Fluo-4 AM 和 Fluo-4 NW 钙指示剂

• 经过药理学检验—业内最严格测试、引用和使用最多的染料。
• 稳健—具有高水平且一致的 Z’ 因子，减少了洗涤步骤（表1）
• 灵活—能够用于筛选贴壁和非贴壁细胞系
• 组合检测—结合我们经验证的 GeneBLAzer 或 Tango™ GPCR 细胞系
   

我们为不使用淬灭剂的各种应用提供了大量荧光钙指示剂，但有两种产品是基于市场领先的 Fluo-4 核心化学，即 Fluo-4 AM 和 Fluo-4 NW。

Fluo-4 AM 是 Fluo-3 AM 的改进版类似物，其中两个氯取代基被氟所取代。这种微小的结构修饰使得染料上样更快且在同等浓度下更明亮，从而成为各种应用的首选指示剂：微孔板筛选（图1和2）、共聚焦显微镜检查（图3）和流式细胞分析。

Fluo-4 NW 钙检测试剂具有与 Fluo-4 AM 相同的优势，但改良的配方提供了更多的便利，其包括 PowerLoad 浓缩液（改进的染料上样试剂）且无需在去除培养基后进行洗涤步骤。

图1.CHO M1 对碳酰胆碱的反应。

表1.HEK 293 和 Jurkat M1 对碳酰胆碱的反应 (20 nM)。

CHO M1、HEK293 M1 和 Jurkat M1 对碳酰胆碱的反应。 CHO M1 细胞用 20 nM 卡巴胆碱激动剂（图1）处理，然后使用列出的钙检测试剂盒测定（结果减去了基础值，为四次重复的的平均值）。 表中的数据均使用 HEK 293 和 Jurkat M1 细胞获得，分别为16和8次重复实验的平均值。 Z′ 因子使用以下公式算出：Z′ = 1-3 (SD max + SD min)/(ΔF max- ΔF min)，其中，ΔF max 是添加最高浓度的碳酰胆碱激动剂时最大值与最小值的平均差值，ΔF min 为仅使用缓冲液添加时的平均值。

图2. Fluo-4 NW 检测对已知激动剂和抑制剂表现出一致的药理学结果。 CHO M1 剂量反应曲线。通过使用指定浓度范围内的碳酰胆碱激动剂（图 A）或哌仑西平抑制剂（图 B）刺激细胞。使用所列的钙检测试剂盒根据各自方案测定相对荧光 (ΔF) 值。数据显示各种检测方法获得相似的药理学结果 (EC 50)。

1.   Biotechniques, 34, 164 (2003)
2.   Cell Calcium 11, 57 (1990)

图3. 用 fluo-4, AM（F14201、F14202、F14217、F23917）每隔9秒监测到的 AtT-20/D16v-F2 细胞内游离 Ca2+ 变化的伪彩色图像。 用 fluo-4, AM（F14201、F14202、F14217、F23917）每隔9秒监测到的 AtT-20/D16v-F2 细胞内游离 Ca²⁺ 变化的伪彩色图像。为诱导 Ca²⁺ 流入，用 50 mM KCl 对细胞去极化（图像2），然后将细胞暴露于 5 µM 离子霉素（I24222，一种 Ca²⁺ 离子载体）（图像8）。根据荧光强度对图像进行伪彩色处理，红色代表高 Ca2+ 浓度，蓝色代表低 Ca²⁺ 浓度。使用配备适用于荧光素的长通滤光片组和 Photometrics Quantix 冷光 CCD 摄像头的荧光显微镜采集图像。