Invitrogen 重组兔多克隆抗体是赛默飞世尔科技的独特产品。这种抗体由重链和轻链库共表达的重组抗体混合物组成。重组兔多克隆抗体兼具多克隆抗体的灵敏度和单克隆抗体的特异性，在这两方面均是佼佼者，同时具备重组抗体的一致性。重组多克隆抗体的功能与多克隆抗体相同，不过它能识别靶标上的多个抗原位点，因此对低丰度靶标具有更高的检测灵敏度。每个批次的重组多克隆抗体可产生精确的重链和轻链，避免了多克隆抗体生产过程中带来的生物变异性。

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重组兔多克隆抗体生产

在一致性方面，重组兔多克隆抗体与其他多克隆抗体相似，然而前者是无动物源性的。对兔进行免疫，然后分离外周血单核细胞 (PBMC)，而非使用杂交瘤细胞。筛选克隆 DNA文库，使用经优化的哺乳动物宿主共表达其重链和轻链 cDNA。克隆了 DNA 的细胞可生产无动物源性抗体。

重组兔多克隆抗体的优势

因为不会出现基因漂移——一种杂交瘤细胞随着时间的推移而改变表达模式的现象，重组兔多克隆抗体展现了优异的批次间重现性，重组兔多克隆抗体制备所涉及3个不同的筛选步骤，因此得到的抗体具有比普通抗体更优异的特异性和灵敏度。

其他优势包括：

  • 特异性和灵敏度优于其他多克隆抗体
  • 重组技术带来批次间一致性
  • 无动物源成分，是细胞培养的产物
  • 开发过程中的多次筛选能改善抗体性能。

应用数据

图 2.免疫荧光分析对数期的 ME-180 细胞检测其 NFkB p65 。用 TNF-α（50 ng/mL，20分钟）处理或不处理细胞，接着用 4% 多聚甲醛固定15分钟，然后用 0.1% Triton X-100 透化10分钟，之后用 1% BSA 在室温下封闭1小时。随后用含0.1% BSA的 NFkB p65（绿色）重组兔多克隆抗体（货号710048室温孵育3小时，然后用山羊抗兔 IgG (H+L) Superclonal 二抗、Alexa Fluor 488 偶联物（货号 A27034，稀释比为 1:2,000）标记细胞，在室温下孵育45分钟。细胞核（蓝色）采用 SlowFade Gold Antifade Mountant DAPI（货号 S36938）复染。F 肌动蛋白（红色）采用罗丹明鬼笔环肽（货号 R415，1:300）进行染色。在对照细胞系（panels a、e）中观察到 TNFα 诱导的 NFkB 核转位（NFkB 是 TNFR1、TRADD 和 IKK α 中的下游靶标），但在 TNFR1、TRADD 和 IKK α 敲除 (KO) 细胞系（panels b-d、f-h）中并无此发现。这些图像均在放大40倍的情况下采集的。

图 3.WB分析组蛋白H3。泳道1，2分别表示上样 20 µg HeLa 细胞裂解物以及用 100 µM Calyculin A 处理25分钟的 HeLa 细胞裂解物，然后使用 Novex NuPAGE 4-12% Bis-Tris 凝胶（货号 NP0321BOX）、XCell SureLock 电泳系统（货号 EI0002）、Novex Sharp 预染蛋白标准品（货号 LC5800）以及 iBlot 干转系统（货号 IB21001）对组蛋白 H3 (pS10) 进行 Western 印迹分析。将蛋白质转印到硝酸纤维素膜上，并用 5% 脱脂牛奶在室温下封闭1小时。然后使用含2.5% 脱脂牛奶的组蛋白 H3 (pS10) 重组兔多克隆抗体（货号710282，浓度为 1 µg–3 µg/mL）在 4°C 震荡孵育过夜，然后在 ~17 kDa 处检测组蛋白 H3 (pS10)。为验证特异性，使用磷酸肽 (10 µg/mL) 进行了竞争实验，如右侧对应的印迹图所示。此后使用按 1:5,000 稀释的山羊抗兔 IgG-HRP 二抗（货号 G-21234）孵育，并使用 Pierce ECL Western 印迹底物（货号32106）进行化学发光检测。

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