan tres funciones de usuario predeterminadas, una con privilegios completos (administrador), otra con algunos privilegios eliminados (científico principal) y la otra sin privilegios (técnico). Las funciones de usuario predeterminadas se pueden editar; también se pueden crear funciones y permisos de usuario adicionales. 
Auditoría  Lleva a cabo un seguimiento de las acciones realizadas por los usuarios y de los cambios en la configuración de la consola de administración SAE. El software audita automáticamente algunas acciones en segundo plano. Puede seleccionar otros elementos para la auditoría y especificar el modo de auditoría. La función de auditoría proporciona informes sobre los cambios y acciones auditados de la consola de administración SAE. 
Firma electrónica  Determina las funciones para las cuales los usuarios tienen que proporcionar un nombre de usuario y una contraseña. Puede configurar firmas electrónicas para que un usuario pueda exportar un archivo firmado e imprimir un informe firmado. También puede configurar el evento de firma electrónica para que requiera varias firmas y para que lo firmen los usuarios con permisos específicos. 

Seguridad del sistema

El acceso está restringido al personal autorizado a través del ID de usuario y la contraseña. 

Interfaz de la consola de administración SAE que muestra la creación de una nueva cuenta de usuario

Auditoría

La función de auditoría de la consola de administración SAE realiza un seguimiento de las acciones por parte de los usuarios y de los cambios en la configuración de SAE. Las acciones de las que se realiza un seguimiento en segundo plano son el inicio y cierre de sesión, la adquisición de imágenes y las exportaciones de imágenes.

Historial de auditoría de la consola de administración SAE.

La ficha Historial de auditoría de la consola de administración de SAE (1) muestra los registros de acción, configuración del sistema y objetos de aplicación. Para cada evento, muestra (2) la aplicación, (3) la acción y (4) la fecha y el usuario. También puede (5) exportar los registros en formato legible o imprimible (.txt o PDF).

Dentro de la función de auditoría, existen opciones para seleccionar acciones específicas de usuario para auditar y si las auditorías van a ser silenciosas, opcionales o necesarias. Además, se pueden generar informes para acciones de usuario, cambios del módulo SAE y acciones y eventos de software o instrumentos.

Firmas electrónicas

La función de firma electrónica de la consola de administración SAE determina las funciones para las que los usuarios deben cumplir los requisitos de firma.  

Ajustes de firma electrónica de la consola de administración SAE.

La ficha Firma electrónica de la consola de administración de SAE le permite (1) personalizar los significados de las firmas electrónicas, (2) elegir cuántas firmas se requieren por significado y función, y (3) elegir el tipo de datos firmados para significados específicos.

Dentro de la función de firma electrónica, puede configurar cuántos usuarios con funciones diferentes deben firmar cada evento de firma electrónica. También puede crear significados diferentes y personalizar los requisitos de firma para cada uno.

Información de pedido

Para utilizar la solución de software Countess SAE con el Countess Automated Cell Counter 3, se puede adquirir una licencia de software de forma independiente o como parte de un paquete de licencia de instrumentos y software Countess 3 FL.


Sólo para uso  en investigación . No apto para uso en procedimientos diagnósticos.