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Invitrogen EVOS FL自动成像系统是一款全自动、数字、倒置多通道荧光和透射光成像系统，具有出色的工作流程效率。该设计旨在满足各种应用的严格要求，支持高分辨率马赛克拼接，多位置孔扫描，带阈值处理的细胞计数和延时研究。

多功能软件功能包括细胞计数，可以用捕获的或实时图像自动完成。强大的分水岭算法提高了细胞计数的精确度，比如使用Invitrogen NucBlue Fixed Cell ReadyProbes 试剂染色、或其他核染料/荧光蛋白或一般细胞质荧光染料/蛋白，可以容易地确定总细胞数和/或为功能读数染色的细胞百分比。

在本应用简报中，复制细胞的数量被确定为总细胞群的百分比。通过用Invitrogen^TM Click-iT^TM EdU-Alexa Fluor^TM 594成像试剂盒标记细胞鉴定增殖细胞，用NucBlue Fixed Cell ReadyProbes试剂确定总细胞，可以容易地确定增殖细胞的百分比。

材料

• Image-iT 固定/透化试剂盒（货号A5818101）
• Click-iT^TM EdU Alexa Fluor^TM 594成像试剂盒(货号C10339)
• NucBlue Fixed Cell ReadyProbes 试剂（货号R37606）
• EVOS Light Cube，DAPI（货号AMEP4650）
• EVOS Light Cube，Texas Red™（货号AMEP4655）
• EVOS FL自动成像系统（货号AMAFD1000）

方法

将生长在96孔板中的HeLa细胞用EdU孵育1小时。使用Image-iT固定/透化试剂盒固定、透化和封闭细胞。固定和透化后，用2滴/mL NucBlue Fixed Cell ReadyProbes试剂标记细胞核，用Alexa Fluor 594叠氮化物（货号C10339的组分B）检测掺入的EdU。掺入EdU的细胞以粉红色显示，而所有细胞均以蓝色标记细胞核（图1）。样品制备后，使用EVOS FL自动成像系统对细胞成像，用EVOS DAPI光立方来观察NucBlue Fixed Cell ReadyProbes试剂、用EVOS Texas Red光立方、10x物镜来观察Click-iT EdU。使用EVOS FL自动成像系统上的细胞计数选项卡对细胞进行定量。

图 1.用于定量分析增殖的HeLa细胞的10x图像的叠加。

结果与讨论

通过计数DAPI通道中NucBlue Fixed染色的的细胞数，确定总细胞群为373（图2）。在该群体中，通过计数Texas Red通道中Click-iT EdU阳性的细胞数，确定增殖细胞的数量为138。基于这些结果，该群体中37％（138/373）的细胞显示出活跃增殖（图3）。使用EVOS FL自动成像系统，研究人员可以将定性图像与定量测量相结合，为研究应用提供丰富的数据。

图 2.图像内细胞总数（蓝色）定量的屏幕截图。在该视野中计数373个总细胞。

图 3.图像内增殖细胞（红色）群体定量的屏幕截图。在该视野中计数138个增殖细胞。