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5步获取ELISA稳定结果
酶联免疫吸附实验检测（ELISA）技术是特定靶标蛋白质定量的金标准，提供快速、稳定且易于分析的结果。ELISA 可用于研究领域中的许多靶标，包括细胞因子，趋化因子，生长因子，磷酸特异性靶标，免疫球蛋白，免疫肿瘤学和神经生物学。无论您是感兴趣的目标还是研究领域，都有 3 种 ELISA 型式可供选择—预包被的试剂盒，未包被抗体对的试剂盒，或者您可以通过自己筛查来开发自己的 ELISA的抗体对创建自定义的ELISA。影响ELISA结果变量如此之多，有时很难确定如何每次都获得一致的结果。
在这里，我们提供 5 个简单的步骤，用于在运行 ELISA 时获得稳定且准确的结果。
Step 1 - 使用同一批次的 ELISA 试剂盒
考虑 ELISA 试剂盒之间的差异非常重要，尤其是在启动长期研究项目时。尽管许多知名的供应商都拥有内部对照样（图 1），以避免随时间出现的漂移，但通过使用同一批次的试剂盒，可以尽量消除批次间的任何潜在差异。确定整个项目需要多少套试剂盒，并相应订购。
任何 Invitrogen 免疫测定产品的特殊服务
产品特点
技术支持
有用的资源
Step 2 - 使用预包被的 ELISA 试剂盒
如果可能，请购买所需的预包被 ELISA 试剂盒。预包被通常使用自动化仪器制造，从而减少了人工移液的变异性或误差。涂覆后，验证测试将用于识别孔之间和板之间的任何板涂层变异性，以确保一致性。
孔间精准度
在 5 种不同的测定中将样品测定 8 次，以确定测定之间的精度。
| 参数 | 样品 1 | 样品 2 | 样品 3 |
|---|---|---|---|
| 平均数 (pg/mL) | 35.3 | 97.4 | 236.7 |
| 标准偏差 | 3.3 | 6.4 | 18.5 |
| % 变异系数 | 9.3 | 6.5 | 7.8 |
板间精准度
重复 16 次测定已知人 IL-6 浓度的样品，以确定测定内的精度。
| 参数 | 样品 1 | 样品 2 | 样品 3 |
|---|---|---|---|
| 平均数 (pg/mL) | 38.8 | 101.2 | 242.7 |
| 标准偏差 | 3.0 | 5.8 | 12.5 |
| % 变异系数 | 7.7 | 5.7 | 5.1 |
表 1.人 IL-6 ELISA 试剂盒（目录号 BMS213-2）的检测间（板间）和检测内（孔间）CV。
使用 Invitrogen 预包被的 ELISA 试剂盒
观看说明视频，该视频展示如何使用 Invitrogen 预包被的即用型 ELISA 试剂盒。在开始操作之前，请确保仔细阅读并查看包装内的 ELISA 试剂盒的特定说明表，以获取详细信息。
产品特点
技术支持
有用的资源
Step 3 - 使用精简工作流程
在适当的地方，使用专为简化工作流程而设计的 ELISA 试剂盒。减少步骤数将减少操作时间，并带来其他优势，例如：
- 引入变量的机会更少（人为错误、缓冲液制备等）
- 无需制备试剂
- 无需标样的稀释溶液系列（例如：一步法Instant ELISA）
- 无需每小时监测一次连续添加的检测
了解有关精简工作流程的更多信息：一步法 ELISA 的简化工作流程
17 个步骤到 7 个步骤：ELISA 精简工作流程
Click image to enlarge
减少操作步骤数有助于节约时间和减少变化。使用 一步法 ELISA 试剂盒，已为您执行所有制备工作。使用一步法 ELISA 试剂盒只有 7 个工作步骤，而执行常规 ELISA 则需要 17 个步骤。因此，利用一步法 ELISA 技术，可将实验的总体手动操作时间缩短至约 1 小时。
我们提供很多一步法 ELISA 选项，包括：
- 人 IFN-γ
- 人 IL-6
- 人 IL-10
- 人 TNF-α
新一代免疫测定技术
随着技术的最新发展，新一代 ELISA 平台可以提供进一步的简化工作流程。ProQuantum 免疫分析是一个示例，该示例使用匹配的抗体对与 qPCR 扩增相结合，以提高灵敏度、动态范围并减少样品消耗。简化的工作流程消除了所有冲洗步骤，并且只需添加最少的试剂。若要了解更多，可观看视频或访问网页信息。
ProQuantum 免疫测定法：如何工作？
产品特点
技术支持
有用的资源
Step 4 - 正确处理样品并使用对照品
样品以及制备这些样品的方式可能是成功运行 ELISA 的最重要部分。正确的样品处理和制备对于获得一致且准确的结果至关重要。当处理有限或珍贵的样品时，必须谨慎一致地处理它们。
正确制备样品的说明：
- 采样后立刻使用，或等分存在 -80°C 冷冻
- 限制冻结/解冻循环的次数
- 比较具有相同数量的冷冻/解冻循环的样品
- 在冰上解冻样品
- 处理时，将样品保持在2-8°C
- 在 ELISA 分析中使用适当的对照样
- 使用空白样和/或阴性对照进行 ELISA 分析
- 使用独立的阳性对照进行 ELISA 分析
要了解有关正确样品处理的更多信息：正确进行免疫测定的样品处理
要了解有关移液的更多信息：实验室移液指南
要了解有关电子可编程移液器的更多信息：电动移液器
产品特点
技术支持
有用的资源
Step 5 - 使用可靠的设备提高数据一致性
ELISA 的成功不仅取决于测定的运行方式和 ELISA 试剂盒的质量，而且在很大程度上取决于设备。使用保证每次都能提供一致结果的仪器。
运行 ELISA 时要考虑的第一台仪器是微孔板洗板机。洗板机有助于确保正确清洗，使板在清洗缓冲液中“浸泡”足够长的时间，并从每个孔中完全除去清洗缓冲液。必须遵循 ELISA 步骤中规定的所有洗涤步骤。
最好的结果将来自使用具有某些关键功能的可靠自动洗板机。使用该仪器可有效清洗 ELISA 板，同时最大程度减少变异性，降低人为错误的风险并节省时间。
选择正确的自动洗板机的优势包括：
- 减少人为错误的风险
- 比手动移液更加便捷快速
- 每次洗涤相同，确保一致的结果
- 以最小残留体积确保有效洗涤
当使用具有以下功能的洗板机时，它使运行 ELISA 变得更容易：
- 容易清洁，可拆卸机头
- 自动灌注和冲洗以防止堵塞
- 为实验室安全设计的特征：
- 液位传感器
- 板传感器
- 非加压洗瓶
- 气雾剂盖
- 易于填充的容器和灌注管线
- 可优化参数
- 分配/抽吸：孔的高度、速度和位置
- 温和 vs.硬洗可满足特定需求
若要了解洗板的更多信息：
易于清洗以获得可靠的 ELISA 结果
免费海报：可靠清洗指南
当需要读取 ELISA 板时，请使用可靠的微孔板读数仪，以确保随时间推移，该仪器仍提供一致的结果。ELISA 读板器所必需的的关键特征包括：
- 集成的孵育箱和振荡器可消除使用孵育 ELISA 其他仪器的需求
- 参考校准系统，可跟踪灯和检测器的自然变化
- 良好的板/孔定位准确度和精度以及验证板运动的方法
- 选择在板移动和读取吸光度之间使用液体沉降延迟
- 可以对来自不同制造商的板使用单独的板尺寸图。
- 全自动且连续的诊断，并报告读板器状态和性能信息
- 特殊功能确保数据质量和数据安全
- 验证每个运动组件的移动（例如板载、光学头、滤光片轮）
- 执行外部验证的选项
若要了解读板的更多信息：微孔板仪器、测定和附件指南
若要阅读应用文章并了解更多，请访问
产品特点
技术支持
更多 5 步工作流程
有用的资源
Step 1 - 使用同一批次的 ELISA 试剂盒
考虑 ELISA 试剂盒之间的差异非常重要，尤其是在启动长期研究项目时。尽管许多知名的供应商都拥有内部对照样（图 1），以避免随时间出现的漂移，但通过使用同一批次的试剂盒，可以尽量消除批次间的任何潜在差异。确定整个项目需要多少套试剂盒，并相应订购。
任何 Invitrogen 免疫测定产品的特殊服务
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有用的资源
Step 2 - 使用预包被的 ELISA 试剂盒
如果可能，请购买所需的预包被 ELISA 试剂盒。预包被通常使用自动化仪器制造，从而减少了人工移液的变异性或误差。涂覆后，验证测试将用于识别孔之间和板之间的任何板涂层变异性，以确保一致性。
孔间精准度
在 5 种不同的测定中将样品测定 8 次，以确定测定之间的精度。
| 参数 | 样品 1 | 样品 2 | 样品 3 |
|---|---|---|---|
| 平均数 (pg/mL) | 35.3 | 97.4 | 236.7 |
| 标准偏差 | 3.3 | 6.4 | 18.5 |
| % 变异系数 | 9.3 | 6.5 | 7.8 |
板间精准度
重复 16 次测定已知人 IL-6 浓度的样品，以确定测定内的精度。
| 参数 | 样品 1 | 样品 2 | 样品 3 |
|---|---|---|---|
| 平均数 (pg/mL) | 38.8 | 101.2 | 242.7 |
| 标准偏差 | 3.0 | 5.8 | 12.5 |
| % 变异系数 | 7.7 | 5.7 | 5.1 |
表 1.人 IL-6 ELISA 试剂盒（目录号 BMS213-2）的检测间（板间）和检测内（孔间）CV。
使用 Invitrogen 预包被的 ELISA 试剂盒
观看说明视频，该视频展示如何使用 Invitrogen 预包被的即用型 ELISA 试剂盒。在开始操作之前，请确保仔细阅读并查看包装内的 ELISA 试剂盒的特定说明表，以获取详细信息。
产品特点
技术支持
有用的资源
Step 3 - 使用精简工作流程
在适当的地方，使用专为简化工作流程而设计的 ELISA 试剂盒。减少步骤数将减少操作时间，并带来其他优势，例如：
- 引入变量的机会更少（人为错误、缓冲液制备等）
- 无需制备试剂
- 无需标样的稀释溶液系列（例如：一步法Instant ELISA）
- 无需每小时监测一次连续添加的检测
了解有关精简工作流程的更多信息：一步法 ELISA 的简化工作流程
17 个步骤到 7 个步骤：ELISA 精简工作流程
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减少操作步骤数有助于节约时间和减少变化。使用 一步法 ELISA 试剂盒，已为您执行所有制备工作。使用一步法 ELISA 试剂盒只有 7 个工作步骤，而执行常规 ELISA 则需要 17 个步骤。因此，利用一步法 ELISA 技术，可将实验的总体手动操作时间缩短至约 1 小时。
我们提供很多一步法 ELISA 选项，包括：
- 人 IFN-γ
- 人 IL-6
- 人 IL-10
- 人 TNF-α
新一代免疫测定技术
随着技术的最新发展，新一代 ELISA 平台可以提供进一步的简化工作流程。ProQuantum 免疫分析是一个示例，该示例使用匹配的抗体对与 qPCR 扩增相结合，以提高灵敏度、动态范围并减少样品消耗。简化的工作流程消除了所有冲洗步骤，并且只需添加最少的试剂。若要了解更多，可观看视频或访问网页信息。
ProQuantum 免疫测定法：如何工作？
产品特点
技术支持
有用的资源
Step 4 - 正确处理样品并使用对照品
样品以及制备这些样品的方式可能是成功运行 ELISA 的最重要部分。正确的样品处理和制备对于获得一致且准确的结果至关重要。当处理有限或珍贵的样品时，必须谨慎一致地处理它们。
正确制备样品的说明：
- 采样后立刻使用，或等分存在 -80°C 冷冻
- 限制冻结/解冻循环的次数
- 比较具有相同数量的冷冻/解冻循环的样品
- 在冰上解冻样品
- 处理时，将样品保持在2-8°C
- 在 ELISA 分析中使用适当的对照样
- 使用空白样和/或阴性对照进行 ELISA 分析
- 使用独立的阳性对照进行 ELISA 分析
要了解有关正确样品处理的更多信息：正确进行免疫测定的样品处理
要了解有关移液的更多信息：实验室移液指南
要了解有关电子可编程移液器的更多信息：电动移液器
产品特点
技术支持
有用的资源
Step 5 - 使用可靠的设备提高数据一致性
ELISA 的成功不仅取决于测定的运行方式和 ELISA 试剂盒的质量，而且在很大程度上取决于设备。使用保证每次都能提供一致结果的仪器。
运行 ELISA 时要考虑的第一台仪器是微孔板洗板机。洗板机有助于确保正确清洗，使板在清洗缓冲液中“浸泡”足够长的时间，并从每个孔中完全除去清洗缓冲液。必须遵循 ELISA 步骤中规定的所有洗涤步骤。
最好的结果将来自使用具有某些关键功能的可靠自动洗板机。使用该仪器可有效清洗 ELISA 板，同时最大程度减少变异性，降低人为错误的风险并节省时间。
选择正确的自动洗板机的优势包括：
- 减少人为错误的风险
- 比手动移液更加便捷快速
- 每次洗涤相同，确保一致的结果
- 以最小残留体积确保有效洗涤
当使用具有以下功能的洗板机时，它使运行 ELISA 变得更容易：
- 容易清洁，可拆卸机头
- 自动灌注和冲洗以防止堵塞
- 为实验室安全设计的特征：
- 液位传感器
- 板传感器
- 非加压洗瓶
- 气雾剂盖
- 易于填充的容器和灌注管线
- 可优化参数
- 分配/抽吸：孔的高度、速度和位置
- 温和 vs.硬洗可满足特定需求
若要了解洗板的更多信息：
易于清洗以获得可靠的 ELISA 结果
免费海报：可靠清洗指南
当需要读取 ELISA 板时，请使用可靠的微孔板读数仪，以确保随时间推移，该仪器仍提供一致的结果。ELISA 读板器所必需的的关键特征包括：
- 集成的孵育箱和振荡器可消除使用孵育 ELISA 其他仪器的需求
- 参考校准系统，可跟踪灯和检测器的自然变化
- 良好的板/孔定位准确度和精度以及验证板运动的方法
- 选择在板移动和读取吸光度之间使用液体沉降延迟
- 可以对来自不同制造商的板使用单独的板尺寸图。
- 全自动且连续的诊断，并报告读板器状态和性能信息
- 特殊功能确保数据质量和数据安全
- 验证每个运动组件的移动（例如板载、光学头、滤光片轮）
- 执行外部验证的选项
若要了解读板的更多信息：微孔板仪器、测定和附件指南
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