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重组兔单克隆抗体
Invitrogen重组兔单克隆抗体源自可生成兔单克隆抗体的细胞系，通过分离及克隆特定抗体的重链和轻链DNA序列而产生。这些兔单抗并不会因细胞系的改变或批次间的改变而受影响，因此可实现极高的特异性和性能。
重组兔单克隆抗体生产
重组兔单克隆抗体除了与传统小鼠单克隆抗体有相似的一致性外，还是无动物源性的。对免子进行免疫，然后分离和筛选其外周血单核细胞 (PBMC)，而非使用杂交瘤细胞。将 DNA 克隆为文库并进行筛选，然后获取单个克隆并再次筛选。克隆了 DNA 的细胞可生产无动物源性抗体。
图 1.重组兔单克隆抗体生产。
重组兔单克隆抗体优势
重组兔单克隆抗体展现了优异的批次间重现性，并且“堆积的” DNA 不会出现细胞漂移——杂交瘤细胞随着时间的推移而改变表达模式的现象。在制作重组兔单克隆抗体的筛选流程中涉及3个不同筛选步骤，使其比标准抗体具备更好的特异性和敏感性。
其它优势包括：
- 相对于标准抗体有更好的特异性和敏感性
- 重组技术带来的批次间一致性
- 无动物源成分，细胞培养的产物
- 开发过程中的多次筛选能改善抗体性能。
了解更多重组兔单克隆抗体的优势以及与传统单克隆抗体数据对比，请点击以下选项卡。
兔单抗的可重复生产过程
重组兔单克隆抗体是通过将重链和轻链抗体cDNA转染至哺乳动物细胞生产的。这种高度可重复的生产过程获得了前所未有的批次间稳定性。并且节约时间和金钱，因为实验条件无需再验证。图1为利用独立批次的重组兔单克隆抗体产生的一致性免疫印迹分析结果及其图示。图2为该抗体在免疫细胞化学中表现出的批次间一致性及其图示。图3为该抗体在流式细胞术中产生的相同结果。
图 1.蛋白质印迹分析批间一致性。用四个不同批次的SMAD2 重组兔单克隆抗体检测 HeLa 细胞提取物。泳道 A、B 和 C 中的浓度分别为 2 μg/mL、1 μg/mL 和 0.5 μg/mL。使用WesternBreeze兔抗化学发光试剂盒检测一抗。左图展示了四个不同浓度以及批次的定量结果，显示了极佳的批次间一致性（n=4，Error bars=标准误差）。
图 2.使用免疫细胞化学分析批次间一致性。用四个不同批次的 SMAD2 重组兔单克隆抗体标记组织培养的 HeLa 细胞。A-D代表批次1-4浓度为3 μg/mL，E-H代表批次1-4浓度为0.5 μg/mL。使用1:1000稀释的 Alexa Fluor 488 山羊抗兔 IgG 荧光二抗。左图为4个批次抗体在不同浓度下的定量结果，表现出极佳的批次间稳定性（n=4，Error bars=标准误差）。
图 3。 使用流式细胞术分析批次间一致性。流式细胞术的定量分析表示，四个独立批次的 SMAD2 重组兔单克隆抗体 在不同浓度下，显示出高度的批次间一致性。 使用 FIX PERM细胞透化试剂盒处理 HeLa 细胞。SMAD2 ABfinity Antibody 孵育后，利用 Alexa Fluor 488 山羊抗兔 IgG 荧光二抗（n=4，Error Bars = 标准误差）检测。
兔单抗具有可靠的灵敏度和特异性
重组兔单克隆抗体在特异性和灵敏度上优于其他形式的抗体。这些抗体只与靶标反应，可消除或降低非特异性信号的产生。具有更高灵敏度，能够检测到其他抗体难以检测的低表达丰度靶标。此外，检测所需抗体更少，可节约珍贵样品。
图4利用免疫印迹分析直接对比了ABfinity STAT4抗体和市售最佳的STAT4抗体。包括来自多克隆、传统杂交瘤单克隆和兔杂交瘤单克隆平台的抗体。图5表明ABfinity抗体在免疫细胞化学中产生了相同结果。
图 4. 利用重组兔单克隆抗体获得了优异的蛋白质印迹结果。STAT4 ABfinity和多克隆抗体的使用浓度为 以 2、1 和 0.5 μg/mL ，来自其他供应商的STAT4 抗体以其推荐浓度使用。利用 WesternBreeze 化学发光试剂盒（抗兔）检测一抗
图 5.使用重组兔单克隆抗体获得增强的免疫细胞化学结果。使用 2.5 μg/mL 的 STAT4 ABfinity抗体 和图4相同抗体所获取的免疫细胞化学结果。其他供应商的 STAT4 抗体使用其推荐浓度。使用1:1000的 Alexa Fluor 488 山羊抗兔 IgG 荧光二抗。
兔单克隆抗体验证
我们的重组兔单克隆抗体经多种应用验证和表征。经过大量广泛的验证过程确保识别特异的靶标，无需优化。应用实如图6-9所示。
图 6.流式细胞分析AKT [pS473] – 重组兔单克隆抗体标记的 Jurkat 细胞。使用 FIX PERM 试剂固定和破膜之前， 用50 µM PI3K/AKT 信号通路抑制剂 LY294002处理（红线）或不处理（绿线）Jurkat 细胞 1 小时。然后用 1 µg/test的 重组兔单克隆抗体和 Alexa Fluor 488 山羊抗兔IgG二抗对细胞进行染色。蓝线表示二抗对照组。
图 7.免疫细胞化学分析AKT [pS473] – 重组兔单克隆抗兔标记的小鼠成纤维细胞。 用 (A)或不用 (B) 10 µg/mL 胰岛素处理细胞并用兔抗 AKT [pS473] (5 µg/mL) 标记。以磷酸肽作为抗体免疫原进行孵育的细胞所产生的信号降低（ (C)，而使用非磷酸肽的未降低 (D)。使用1:1000稀释的 Alexa Fluor 488 山羊抗兔 IgG 荧光二抗，细胞核用 Hoechst（蓝色）染色。
图 8.免疫组织化学分析AKT [pS473] - 重组兔单克隆抗体标记的人食管癌组织。用anti-AKT [pS473] (0.5 µg/mL)对甲醛固定和石蜡包埋（FFPE）的人食管癌组织进行标记。用 EDTA 预处理组织并用 SuperPicTure Polymer DAB 检测。图片为20倍放大，染色部分展示肿瘤细胞的细胞核和细胞质。
图 9.蛋白质印迹分析AKT [pS473] - 重组兔单克隆抗体标记的 3T3 细胞裂解物。用 anti-AKT [pS473] (0.1 µg/mL) 对未处理的 （泳道1）或经 PDGF 处理的 3T3 裂解物（泳道2）进行标记。
兔单抗的可重复生产过程
重组兔单克隆抗体是通过将重链和轻链抗体cDNA转染至哺乳动物细胞生产的。这种高度可重复的生产过程获得了前所未有的批次间稳定性。并且节约时间和金钱，因为实验条件无需再验证。图1为利用独立批次的重组兔单克隆抗体产生的一致性免疫印迹分析结果及其图示。图2为该抗体在免疫细胞化学中表现出的批次间一致性及其图示。图3为该抗体在流式细胞术中产生的相同结果。
图 1.蛋白质印迹分析批间一致性。用四个不同批次的SMAD2 重组兔单克隆抗体检测 HeLa 细胞提取物。泳道 A、B 和 C 中的浓度分别为 2 μg/mL、1 μg/mL 和 0.5 μg/mL。使用WesternBreeze兔抗化学发光试剂盒检测一抗。左图展示了四个不同浓度以及批次的定量结果，显示了极佳的批次间一致性（n=4，Error bars=标准误差）。
图 2.使用免疫细胞化学分析批次间一致性。用四个不同批次的 SMAD2 重组兔单克隆抗体标记组织培养的 HeLa 细胞。A-D代表批次1-4浓度为3 μg/mL，E-H代表批次1-4浓度为0.5 μg/mL。使用1:1000稀释的 Alexa Fluor 488 山羊抗兔 IgG 荧光二抗。左图为4个批次抗体在不同浓度下的定量结果，表现出极佳的批次间稳定性（n=4，Error bars=标准误差）。
图 3。 使用流式细胞术分析批次间一致性。流式细胞术的定量分析表示，四个独立批次的 SMAD2 重组兔单克隆抗体 在不同浓度下，显示出高度的批次间一致性。 使用 FIX PERM细胞透化试剂盒处理 HeLa 细胞。SMAD2 ABfinity Antibody 孵育后，利用 Alexa Fluor 488 山羊抗兔 IgG 荧光二抗（n=4，Error Bars = 标准误差）检测。
兔单抗具有可靠的灵敏度和特异性
重组兔单克隆抗体在特异性和灵敏度上优于其他形式的抗体。这些抗体只与靶标反应，可消除或降低非特异性信号的产生。具有更高灵敏度，能够检测到其他抗体难以检测的低表达丰度靶标。此外，检测所需抗体更少，可节约珍贵样品。
图4利用免疫印迹分析直接对比了ABfinity STAT4抗体和市售最佳的STAT4抗体。包括来自多克隆、传统杂交瘤单克隆和兔杂交瘤单克隆平台的抗体。图5表明ABfinity抗体在免疫细胞化学中产生了相同结果。
图 4. 利用重组兔单克隆抗体获得了优异的蛋白质印迹结果。STAT4 ABfinity和多克隆抗体的使用浓度为 以 2、1 和 0.5 μg/mL ，来自其他供应商的STAT4 抗体以其推荐浓度使用。利用 WesternBreeze 化学发光试剂盒（抗兔）检测一抗
图 5.使用重组兔单克隆抗体获得增强的免疫细胞化学结果。使用 2.5 μg/mL 的 STAT4 ABfinity抗体 和图4相同抗体所获取的免疫细胞化学结果。其他供应商的 STAT4 抗体使用其推荐浓度。使用1:1000的 Alexa Fluor 488 山羊抗兔 IgG 荧光二抗。
兔单克隆抗体验证
我们的重组兔单克隆抗体经多种应用验证和表征。经过大量广泛的验证过程确保识别特异的靶标，无需优化。应用实如图6-9所示。
图 6.流式细胞分析AKT [pS473] – 重组兔单克隆抗体标记的 Jurkat 细胞。使用 FIX PERM 试剂固定和破膜之前， 用50 µM PI3K/AKT 信号通路抑制剂 LY294002处理（红线）或不处理（绿线）Jurkat 细胞 1 小时。然后用 1 µg/test的 重组兔单克隆抗体和 Alexa Fluor 488 山羊抗兔IgG二抗对细胞进行染色。蓝线表示二抗对照组。
图 7.免疫细胞化学分析AKT [pS473] – 重组兔单克隆抗兔标记的小鼠成纤维细胞。 用 (A)或不用 (B) 10 µg/mL 胰岛素处理细胞并用兔抗 AKT [pS473] (5 µg/mL) 标记。以磷酸肽作为抗体免疫原进行孵育的细胞所产生的信号降低（ (C)，而使用非磷酸肽的未降低 (D)。使用1:1000稀释的 Alexa Fluor 488 山羊抗兔 IgG 荧光二抗，细胞核用 Hoechst（蓝色）染色。
图 8.免疫组织化学分析AKT [pS473] - 重组兔单克隆抗体标记的人食管癌组织。用anti-AKT [pS473] (0.5 µg/mL)对甲醛固定和石蜡包埋（FFPE）的人食管癌组织进行标记。用 EDTA 预处理组织并用 SuperPicTure Polymer DAB 检测。图片为20倍放大，染色部分展示肿瘤细胞的细胞核和细胞质。
图 9.蛋白质印迹分析AKT [pS473] - 重组兔单克隆抗体标记的 3T3 细胞裂解物。用 anti-AKT [pS473] (0.1 µg/mL) 对未处理的 （泳道1）或经 PDGF 处理的 3T3 裂解物（泳道2）进行标记。