腔肠素和合成类似物

• 腔肠素和腔肠素衍生物与水母发光蛋白形成复合物，便于获取细胞中的发冷光 Ca²⁺ 读数
• 发冷光读数消除了常见的细胞荧光干扰问题
• 高度灵敏，可用于测量 0.1 µM 至 100 µM 浓度范围内的 Ca²⁺
• Invitrogen 提供6种腔肠素组合，其中包括具有不同的 Ca²⁺ 亲和力和光谱发射能力的5种衍生物
• 天然腔肠素以及所有5种类似物均可在采样器面板中进行比较和评估
   

水母发光蛋白是一种对钙敏感的生物发光蛋白（源自维多利亚发光水母），广泛用作细胞中的微注射钙指示剂。 水母发光蛋白复合物包括22,000道尔顿脱辅水母发光蛋白、分子氧和发光基团腔肠素（图1）。当三个 Ca²⁺ 离子与这种复合物结合时，腔肠素被氧化成腔肠酰胺，同时释放二氧化碳和蓝光（图2和3）。水母发光蛋白的生物发光对 Ca²⁺ 浓度表现出大约三次幂依赖性，因而其检测范围广泛，可用于测量约 ~0.1 µM 至 >100 µM 浓度范围内的 Ca²⁺。

除天然腔肠素 (C-2944) 外，我们还提供由 Shimomura 及其同事命名为 cp、f、h、hcp 和 n 的五种腔肠素衍生物，它们与水母发光蛋白复合体具有不同的 Ca²⁺ 亲和力和光谱特性（表1）。 与天然腔肠素一样，这五种衍生物可用于在体内和体外重构水母发光蛋白复合物。 使用腔肠素 hcp 重构的水母发光蛋白显示出非常有利的特性，包括对结合 Ca²⁺ 快速响应以及发光量子得率在这五种腔肠素衍生物中最高。据报告，含 cp、f 或 h 形式腔肠素的水母发光蛋白的相对强度是使用天然腔肠素重构的水母发光蛋白的 10–20 倍。 Knight 和同事报告，与天然复合物相比，使用腔肠素 h 重构的水母发光蛋白对 Ca²⁺ 更敏感，因此是用于测量 Ca²⁺ 浓度微小变化的有价值工具。 据报告，腔肠素 n 是最有用的低灵敏度腔肠素，产生的脱辅水母发光蛋白/腔肠素复合物的发光强度是脱辅水母发光蛋白/腔肠素 hcp 复合物的 1/10,000。

表1.

1. 含脱辅水母发光蛋白的腔肠素复合物发出钙依赖性生物光。最大生物光发射波长（100 nM Ca²⁺ 下相对强度）如下：C2944，466 nm (1)；C6780，466 nm (16)。
2. 请勿溶解在 DMSO 中。
3. 可在含 50 mM 2-羟丙基-β-环糊精的 pH 7 缓冲液中制备腔肠素的水母发光水溶液 (>1 mM)。