• 经过药理学检验—业内最严格测试、引用和使用最多的染料。
  • 稳健—具有高水平且一致的 Z’ 因子,减少了洗涤步骤(表1)
  • 灵活—能够用于筛选贴壁和非贴壁细胞系
  • 组合检测—结合我们经验证的 GeneBLAzer 或 Tango™ GPCR 细胞系
     

我们为不使用淬灭剂的各种应用提供了大量荧光钙指示剂,但有两种产品是基于市场领先的 Fluo-4 核心化学,即 Fluo-4 AM 和 Fluo-4 NW。

Fluo-4 AM 是 Fluo-3 AM 的改进版类似物,其中两个氯取代基被氟所取代。这种微小的结构修饰使得染料上样更快且在同等浓度下更明亮,从而成为各种应用的首选指示剂:微孔板筛选(图1和2)、共聚焦显微镜检查(图3)和流式细胞分析。

Fluo-4 NW 钙检测试剂具有与 Fluo-4 AM 相同的优势,但改良的配方提供了更多的便利,其包括 PowerLoad 浓缩液(改进的染料上样试剂)且无需在去除培养基后进行洗涤步骤。



图1.CHO M1 对碳酰胆碱的反应。

表1.HEK 293 和 Jurkat M1 对碳酰胆碱的反应 (20 nM)。

HEK 293平均 ΔF max (RFU)SD%CVZ′ 因子
Fluo-4 NW37,1382,5516.90.827
Fluo-4 洗涤47,0713,3207.10.801
Calcium 331,8002,7288.60.779
Jurkat平均 ΔF max (RFU)SD%CVZ′-factor
Fluo-4 NW6,8322723.980.842
Calcium 35,7315419.440.694

CHO M1、HEK293 M1 和 Jurkat M1 对碳酰胆碱的反应。 CHO M1 细胞用 20 nM 卡巴胆碱激动剂(图1)处理,然后使用列出的钙检测试剂盒测定(结果减去了基础值,为四次重复的的平均值)。 表中的数据均使用 HEK 293 和 Jurkat M1 细胞获得,分别为16和8次重复实验的平均值。 Z′ 因子使用以下公式算出:Z′ = 1-3 (SD max + SD min)/(ΔF max- ΔF min),其中,ΔF max 是添加最高浓度的碳酰胆碱激动剂时最大值与最小值的平均差值,ΔF min 为仅使用缓冲液添加时的平均值。



图2. Fluo-4 NW 检测对已知激动剂和抑制剂表现出一致的药理学结果。 CHO M1 剂量反应曲线。通过使用指定浓度范围内的碳酰胆碱激动剂(图 A)或哌仑西平抑制剂(图 B)刺激细胞。使用所列的钙检测试剂盒根据各自方案测定相对荧光 (ΔF) 值。数据显示各种检测方法获得相似的药理学结果 (EC 50)。

 

1.   Biotechniques, 34, 164 (2003)
2.   Cell Calcium 11, 57 (1990)

 



图3. 用 fluo-4, AM(F14201F14202F14217F23917)每隔9秒监测到的 AtT-20/D16v-F2 细胞内游离 Ca2+ 变化的伪彩色图像。 
用 fluo-4, AM(F14201F14202F14217F23917)每隔9秒监测到的 AtT-20/D16v-F2 细胞内游离 Ca2+ 变化的伪彩色图像。为诱导 Ca2+ 流入,用 50 mM KCl 对细胞去极化(图像2),然后将细胞暴露于 5 µM 离子霉素(I24222,一种 Ca2+ 离子载体)(图像8)。根据荧光强度对图像进行伪彩色处理,红色代表高 Ca2+ 浓度,蓝色代表低 Ca2+ 浓度。使用配备适用于荧光素的长通滤光片组和 Photometrics Quantix 冷光 CCD 摄像头的荧光显微镜采集图像。

仅供科研使用,不可用于诊断目的。

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