ELISA 试剂盒验证和质量控制

我们拥有 2,200 多种 ELISA 试剂盒，可为您的所有研究需求提供准确一致结果。每款 Invitrogen ELISA 试剂盒均符合严格的规范，并经过严格的质量控制，以确保出色的检测结果和重现性。使用上述检索工具选择单个靶标 ELISA 试剂盒。我们提供各种现成的 ELISA 包装和免疫检测特殊要求定制 ，如批次预定，大包装和定制分析开发 ，为您提供更好的灵活性和便利性。 

Invitrogen ELISA 试剂盒针对以下影响因素进行了检测—板内精度，板间精度，稀释线性， ELISA 平行性，回收率， 灵敏度和特异性。从这些 ELISA 验证测试中获得的数据通常位于每个试剂盒的手册中，可在试剂盒包装或产品网页上找到。 

Invitrogen ELISA 试剂盒主要包装规格的快速总览见 表 1。

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检测内验证显示检测板内孔间的重现性。检测内验证产生的数据有助于确保在板的不同孔中检测的样品给出可比较结果。以下是为具有代表性的板内验证实验生成和报告的数据示例。在本示例中， 通过在同一检测中检测三个样品各重复 14 次来评估 Invitrogen VCAM-1 人 ELISA 试剂盒。每个样品的 %CV 表明该检测具有良好的重现性。具有已知 Hu sVCAM-1 浓度的样品重复检测14 次，以确定检测的精度。

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检测间精度显示不同日期进行的检测间重现性。检测间精度通常为< 10%。这确保获得的结果随着时间的推移和试剂盒之间保持一致。以下是为检测间精度生成和报告的典型数据示例。在该示例中， 使用 Invitrogen 淀粉样蛋白 β 42 人 ELISA 试剂盒在多天内检测三份样品，共检测 36 次。结果显示变异系数小于 10%，从而证明了检测间良好再现性。

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线性是相对于基于标准曲线的分析物计算量来定义。样品中分析物的最终计算浓度应与检测定量范围内的任何稀释浓度相同。开发完善的免疫检测试剂盒可最大限度地减少不同样品基质和其他可能干扰的因素的潜在影响。稀释线性验证实验提供了关于在不同稀释水平下测试的样品结果精度的信息。对每种经验证样品类型进行稀释线性测试，如果结果是每种稀释预期浓度的 70%-130%，则视为良好。线性对于在测定的动态范围内准确测量分析物浓度非常重要，可使用公式计算：

% 线性度 = (稀释后测量浓度 / 预期浓度) x 100

特定样品类型的稀释线性度通常如下表所示。在该示例中， 使用 HeLa 细胞裂解物评价 Invitrogen c-Myc (总) 人 ELISA 试剂盒。在检测的动态范围内，用试剂盒随附的标准稀释缓冲液稀释 HeLa 细胞裂解物。测量值与预期值显示出良好的检测线性，并且没有来自样品基质的明显干扰。

HeLa 细胞在 37°C 下，含有 10% 胎牛血清 (FBS) 的 DMEM 中生长，并用 细胞提取缓冲液裂解，并进行超声处理。将该裂解物在标准稀释缓冲液中稀释至检测范围，并测量 c-Myc（总量）。检测结果与预期浓度的线性回归检测产生的相关系数为0.99。

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平行性提供了在给定 ELISA 中以相同方式检测天然和重组样品的确认。平行性验证产生的数据确保给定分析物在天然样品中以类似于标准曲线的剂量依赖性方式被识别。 

图 1 显示了 ELISA 试剂盒验证期间针对并行性生成的数据。在检测的动态范围内连续稀释重组标准品、大鼠血清和大鼠血浆，并使用我们的大鼠生长激素 ELISA 试剂盒结果表明，稀释缓冲液中的标准品可用于准确定量测试基质中的样品浓度。

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回收率用于确定分析物检测是否受样品基质差异的影响。基质（如血清和血浆）可能具有干扰因素，影响 ELISA 准确定量分析物的能力。

通过将已知量的分析物加标到不同样品基质中来验证回收率。进行检测并确定回收率。通常，如果平均回收率为 80%-120%，则认为样品基质对检测准确定量分析物的能力影响最小。 

右表是用于报告回收率的典型格式。在该示例中，   检测了 Invitrogen 脂联素人 ELISA 试剂盒在 5 份不同血浆样品中的回收率。 

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灵敏度定义为可与背景区分的最低分析物水平。这通常称为分析灵敏度或检测限。通过将零标准重复获得的平均 O.D. 加上 2 个标准偏差来确定灵敏度。

例如， Invitrogen Tau (磷酸化) [pT181] 人 ELISA KI 灵敏度 <为 10 pg/mL。这表明测试的每个试剂盒批次的灵敏度均低于 10pg/mL。用于报告 ELISA 测定灵敏度的典型规格是 " 人 Tau [pT181] <的最低检测浓度为 10 pg/mL。这通过零标准检测 64 次时获得的平均 O.D. 加上两个标准偏差来确定。

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进行特异性测试以验证检测到的目标分析物与其他密切相关的分子未发生交叉反应。交叉反应可能导致假阳性结果或不准确定量。为了确保仅识别所需的分析物，对一组其他物质进行交叉反应性测试。

例如， 通过筛选 20 种不同物质的交叉反应性，对 Invitrogen IL-6 小鼠 ELISA 试剂盒的特异性进行了检测。用于报告 ELISA 特异性结果的典型格式是 " 使用 IL-6 小鼠 ELISA 试剂盒检测了一组 10 ， 000 pg/mL 的物质的缓冲溶液。 1β γ 检测后发现无交叉反应性：小鼠 IL-1 β ， IL-2 ， IL-4 ， IL-10 ， IFN- β ， TNF- α ；大鼠 1β IL-1 β ， IL-2 ， IL-4 ， IL-6 ， IFN- γ ， TNF- α ；人 IL-2 ， IL-4 ， IL-6 ， IL-10 ， IL-12 ， IFN- γ ， TNF- α ；猪 IL-8

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ELISA 的生产过程涉及高质量生产标准，以确保高质量 ELISA 试剂盒的一致生产。基本因素包括—严格的文档和记录保存，人员培训，质量控制程序，设施和设备维护，关键流程的验证，原材料控制，可追溯性，环境监测，变更控制， 和符合监管标准。 

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