紫外-可见分光光度计资源

在最基本的条件下，分光光度计可对整个紫外和可见光光谱范围的相对光强度进行光度比较。引导受控的、恒定强度光源（卤素、氘、氙）穿过整个光谱范围或以特定波长穿过样品，可轻松确认样品的已知特性或计算其未知特性。入射光 (I₀) 可以向后重定向后成为反射光，遭受能量损失后成为吸收光，穿过透明或半透明样品后成为透射光。液体中的样品需要放入试管或由与样品和测量波长兼容的塑料、玻璃或石英组成的比色皿中，然后放入样品室中的样品架，才能进行测量。

光谱仪可以进行不同的光学设置，采用单一、双重（或拆分）或双光束设置。较简单和较经济的装置依赖从波长选择器（单色器或滤光片系统）传播到检测器的单束光，但需要对基线溶剂空白进行单独测量，以便与样品的测量进行比较。双光束装置将光束拆分为参考光束和样品光束，从而可通过单一检测器交替收集参考物和样品之间的数据，实现在相同的仪器条件下在样品室中测量空白和样品。双光束设置并行使用两个光束和两个检测器来同时测量样品和参考物。

固体或溶液形式的样品可以反射用于分光光度分析的入射光。当表面非常光滑时，可能会产生镜状的镜面反射，入射光以与入射角相等的反射角反射为单束光。粗糙表面和在样品内部散射光的表面则产生漫反射，即使只有一个入射角，也会造成反射，反射通过广泛的角度分布消散。使用传统样品架测量这些材料的光透射将导致只有一部分光到达检测器，造成光谱质量下降和信息损失。不过，使用积分球附件可以通过将样品定位在入射点或出射口，收集所有穿过样品的光进行总透射率测量，或总反射率或漫反射率测量。