紫外-可见光 | 紫外-可见分光光度计资源

在最基本的条件下，分光光度计可对整个紫外和可见光光谱范围的相对光强度进行光度比较。引导受控的、恒定强度光源（卤素、氘、氙）穿过整个光谱范围或以特定波长穿过样品，可轻松确认样品的已知特性或计算其未知特性。入射光 (I₀) 可以向后重定向后成为反射光，遭受能量损失后成为吸收光，穿过透明或半透明样品后成为透射光。液体中的样品需要放入试管或由与样品和测量波长兼容的塑料、玻璃或石英组成的比色皿中，然后放入样品室中的样品架，才能进行测量。

光谱仪可以进行不同的光学设置，采用单一、双重（或拆分）或双光束设置。较简单和较经济的装置依赖从波长选择器（单色器或滤光片系统）传播到检测器的单束光，但需要对基线溶剂空白进行单独测量，以便与样品的测量进行比较。双光束装置将光束拆分为参考光束和样品光束，从而可通过单一检测器交替收集参考物和样品之间的数据，实现在相同的仪器条件下在样品室中测量空白和样品。双光束设置并行使用两个光束和两个检测器来同时测量样品和参考物。

紫外-可见分光光度计吸光度

当用光照射样品时，仪器可选择性吸收特定波长的入射光。具有最高吸光度 (λ_最大) 的波长通常用作分析波长，并以纳米 (nm) 表示。吸光度测量简单，用于生成光谱曲线。

吸光度可为计算浓度作为直接和间接选项提供。蛋白质直接测量的示例为在 A280 下，然后便可使用比尔–朗伯方程 c = A / (ε × L)（其中 L 是光程）直接根据 280 nm 下的样品吸光度 (A) 和蛋白质特异性消光系数 (ε) 计算蛋白质浓度 (c)。间接测量（如比色测定）依赖于标准曲线的生成以及与样品中蛋白质含量成比例产生颜色变化的反应。

紫外-可见分光光度计光谱带宽

单色器产生的狭缝尺寸决定仪器的光谱带宽（或带通），并且影响区分两个相邻峰（光谱分辨率）、到达检测器的光强度、测量时间和信噪比的能力。较窄的带宽分光光度计可以延长测量时间为代价来提高分辨率和信噪比；带宽更宽的更经济仪器可以降低分辨率和增加背景噪音为代价来缩短结果获得时间。要符合包括美国药典 (USP)、欧洲药典 (EP) 和日本药典 (JP) 在内的所有全球药典的性能和带宽要求，您可选择 Thermo Scientific Evolution Pro 仪器，或选择 Evolution One 系列型号来满足 USP 和 EP 的所有要求。

样本透射百分比

透射率测量穿过样品的光量，并可根据材料的已知反射和透射特性提供定量信息。透射率值通常以百分比形式表示，是到达检测器的光与进入样品的入射光的比率。完全透明的样品会透射所有光 (100% T)；完全不透明的样品不透射任何光 (0% T)。该测量可用于计算溶液中化学品的浓度、测试水和薄膜的清澈度、评估产品如枫糖浆等的等级以及其他用途。

要计算透射率 (T)，需要用离开样品的光量 (I) 除以进入样品的入射光量 (I₀)：T= I/I₀。通常，通过乘以100以透射率百分比形式表示这些测量结果：%T= 100(I/I₀)。吸光度和透射率之间存在对数关系，其中 A = - log₁₀T：当吸光度等于0时，透射率为 100% T；当吸光度等于1时，透射率为 10%。

反射率测量的百分比

固体或溶液形式的样品可以反射用于分光光度分析的入射光。当表面非常光滑时，可能会产生镜状的镜面反射，入射光以与入射角相等的反射角反射为单束光。粗糙表面和在样品内部散射光的表面则产生漫反射，即使只有一个入射角，也会造成反射，反射通过广泛的角度分布消散。使用传统样品架测量这些材料的光透射将导致只有一部分光到达检测器，造成光谱质量下降和信息损失。不过，使用积分球附件可以通过将样品定位在入射点或出射口，收集所有穿过样品的光进行总透射率测量，或总反射率或漫反射率测量。

阅读我们的应用技术文档：制药容器的光谱透射测试

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