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Ca2+ 指示剂 fluo-3(图1)由 Tsien 及其同事研发,与流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜中的可见光激发源搭配使用。 自1989年推出以来,fluo-3 成像揭示了许多初级钙信号转导过程的空间动力学。 Fluo-3 还广泛用于以下用途:流式细胞分析;涉及“笼状”螯合物、第二信使和神经递质光活化的实验;以及基于细胞的药物筛查。
在这些应用中,fluo-3 的最重要特性是吸收光谱兼容氩离子激光源在 488 nm 处的激发并且与 Ca2+ 结合相关的荧光强度大幅增加(图2)。在结合 Ca2+ 时,Fluo-3、fluo-4 及其衍生物都出现大幅的荧光强度增加。 与激发紫外光的指示剂 fura-2 和 indo-1 不同,没有同时发生光谱偏移。Ca2+ 结合时的荧光强度增加通常 >100 倍。 表1显示了 fluo-3 和 fluo-4 的物理和光谱特性比较。
特性 | fluo-3 | fluo-4 |
---|---|---|
Kd (Ca2+)* | 325 nM | 345 nM |
吸收最大值(已结合 Ca2+)† | 506 nm | 494 nm |
最大值(已结合 Ca2+)† | 100,000 cm-1M-1 | 88,000 cm-1M-1 |
488 nm(已结合 Ca2+)† | 43,000 cm-1M-1 | 77,000 cm-1M-1 |
发射最大值(已结合 Ca2+)† | 526 nm | 516 nm |
QY(已结合 Ca2+)†、‡ | 0.15 | 0.14 |
Fmax /Fmin § | >100 | >100 |
* 22°C 下,在 100 mM KCl、10 mM MOPS (pH 7.2)、0 至 10 mM CaEGTA 中测定的 Ca2+ 解离常数。对于 fluo-3,Kd = 390 nM,报告来源:Molecular Probes’ The Handbook: A Guide to Fluorescent Probes and Labeling Technologies, Tenth Edition (2005)。
† 22°C下,在 100 mM KCl、10 mM MOPS (pH 7.2)、含 39.8 μM 游离 Ca2+ 的溶液中测定的值。
‡ QY = 荧光量子得率。对于 fluo-3,QY = 0.18,报告来源:J Biol Chem 264, 8171 (1989)。
§ 在溶液检测中结合 Ca2+ 时荧光强度增加。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。