组织透明化试剂盒-3D 细胞培养和组织成像-赛默飞

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改善 3D 细胞成像结果

当对较厚的组织（最大 10 mm）和各种厚度的 3D 细胞培养物（包括类器官和类球体）成像时，建议使用 Invitrogen CytoVista 透明化试剂。CytoVista 透明化试剂经过专门优化，可用于透明化和固定具有挑战性的样品，为获得清晰、明亮的荧光图像提供最佳清晰度。为满足您的实验需求，试剂以试剂盒形式提供，也可以单独提供。

本页内容：

CytoVista 透明化试剂选择表
查看 3D 培养物透明化和成像的应用

为什么传统封片剂无法用于3D 细胞培养物和厚组织成像

类器官、球体和厚组织的成像对样品本身提出了新的挑战。由于组织和 3D 细胞培养物的不透明性，标准成像试剂和技术很难获得清晰度较高的图像。荧光标记厚样本必须“透明化”，使样本更加透明，才能更容易 3D 成像。Invitrogen CytoVista 透明化试剂专门针对厚度达 10 mm 的组织以及各种厚度的球体和类器官进行了优化。

使用 CytoVista 透明化试剂实现清晰、明亮的 3D 荧光图像

对贴壁细胞染色时，需要做的就是添加简单的染色缓冲液就可以了，但是对荧光标记厚样本必须进行“透明化”，使其更加透明，才能更容易三维成像。理想的透明化试剂应对样品原本的形态或试剂的荧光灵敏度影响最小。用于 3D 成像的 CytoVista 透明化试剂具备光学透明化和封片功能，可满足这些需求。

这些 CytoVista 透明化试剂可提供：

快速透明化—仅需 2 小时即可透明化 1 mm 厚的样品，仅需 24 小时即可透明化 8 mm 厚的小鼠全脑
温和光学透明化—对荧光标记组织进行透明化用于 3D 成像后，对检测灵敏度或样品形态的影响最小
工作流程兼容性—无需其他设备或仪器即可轻松实现试剂与 IHC 工作流程的兼容性
平台兼容性—与大多数荧光染料和标准荧光成像仪器兼容
灵活性—将光学透明化组织样品和培养物保存数周，对样品形态或荧光信号亮度和特异性的影响最小
可逆性—对于珍贵样品，透明化操作可逆，可以对组织进行处理和切片以进行组织学研究，例如苏木精和曙红（H＆E）染色

CytoVista 试剂选择指南

CytoVista 透明化试剂盒*

	CytoVista 3D 细胞培养透明化/染色试剂盒	CytoVista 组织透明化/染色试剂盒
用途	即用型固定细胞软质化成像试剂可实现立即成像
样品类型	厚度达 1 mm 的类器官和球体	厚度达 10 mm 的组织样本
折射率	1.48	1.53
试剂盒组分	3D 细胞培养透明化试剂抗体稀释缓冲液封闭缓冲液抗体渗透缓冲液 10X 洗涤缓冲液	组织透明化试剂组织透明化增强剂抗体稀释缓冲液封闭缓冲液抗体渗透缓冲液 10X 洗涤缓冲液组织破膜缓冲液
货号	V11325	V11324

*运输和储存时在多种温度下进行。根据产品标签储存

非试剂盒 CytoVista 试剂

CytoVista 透明化试剂

试剂	样品类型	折射率	货号	规格
3D 培养细胞透明化试剂	类球体厚度达 1 mm	1.48	V11326	10 mL
			V11315	30 mL

组织透明化试剂	厚度达 1 mm 的组织样本	1.50	V11300	30 mL
组织透明化试剂	厚度达 1 mm 的组织样本	1.50
组织透明化增强剂	厚度达 10 mm 的组织样本	1.53	V11302	30 mL
组织透明化增强剂	厚度达 10 mm 的组织样本	1.53
组织透明化试剂和增强剂	厚度达 10 mm 的组织样本	1.53	V11304	每种 10 mL
			V11322	每种 30 mL

CytoVista 缓冲液

缓冲液	货号	规格
抗体稀释缓冲液	V11305	30 mL
抗体稀释缓冲液
封闭缓冲液	V11307	30 mL
封闭缓冲液
抗体渗透缓冲液	V11309	30 mL
抗体渗透缓冲液
洗涤缓冲液	V11311	70 mL
洗涤缓冲液
组织破膜缓冲液	V11313	30 mL
组织破膜缓冲液

CytoVista 组织成像腔室垫和小鼠脑切片器

CytoVista 组织成像腔室垫

深度	货号	规格
0.75 mm 深度	V11333	每套 6 个
1.75 mm 深度	V11317	每套 6 个
3.5 mm 深度	V11318	每套 6 个
7 mm 深度	V11319	每套 6 个

CytoVista 小鼠脑切片器

类型	货号	规格
1 mm 冠状切片	V11335	各 1
1 mm纵向切片	V11334	各 1
2 mm 冠状切片	V11320	各 1
2 mm纵向切片	V11321	各 1

3D 细胞培养和组织透明化应用的图片库

球体成像

图 1.CytoVista 3D 细胞培养透明化/染色试剂盒减少了光散射并提高了可计数细胞数量，尤其是位于球体核心的细胞数量。 共焦图像 z-stack切片的叠成图，细胞核采用 SYTOX Green 染料染色；（A）未透明化的微组织；（B）透明化的微组织；z- projections为白色轮廓；z- projections掩盖了未透明化微组织，使成像变得困难，这是因为 z- projections掩盖了成像中发生的遮盖。透明化后的微组织无遮盖阴影，内部细胞清晰可见。

图 2.使用 CytoVista 3D 细胞培养透明化试剂获得更清晰的球体图像。CytoVista 3D 细胞培养透明化试剂透明化处理 HepG2 球体，最大程度地减少了光散射，从而得到更清晰的图像和更完整的细胞计数。通过准确计数球体核心处的死细胞，对更多的活细胞进行分析。（A）未透明化和（B）透明化 HepG2 球体的共聚焦 z-切片。蓝色 = DAPI；绿色 = LIVE/DEAD 可固定的绿色死细胞染色。

球体内的细胞增殖

图 3.球体透明化后，可对更多细胞的细胞增殖标记物进行分析CytoVista 3D 细胞培养透明化试剂。Ki-67 和用于成像 Alexa Fluor 488 染料的 Click-iT EdU 细胞增殖试剂盒用作细胞增殖标记物。受未透明化样品光散射的影响，与未透明化样品相比，透明化样品中的细胞分析数更多。HeLa 球体采用 Hoechst 34580（蓝色）、 Click-iT EdU 细胞增殖试剂盒（用于成像 Alexa Fluor 488 染料、绿色），以及 Ki-67 Mab 和 Alexa Fluor 647 结合物进行标记。使用 Thermo Scientific 高内涵共聚焦成像系统进行细胞成像。

Stemonix 3D MicroBrain 模型的高内涵筛选视频

视频 1.CytoVista 3D 细胞培养透明化/染色试剂盒的详细 3D合成视频。使用 Thermo Scientific CellInsight CX7 LZR 高内涵分析平台对来自 iPSC 衍生化神经祖细胞的 Stemonix 3D MicroBrain 模型进行成像。使用 CytoVista 3D 细胞培养透明化/染色试剂盒将组织透明化、固定并成像。将 Invitrogen NeuroTrace 绿色荧光 Nissl 染色剂与 GFAP 一抗、山羊抗兔 IgG Alexa Fluor Plus 647 二抗结合使用。ImageJ 用于生成 .avi 文件。

人肺组织的 3D 高内涵筛选视频

视频 2.使用 CytoVista 组织透明化/染色试剂盒获得的清晰 3D 荧光图像视频。采用 α-SMA、CD31 和 DAPI 核染色（DAPI =蓝色，SMA =红色，CD31 =绿色，包含一抗和二抗步骤）对一块 7.0 mm x 5.0 mm X 0.612 mm 的人肺组织进行标记。标记后，使用 CytoVista 组织透明化/染色试剂盒透明化处理并固定组织，然后使用 Thermo Scientific CellInsight CX7 LZR 高内涵分析平台进行成像。该视频显示了使用 CellInsight CX7 LZR 共聚焦系统上的 10 倍物镜扫过该组织获得的其中一个视野的图像。使用 1.53 um Z-step 对人肺组织进行成像，得到立体像素。

组织的 3D 共聚焦显微图像

视频 3.使用 CytoVista 组织透明化/染色试剂盒获得美丽的组织三维视图。三维高内涵共聚焦显微图像显示了使用 CytoVista 组织透明化/染色试剂盒透明化处理并固定的鼠前列腺前视图。使用 E-钙粘蛋白（红色）、Beta-3微管蛋白（绿色）CD31（白色）对组织进行标记，并使用 E-钙粘蛋白（红色）和 CD31（白色）对鼠尿道进行标记以进行评估。

1 mm 厚组织的 3D 成像

图 4.使用 CytoVista 3D 细胞培养透明化试剂可轻松实现厚组织样本成像。（A）使用抗parvalbumin抗体标记 1 mm 厚的大鼠脑样本。采用正置共聚焦显微镜上的 10 倍物镜进行拍摄。（B）使用抗-Ki-67 FITC 结合的单克隆抗体标记从 PyMT 转染小鼠获得的 1 mm 厚乳腺肿瘤样本，研究细胞增殖标记。采用正置共聚焦显微镜上的 10 倍物镜进行拍摄。