Invitrogen Aluora 空间扩增试剂盒为在多重免疫组织化学技术 (mIHC) 应用中检测低丰度标靶提供了一种强大方法。mIHC、空间蛋白质组学和其他多重成像实验的一个限制因素是检测自发荧光和非特异性背景下的低丰度蛋白。我们的 Aluora 空间扩增试剂盒可通过明亮的 Aluora 染料和酶介导的信号扩增克服此限制。

什么是 Aluora 空间扩增？

Aluora 空间扩增试剂盒将高浓度的 Aluora 染料与酶介导的信号扩增相结合，可产生非常明亮的共价结合荧光基团，用于多重 IHC 和空间成像。Aluora 空间扩增试剂盒可增强荧光信号强度，便于在一份组织样品中检测多达8个标靶。这项技术对于空间生物学研究而言非常宝贵，有助于检测和了解空间关系和细胞相互作用。

使用 Aluora 空间扩增技术的基本步骤包括一抗标记、多聚辣根过氧化物酶 (HRP) 二抗检测、通过 Aluora 染料反应沉积荧光基团以及最终剥离抗体复合物，使荧光基团共价标记在组织样本上。

Image of Aluora Spatial Amplification workflow

图1.Aluora 信号扩增标记工作流程。用相关标靶的一抗标记组织，然后与多聚辣根过氧化物酶 (HRP) 二抗一起孵育。然后，Aluora 染料反应将荧光基团共价结合到组织上。然后即可剥离抗体复合物，重复该方法进行多重成像。


Aluora 空间扩增试剂盒和试剂的优势

Invitrogen Aluora 染料可提供更高的亮度和更佳的灵敏度，是空间蛋白质组学应用的绝佳选择。凭借 8 种亮度相似和发射光谱不同的不同荧光基团，可以在光谱成像系统上实现多达8重多重检测，从而实现全面的空间成像。得益于酶介导的信号扩增，这些荧光基团还可出色地检测低丰度标靶，并且需要的一抗量显著减少。相同物种的一抗也可与这些试剂配合使用，在数轮信号扩增之间循环剥离抗体，或与徕卡 BOND 这样的自动玻片染色机结合，简化多重染色工作流程。

  • 增强亮度—使用更明亮的荧光基团提高荧光灵敏度，经优化可用于空间蛋白质组学应用，性能优于其他信号扩增系统，可实现 1:1,000 至 1:50,000 的一抗稀释
  • 增加低丰度标靶检测—得益于 HRP 酶介导的 Aluora 信号增强技术，在背景噪声下亦可实现对极低丰度标靶的卓越检测
  • 无缝兼容仪器—专为 EVOS S1000 空间成像系统和 Akoya PhenoImager 的荧光光谱成像而设计，确保与空间成像系统的无缝集成
  • 扩大多重检测的抗体选择—通过荧光基团的共价结合进行酶介导的标记，可以在数轮信号扩增之间剥离一抗，并支持使用同一宿主物种的一抗，从而扩大多重标记实验的抗体选择

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如何使用 Aluora 空间扩增试剂盒进行空间成像

Aluora 空间扩增试剂包含一组专门设计用于空间成像的8种荧光染料。这些染料支持多达8重的多重检测，其发射光谱可以进行光谱拆分，从而在 EVOS S1000 空间成像系统及其他系统（如 Akoya PhenoImager）上实现多重空间成像。这简化了实验设计和条件测试。此外，Aluora 染料可用于任何配备标准滤光片组的成像系统，但多重检测需要仔细考虑光谱重叠问题。

订购 Aluora 试剂  EVOS S1000 仪器试用


Aluora 空间扩增试剂盒的多重扩增

能够使用来自同一宿主物种的多种一抗进行 mIHC，为多重标记开辟了新的可能性。Aluora 空间扩增试剂不仅可以增强低丰度标靶的灵敏度，还可以对组织样品上相同或不同宿主物种的一抗进行多重检测，而无需担心抗体之间的交叉反应。Aluora 空间扩增技术产生高度反应性的酪胺样自由基，该自由基可共价结合并定位 IHC 样本中的抗体染色。在 Aluora 染料信号显影完成后，可从组织中去除一抗和二抗，并进行抗体剥离，而不会降低沉积荧光基团的强度。去除抗体后，可使用相同或不同宿主物种（如兔或小鼠）的一抗重新探测组织，而无需担心交叉反应，随后可进行另一轮 Aluora 空间扩增的检测。为了提高便利性和通量，可在自动玻片染色机（例如徕卡 Bond RX 系统）上执行这些步骤。

图中显示了使用 Aluora 空间扩增的循环染色过程

图2.Aluora 空间扩增循环染色过程的图示。该方法首先需要进行抗原修复，然后阻断非特异性抗原决定簇。然后可以用一抗标记组织，然后用多聚 HRP 二抗试剂进行标记。最后，加入 Invitrogen Aluora 染料，使荧光基团共价结合到组织上。该过程可以对每个一抗重复，从第 1 步开始，其中抗体复合物将被去除。


用于组织染色的多重信号扩增

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Aluora 空间扩增试剂选择指南

 Aluora 430 空间成像试剂Aluora 488 空间成像试剂Aluora 514 空间成像试剂Aluora 555 空间成像试剂Aluora 594 空间成像试剂Aluora 647 空间成像试剂Aluora 700 空间成像试剂Aluora 750 空间成像试剂*
检测荧光信号扩增100倍
激发/发射波长427/499493/518512/529553/567589/615652/670687/706757/783
通道430488514555594647700750
EVOS 滤光片CFPGFPYFPRFPTexas RedCy5Cy5.5Cy7
灵敏度极佳
应用多重染色可实现高达8重的荧光光谱和空间成像应用
自动化与自动玻片染色机（如徕卡 Bond）兼容的多重染色
单独的 Aluora 试剂*AS430HRPAS488HRPAS514HRPAS555HRPAS594HRPAS647HRPAS700HRPAS750HRP
Aluora 山羊抗小鼠 HRP 试剂盒**A40001329A40001330A40001331A40001332A40001333A40001334A40001335A40001336
Aluora 山羊抗兔 HRP 试剂盒**A40001337A40001338A40001339A40001340A40001341A40001342A40001343A40001344
Aluora 链霉素亲和素 HRP 试剂盒**A40001345A40001346A40001347A40001348A40001349A40001350A40001351A40001352
Aluora 空间成像彩虹试剂盒A40002450

* Aluora 750 空间试剂接近红外 (IR) 酪胺样试剂，只需一步即可共价结合到组织。酶灭活和抗体剥离可立即用于后续的信号扩增反应，相较于空间生物学领域的其他近红外信号扩增试剂具有优势。

** Aluora 空间扩增试剂盒包含进行检测分析所需的所有组件。可通过购买其他 Aluora 空间试剂进行多重实验。


对空间生物学不熟悉？我们随时为您提供帮助。点击此处获取支持，帮助您设计实验

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Aluora 空间扩增实验的数据图库

荧光显微镜图像

图3.用 Aluora 空间成像彩虹试剂盒和 DAPI 染色的浸润性导管癌组织。用 Aluora 空间成像彩虹试剂盒处理和染色的人浸润性乳腺导管癌组织（目录号 A40002450）。复合图像带放大插图。在 EVOS S1000 空间成像系统上进行图像和光谱拆分。

 

9色荧光显微镜图像

图4.使用8重 Aluora 空间扩增测定和 DAPI 染色的浸润性导管癌组织，展示在单独的图块中。用 Aluora 空间成像彩虹试剂盒处理和染色的人浸润性乳腺导管癌组织（目录号 A40002450）。图块代表单独的 Aluora 染料颜色。在 EVOS S1000 空间成像系统上进行图像和光谱拆分。

 

4面板荧光显微图像和分布图

图5.单细胞分割和表型分析揭示了免疫细胞亚群的空间分布。分析人浸润性乳腺导管癌组织，可识别单细胞标靶表达和免疫细胞亚群的特异性定位。(A) 使用 Aluora 空间成像彩虹试剂盒（目录号 A40002450）生成的复合图像。(B) 组织分割，识别阳性和阴性区域。(C) 分析的 0.7 mm2 区域包含 10,454 个细胞，白色细胞段表示双阳性增殖&免疫细胞表型。(D) 识别区域特异性细胞的定位。在 Indica Labs HALO（版本 4.0.5107.318）软件上进行多重免疫荧光拼接图像的分析。

9重 Aluora 空间扩增标记在人浸润性导管癌中的应用图像

图6.  使用8重 Aluora 空间扩增测定和 DAPI 染色的浸润性导管癌组织。用 Aluora 空间扩增8重测定处理和染色的人浸润性乳腺导管癌组织左侧显示复合图像，右侧显示各个解混通道。在 EVOS S1000 空间成像系统上进行图像和光谱解混。
 

灵敏度研究的结果

图7.Aluora 594 空间染料显示出优于竞品 O 和二抗等效物的信号，且所需的一抗浓度更低。将人福尔马林固定后石蜡包埋 (FFPE) 小肠组织与 1:10,000 稀释的 增殖细胞核抗原 (PCNA) 单克隆抗体 (PC10)（目录号 13-3900）孵育后，分别使用 Alexa Fluor 594 二抗（目录号 A-11014）、Aluora 594 山羊抗小鼠 HRP 试剂盒（目录号 A40001331）或竞品 1 的荧光基团等效物进行标记。对 N=5 张图像的信号背景比进行分析，P < 0.0001。使用 Invitrogen EVOS S1000 空间成像系统拍摄的图像。

 

9重 Aluora 空间扩增标记在人浸润性导管癌中的应用图像

图8.人 FFPE 小肠中的 Aluora 空间扩增试剂。将人 FFPE 小肠与小鼠 PCNA 抗体（PC10，目录号 13-3900）孵育并使用 Aluora 430 山羊抗小鼠 HRP 试剂盒（目录号 A40001329）标记，显示为绿色；与小鼠波形蛋白抗体（V9，目录号 MA5-11883）孵育并使用 Aluora 594 山羊抗小鼠 HRP 试剂盒 （目录号 A40001333）标记，显示为红色；与 小鼠平滑肌 (SMA) 抗体（1A4，目录号 14-9760-82）孵育并使用 Aluora 700 山羊抗小鼠 HRP 试剂盒（目录号 A40001336）标记，显示为白色，同时使用 DAPI 进行核染色。载玻片用 Prolong Glass  防褪色封片剂封固。使用 Invitrogen EVOS M7000 成像系统拍摄的图像（参见有关 EVOS 成像系统的信息）。

9重 Aluora 空间扩增标记在人浸润性导管癌中的应用图像

图9.人 FFPE 小肠中的 Aluora 空间扩增试剂。将人 FFPE 小肠与 小鼠 PCNA 抗体（PC10，目录号 13-3900）孵育并使用 Aluora 647 山羊抗小鼠 HRP 试剂盒（目录号 A40001334）标记，显示为红色；与小鼠波形蛋白抗体（V9，目录号 MA5-11883）孵育并使用 Aluora 488 山羊抗小鼠 HRP 试剂盒 (A40001330) 检测，显示为绿色；与 小鼠 SMA 抗体（1A4，目录号 14-9760-82）孵育并使用  Aluora 700 山羊抗小鼠 HRP 试剂盒（目录A40001336）检测，显示为白色，同时使用 DAPI 进行核染色。载玻片用 Prolong Glass  防褪色封片剂封固。使用 Invitrogen EVOS M7000 成像系统拍摄的图像（参见有关 EVOS 成像系统的信息）。

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Aluora 空间组学信号扩增概述

什么是 Aluora 空间扩增？

Aluora 空间扩增试剂盒将高浓度的 Aluora 染料与酶介导的信号扩增相结合，可产生非常明亮的共价结合荧光基团，用于多重 IHC 和空间成像。Aluora 空间扩增试剂盒可增强荧光信号强度，便于在一份组织样品中检测多达8个标靶。这项技术对于空间生物学研究而言非常宝贵，有助于检测和了解空间关系和细胞相互作用。

使用 Aluora 空间扩增技术的基本步骤包括一抗标记、多聚辣根过氧化物酶 (HRP) 二抗检测、通过 Aluora 染料反应沉积荧光基团以及最终剥离抗体复合物，使荧光基团共价标记在组织样本上。

Image of Aluora Spatial Amplification workflow

图1.Aluora 信号扩增标记工作流程。用相关标靶的一抗标记组织，然后与多聚辣根过氧化物酶 (HRP) 二抗一起孵育。然后，Aluora 染料反应将荧光基团共价结合到组织上。然后即可剥离抗体复合物，重复该方法进行多重成像。


Aluora 空间扩增试剂盒和试剂的优势

Invitrogen Aluora 染料可提供更高的亮度和更佳的灵敏度，是空间蛋白质组学应用的绝佳选择。凭借 8 种亮度相似和发射光谱不同的不同荧光基团，可以在光谱成像系统上实现多达8重多重检测，从而实现全面的空间成像。得益于酶介导的信号扩增，这些荧光基团还可出色地检测低丰度标靶，并且需要的一抗量显著减少。相同物种的一抗也可与这些试剂配合使用，在数轮信号扩增之间循环剥离抗体，或与徕卡 BOND 这样的自动玻片染色机结合，简化多重染色工作流程。

  • 增强亮度—使用更明亮的荧光基团提高荧光灵敏度，经优化可用于空间蛋白质组学应用，性能优于其他信号扩增系统，可实现 1:1,000 至 1:50,000 的一抗稀释
  • 增加低丰度标靶检测—得益于 HRP 酶介导的 Aluora 信号增强技术，在背景噪声下亦可实现对极低丰度标靶的卓越检测
  • 无缝兼容仪器—专为 EVOS S1000 空间成像系统和 Akoya PhenoImager 的荧光光谱成像而设计，确保与空间成像系统的无缝集成
  • 扩大多重检测的抗体选择—通过荧光基团的共价结合进行酶介导的标记，可以在数轮信号扩增之间剥离一抗，并支持使用同一宿主物种的一抗，从而扩大多重标记实验的抗体选择

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如何使用 Aluora 空间扩增试剂盒进行空间成像

Aluora 空间扩增试剂包含一组专门设计用于空间成像的8种荧光染料。这些染料支持多达8重的多重检测，其发射光谱可以进行光谱拆分，从而在 EVOS S1000 空间成像系统及其他系统（如 Akoya PhenoImager）上实现多重空间成像。这简化了实验设计和条件测试。此外，Aluora 染料可用于任何配备标准滤光片组的成像系统，但多重检测需要仔细考虑光谱重叠问题。

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Aluora 空间扩增试剂盒的多重扩增

能够使用来自同一宿主物种的多种一抗进行 mIHC，为多重标记开辟了新的可能性。Aluora 空间扩增试剂不仅可以增强低丰度标靶的灵敏度，还可以对组织样品上相同或不同宿主物种的一抗进行多重检测，而无需担心抗体之间的交叉反应。Aluora 空间扩增技术产生高度反应性的酪胺样自由基，该自由基可共价结合并定位 IHC 样本中的抗体染色。在 Aluora 染料信号显影完成后，可从组织中去除一抗和二抗，并进行抗体剥离，而不会降低沉积荧光基团的强度。去除抗体后，可使用相同或不同宿主物种（如兔或小鼠）的一抗重新探测组织，而无需担心交叉反应，随后可进行另一轮 Aluora 空间扩增的检测。为了提高便利性和通量，可在自动玻片染色机（例如徕卡 Bond RX 系统）上执行这些步骤。

图中显示了使用 Aluora 空间扩增的循环染色过程

图2.Aluora 空间扩增循环染色过程的图示。该方法首先需要进行抗原修复，然后阻断非特异性抗原决定簇。然后可以用一抗标记组织，然后用多聚 HRP 二抗试剂进行标记。最后，加入 Invitrogen Aluora 染料，使荧光基团共价结合到组织上。该过程可以对每个一抗重复，从第 1 步开始，其中抗体复合物将被去除。


用于组织染色的多重信号扩增

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Aluora 系列试剂选择指南

Aluora 空间扩增试剂选择指南

 Aluora 430 空间成像试剂Aluora 488 空间成像试剂Aluora 514 空间成像试剂Aluora 555 空间成像试剂Aluora 594 空间成像试剂Aluora 647 空间成像试剂Aluora 700 空间成像试剂Aluora 750 空间成像试剂*
检测荧光信号扩增100倍
激发/发射波长427/499493/518512/529553/567589/615652/670687/706757/783
通道430488514555594647700750
EVOS 滤光片CFPGFPYFPRFPTexas RedCy5Cy5.5Cy7
灵敏度极佳
应用多重染色可实现高达8重的荧光光谱和空间成像应用
自动化与自动玻片染色机（如徕卡 Bond）兼容的多重染色
单独的 Aluora 试剂*AS430HRPAS488HRPAS514HRPAS555HRPAS594HRPAS647HRPAS700HRPAS750HRP
Aluora 山羊抗小鼠 HRP 试剂盒**A40001329A40001330A40001331A40001332A40001333A40001334A40001335A40001336
Aluora 山羊抗兔 HRP 试剂盒**A40001337A40001338A40001339A40001340A40001341A40001342A40001343A40001344
Aluora 链霉素亲和素 HRP 试剂盒**A40001345A40001346A40001347A40001348A40001349A40001350A40001351A40001352
Aluora 空间成像彩虹试剂盒A40002450

* Aluora 750 空间试剂接近红外 (IR) 酪胺样试剂，只需一步即可共价结合到组织。酶灭活和抗体剥离可立即用于后续的信号扩增反应，相较于空间生物学领域的其他近红外信号扩增试剂具有优势。

** Aluora 空间扩增试剂盒包含进行检测分析所需的所有组件。可通过购买其他 Aluora 空间试剂进行多重实验。


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数据图集

Aluora 空间扩增实验的数据图库

荧光显微镜图像

图3.用 Aluora 空间成像彩虹试剂盒和 DAPI 染色的浸润性导管癌组织。用 Aluora 空间成像彩虹试剂盒处理和染色的人浸润性乳腺导管癌组织（目录号 A40002450）。复合图像带放大插图。在 EVOS S1000 空间成像系统上进行图像和光谱拆分。

 

9色荧光显微镜图像

图4.使用8重 Aluora 空间扩增测定和 DAPI 染色的浸润性导管癌组织，展示在单独的图块中。用 Aluora 空间成像彩虹试剂盒处理和染色的人浸润性乳腺导管癌组织（目录号 A40002450）。图块代表单独的 Aluora 染料颜色。在 EVOS S1000 空间成像系统上进行图像和光谱拆分。

 

4面板荧光显微图像和分布图

图5.单细胞分割和表型分析揭示了免疫细胞亚群的空间分布。分析人浸润性乳腺导管癌组织，可识别单细胞标靶表达和免疫细胞亚群的特异性定位。(A) 使用 Aluora 空间成像彩虹试剂盒（目录号 A40002450）生成的复合图像。(B) 组织分割，识别阳性和阴性区域。(C) 分析的 0.7 mm2 区域包含 10,454 个细胞，白色细胞段表示双阳性增殖&免疫细胞表型。(D) 识别区域特异性细胞的定位。在 Indica Labs HALO（版本 4.0.5107.318）软件上进行多重免疫荧光拼接图像的分析。

9重 Aluora 空间扩增标记在人浸润性导管癌中的应用图像

图6.  使用8重 Aluora 空间扩增测定和 DAPI 染色的浸润性导管癌组织。用 Aluora 空间扩增8重测定处理和染色的人浸润性乳腺导管癌组织左侧显示复合图像，右侧显示各个解混通道。在 EVOS S1000 空间成像系统上进行图像和光谱解混。
 

灵敏度研究的结果

图7.Aluora 594 空间染料显示出优于竞品 O 和二抗等效物的信号，且所需的一抗浓度更低。将人福尔马林固定后石蜡包埋 (FFPE) 小肠组织与 1:10,000 稀释的 增殖细胞核抗原 (PCNA) 单克隆抗体 (PC10)（目录号 13-3900）孵育后，分别使用 Alexa Fluor 594 二抗（目录号 A-11014）、Aluora 594 山羊抗小鼠 HRP 试剂盒（目录号 A40001331）或竞品 1 的荧光基团等效物进行标记。对 N=5 张图像的信号背景比进行分析，P < 0.0001。使用 Invitrogen EVOS S1000 空间成像系统拍摄的图像。

 

9重 Aluora 空间扩增标记在人浸润性导管癌中的应用图像

图8.人 FFPE 小肠中的 Aluora 空间扩增试剂。将人 FFPE 小肠与小鼠 PCNA 抗体（PC10，目录号 13-3900）孵育并使用 Aluora 430 山羊抗小鼠 HRP 试剂盒（目录号 A40001329）标记，显示为绿色；与小鼠波形蛋白抗体（V9，目录号 MA5-11883）孵育并使用 Aluora 594 山羊抗小鼠 HRP 试剂盒 （目录号 A40001333）标记，显示为红色；与 小鼠平滑肌 (SMA) 抗体（1A4，目录号 14-9760-82）孵育并使用 Aluora 700 山羊抗小鼠 HRP 试剂盒（目录号 A40001336）标记，显示为白色，同时使用 DAPI 进行核染色。载玻片用 Prolong Glass  防褪色封片剂封固。使用 Invitrogen EVOS M7000 成像系统拍摄的图像（参见有关 EVOS 成像系统的信息）。

9重 Aluora 空间扩增标记在人浸润性导管癌中的应用图像

图9.人 FFPE 小肠中的 Aluora 空间扩增试剂。将人 FFPE 小肠与 小鼠 PCNA 抗体（PC10，目录号 13-3900）孵育并使用 Aluora 647 山羊抗小鼠 HRP 试剂盒（目录号 A40001334）标记，显示为红色；与小鼠波形蛋白抗体（V9，目录号 MA5-11883）孵育并使用 Aluora 488 山羊抗小鼠 HRP 试剂盒 (A40001330) 检测，显示为绿色；与 小鼠 SMA 抗体（1A4，目录号 14-9760-82）孵育并使用  Aluora 700 山羊抗小鼠 HRP 试剂盒（目录A40001336）检测，显示为白色，同时使用 DAPI 进行核染色。载玻片用 Prolong Glass  防褪色封片剂封固。使用 Invitrogen EVOS M7000 成像系统拍摄的图像（参见有关 EVOS 成像系统的信息）。

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抗小鼠 Aluora 空间扩增试剂盒
抗兔 Aluora 空间扩增试剂盒
链霉亲和素 Aluora 空间扩增试剂盒
Aluora 核心试剂和多聚 HRP 二抗

网络讲座：高通量空间蛋白质组学工作流程

空间蛋白质组学工作流程的进展，以酶激活空间扩增试剂为特色，彻底改变了癌症研究的能力。本网络讲座将解释多种技术，这些技术允许同时检测组织中多达8种生物标志物，从而推动乳腺癌样本的多维分析，以及深入了解肿瘤微环境中复杂的细胞相互作用和表型。
 

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仅供科研使用，不可用于诊断目的。

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