什么是 ViewRNA ISH 检测?

Invitrogen ViewRNA ISH 细胞和组织检测结合了分支 DNA (bDNA) 扩增技术,以单分子灵敏度可视化 RNA。bDNA 使用专有的探针对设计和信号扩增技术,为 RNA 定位提供独特、稳健且灵敏的原位杂交检测。

ViewRNA ISH 检测概述

ViewRNA ISH 检测选择指南

用下表查找适合您研究需求的 ViewRNA ISH 检测。

 ISH 细胞检测ISH 细胞+ 检测ISH 组织比色检测ISH 组织荧光检测
用途
  • 在单细胞分辨率下检测单个 RNA 分子,并以单个 RNA 的检测限进行基因表达定量。
  • 通过荧光原位杂交可视化 RNA(细胞检测)或 RNA 和蛋白质(细胞+ 检测)
  • 检测 micro-RNA、环状 RNA、外显子连接/剪接变体、基因融合、基因敲除、miRNA 前体、基因编辑/CRISPR、CAR-T 细胞验证和检测
  • 在单细胞分辨率下检测单个 RNA 分子,无需使用抗体即可进行基因表达定量
  • 针对多种形式的复杂组织结构进行了优化
  • 检测 micro-RNA、环状 RNA、外显子连接/剪接变体、基因融合、基因敲除、miRNA 前体、基因编辑/CRISPR、CAR-T 细胞验证和检测
差异针对培养细胞或循环肿瘤细胞 (CTC) 进行了优化与通过免疫细胞化学技术进行的多重 mRNA 检测(免疫染色)兼容

针对固定组织切片进行了优化。

使用比色可视化方法通过免疫组织化学技术进行多重 mRNA 检测。

可同时检测多达 3 个 RNA 靶标。

针对固定组织切片进行了优化。

使用荧光成像方法通过免疫组织化学技术进行多重 mRNA 检测。

可同时检测多达 4 个 RNA 靶标。

样品类型经过优化,可用于培养细胞的 mRNA 检测经过优化,可用于以下标本:
  • 福尔马林固定后石蜡包埋 (FFPE) 组织
  • 冷冻保存组织
兼容的样品类型
  • 封固在载玻片上的盖玻片
  • 兼容 96 孔
  • 提供适用于 384 孔板的高内涵试剂盒
  • 封固在载玻片上的盖玻片
  • 兼容 96 孔
  • 兼容 ICC/IF(1 至 2 种蛋白质)
  • 置于载玻片上的组织切片
不兼容不兼容 ICC/IHC不兼容 384 孔板未经过 ICC/IHC 验证
参数数量和检测通道选项

1 至 4 种 RNA

  • Alexa Fluor 488
  • Alexa Fluor 546
  • Alexa Fluor 647
  • Alexa Fluor 750

1 至 4 种 RNA 和一个或多个蛋白质靶标,或 RNA 和蛋白质的任何组合,前提是使用不同的荧光检测通道

  • Alexa Fluor 488
  • Alexa Fluor 546
  • Alexa Fluor 647
  • Alexa Fluor 750

比色:多达 3 个靶点

固红和固蓝底物也分别与传统 TRITC/RFP 和 CY5.5/CY7 滤光片组兼容,可进行荧光检测。

多达 4 靶点

  • Alexa Fluor 488
  • Alexa Fluor 546/594(1 型)
  • Alexa Fluor 647
  • Alexa Fluor 750
所需仪器
  • 杂交炉
  • 荧光显微镜/扫描仪
  • 杂交炉
  • 明场或荧光显微镜/扫描仪
  • 杂交炉
  • 荧光显微镜/扫描仪

ViewRNA ISH 探针对类型

ViewRNA 检测需要使用探针对,必须单独购买。每个探针对类型都特定于检测标记和明场/荧光读数。对于多重检测实验,每份样品必须避免使用一个以上相同的探针集类型。请使用下表确定您的实验需要哪种探针对类型。

探针对靶标 RNA 表达水平检测标记荧光读数
1Alexa Fluor 546TRITC/RFP
4Alexa Fluor 488FITC/GFP
6Alexa Fluor 647深红色/Cy5
10丰富Alexa Fluor 750近红外/Cy7
探针对靶标 RNA 表达水平检测标记比色读数荧光读数
1固红红色TRITC/RFP
4DAB棕色不适用
6固蓝蓝色Cy5.5 或 Cy7
探针对靶标 RNA 表达水平检测标记荧光通道
1Alexa Fluor 594Texas Red
1Alexa Fluor 546TRITC/RFP
4Alexa Fluor 488FITC/GFP
6Alexa Fluor 647深红色/Cy5
10丰富Alexa Fluor 750近红外/Cy7
探针对靶标 RNA 表达水平检测标记荧光读数
1Alexa Fluor 546TRITC/RFP
4Alexa Fluor 488FITC/GFP
6Alexa Fluor 647深红色/Cy5
10丰富Alexa Fluor 750近红外/Cy7
探针对靶标 RNA 表达水平检测标记比色读数荧光读数
1固红红色TRITC/RFP
4DAB棕色不适用
6固蓝蓝色Cy5.5 或 Cy7
探针对靶标 RNA 表达水平检测标记荧光通道
1Alexa Fluor 594Texas Red
1Alexa Fluor 546TRITC/RFP
4Alexa Fluor 488FITC/GFP
6Alexa Fluor 647深红色/Cy5
10丰富Alexa Fluor 750近红外/Cy7

ISH 组织比色检测工作流程

Infographic of ViewRNA ISH Tissue Assay Workflow

图 1A.ViewRNA ISH 检测。基于分支 DNA 信号扩增技术的 ViewRNA ISH 组织检测可用于同时测量 3 个靶标,并具有在单细胞中测定单个 mRNA 分子的灵敏度和耐用性。
 

ISH 细胞和组织荧光检测工作流程

ViewRNA Fluorescent Cell and Tissue Assay Workflow graphic

图 1B.ViewRNA FISH 检测。基于分支 DNA 信号扩增技术的 ViewRNA 荧光检测可用于同时测量 4 个靶标,并具有在单细胞中测定单个 mRNA 分子的灵敏度和耐用性。

ViewRNA ISH 细胞检测

ViewRNA ISH Cell 和 Cell Plus 可实现:

  • 通过荧光原位杂交可视化 RNA(ISH 细胞检测)或同时可视化 RNA 和蛋白质(细胞+ 检测)
  • 无需 RNA 分离、逆转录或 PCR 扩增即可实现单个 mRNA 分子检测
  • 使用其他技术无法轻松定位的靶标可视化

订购 ViewRNA ISH 细胞检测

选择 ViewRNA ISH 细胞检测试剂盒
选择兼容的探针对

搜索可用(有库存)的探针对

定制分支 DNA 探针对工具

没有找到您所需的内容?如果在我们的网页目录中找不到您的感兴趣靶基因,请使用定制工具订购适用于 PrimeFlow、QuantiGene Singleplex 和 ViewRNA 细胞和组织检测的自定义分支 DNA 探针对。

自定义 bDNA 探针对订购工具

选择 ViewRNA 细胞检测对照品

阳性对照:对于 ViewRNA 细胞检测,管家基因(如 ACTB、GAPD、PPIB 或 UBC 探针对)通常用作阳性对照。对于 micro-RNA 实验,Let7a 探针对适用于许多样品。

阴性对照:应在每项实验中使用阴性对照,以帮助确保正确评估特异性与非特异性结合。强烈建议使用省略靶标特异性探针的样品,或者用针对目标细胞中未表达的靶标的探针标记的样品。

采用相应物种的探针搜索工具,搜索用于阳性和阴性对照的探针。请注意 ViewRNA 探针具有极高的特异性,一个物种的探针对通常不能检测其他物种的靶标。

ViewRNA ISH 组织检测

ViewRNA ISH 组织检测可实现:

  • 在组织切片中进行稳健的单 mRNA 分子检测
  • 可同时对多达四种 mRNA、micro-RNA 或其他非编码 RNA 进行准确、特异性检测
  • 可在保留组织形态的同时,直接空间可视化复杂组织架构中的 RNA
  • 消除与 miRNA、RNA 或 DNA 纯化、cDNA 合成和 PCR 扩增相关的不必要步骤和偏倚

订购 ViewRNA ISH 组织检测

选择 ViewRNA ISH 组织检测试剂盒
试剂盒探针对类型货号规格
ViewRNA 组织检测核心试剂盒1,4,6QVT040024 张玻片
ViewRNA 组织检测固红模块1QVT041024 张玻片
ViewRNA 组织检测固蓝模块6QVT042024 张玻片

ViewRNA 组织检测 DAB 模块

4QVT043024 张玻片
为了增加 RNA 多重检测能力,ViewRNA 组织检测核心试剂盒可与 ViewRNA 组织检测模块结合使用
ViewRNA 固红单通路检测试剂盒1,6QVT0410C24 张玻片
QVT4410C96 次检测
ViewRNA 固蓝单通路检测试剂盒1,6QVT0420C24 张玻片
QVT4420C96 次检测
ViewRNA DAB 单通路检测试剂盒4QVT0430C24 张玻片
QVT4430C96 次检测
ViewRNA 红色‑蓝色 2 通路检测试剂盒1,6QVT0412C24 张玻片
QVT4412C96 次检测
ViewRNA 红色‑棕色 2 通路检测试剂盒1,4,6QVT0422C24 张玻片
QVT4422C96 次检测
ViewRNA 蓝色‑棕色 2 通路检测试剂盒1,4,6QVT0433C24 张玻片
QVT4433C96 次检测
试剂盒探针对类型货号规格
ViewRNA 组织荧光 4 通路检测核心试剂盒,含(Alexa Fluor 488,Alexa Fluor 546,Alexa Fluor 647,Alexa Fluor 750)1,4,6,10QVT070024 张玻片
QVT470096 张玻片
ViewRNA 组织荧光 4 通路检测核心试剂盒,含(Alexa Fluor 488,Alexa Fluor 594,Alexa Fluor 647,Alexa Fluor 750)1,4,6,10QVT080024 张玻片
QVT480096 张玻片
ViewRNA 组织荧光单通路检测核心试剂盒,含 Alexa Fluor 647(6 型)标记探针6QVT0600C24 张玻片
QVT4600C96 张玻片
为了增加 RNA 多重检测能力,ViewRNA 组织荧光检测模块可与 ViewRNA 组织荧光单通路检测核心试剂盒和 Alexa Fluor 647(6 型)标记探针试剂盒结合使用
ViewRNA 组织 Alexa Fluor 488 (4型) 模块4QVT0688B24 张玻片
QVT4688B96 张玻片
ViewRNA 组织 Alexa Fluor 546(1 型)模块1QVT0646B24 张玻片
QVT4646B96 张玻片
ViewRNA 组织 Alexa Fluor 594(1 型)模块1QVT0694B24 张玻片
QVT4694B96 张玻片
ViewRNA 组织 Alexa Fluor 750(10 型)模块10QVT0640B24 张玻片
QVT4640B96 张玻片
选择 ViewRNA 组织 Alexa Fluor 546(1 型)模块或 ViewRNA 组织 Alexa Fluor 594(1 型)模块。这两种都使用 1 型探针,彼此不兼容。
选择兼容的探针对

对于比色检测试剂盒,请在下面的搜索工具中使用“ViewRNA 细胞”过滤器查找探针对。

搜索可用(有库存)的探针对

自定义分支 DNA 探针对工具

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自定义 bDNA 探针对订购工具

选择 ViewRNA 组织检测对照品

应在每项实验中使用阳性对照探针对以确保正确的性能。对于 ViewRNA 组织检测,可采用以下试剂盒之一作为阳性对照:

ViewRNA 组织阳性对照试剂盒(2 通路)(4 个大鼠肾脏载玻片 + 探针)
ViewRNA 组织阳性对照试剂盒(单通路)(4 个大鼠肾脏载玻片 + 探针)

应在每项实验中使用阴性对照,以帮助确保正确评估特异性与非特异性结合。强烈建议使用省略靶标特异性探针的样品,或者用针对目标细胞中未表达的靶标的探针标记的样品。

采用相应物种的探针搜索工具,搜索用于阳性和阴性对照的探针。请注意 ViewRNA 探针具有极高的特异性,一个物种的探针对通常不能检测其他物种的靶标。

ViewRNA ISH 检测图像库

Identification of breast cancer CTCs using the ViewRNA ISH Cell Assay

图1.采用 ViewRNA ISH 细胞检测鉴别人骨髓中的乳腺癌循环肿瘤细胞 (CTC)。使用 ViewRNA ISH 细胞检测(用于 ERBB2 [绿色]、泛角蛋白系列 [细胞角蛋白 8、18 和 19][黄色] 和 BACTEC [紫色])固定和分析来自骨髓样品的推定乳腺癌肿瘤细胞。该技术只用于鉴别玻片上的两种此类 CTC。数据承蒙挪威奥斯陆的 Radium 医院提供。

HeLa

Visualization and quantitation of transcript heterogeneity in cell lines using the ViewRNA ISH Cell Assay

SKBR3

Visualization and quantitation of transcript heterogeneity in cell lines using the ViewRNA ISH Cell Assay

图2.使用 ViewRNA ISH 细胞检测对细胞系中转录本异质性进行可视化和定量。HeLa 细胞和 SKBR3 细胞中 Her2 mRNA(绿色)和对照 18S rRNA(红色)的多重分析。细胞核用 DAPI(蓝色)染色,并通过荧光显微镜观察。
 

Time course of gene expression at the single-cell level using the ViewRNA ISH Cell Assay

图3.使用 ViewRNA ISH 细胞检测在单细胞水平上观察细胞因子诱导后的基因表达时程。用 PMA 处理 HeLa 细胞 0-8 小时。然后用 ViewRNA ISH 细胞检测固定和分析细胞,可视化诱导的 IL-6(红色)和 IL-8 表达(绿色)。细胞核使用 DAPI(蓝色)染色。结果显示,IL-6 在 1-2 小时后出现诱导后峰,IL-8 在 4 小时后出现诱导后峰。此外,该检测揭示了单个细胞反应的异质性。

Detection of H1N1 influenza A RNA in cells using the ViewRNA ISH Cell Assay

图4.使用 ViewRNA ISH 细胞检测对细胞中的 H1N1 甲型流感病毒 RNA 迁移进行检测。病毒 RNA 核易位是流感病毒复制所必需的步骤。将小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 与甲型流感病毒(H1N1,PR8 毒株)一同在冰上孵育。在时间零点,移除病毒,并添加培养基(加热到 37°C)。在加热后的指定时间点,使用 ViewRNA ISH 细胞检测试剂盒和针对核蛋白 (NP) 病毒基因组片段的探针对(绿色)固定和处理细胞。细胞核用 DAPI 染为蓝色。感染后 90 min 即可看到 NP 基因组的时间依赖性核转位,180 min 还观察到将新合成的病毒基因组从细胞核导出到细胞溶质。数据承蒙麻省理工学院和哈佛大学 MGH 研究所 Abraham L Brass 博士提供。

Multiplexing of viral RNA and mRNA in Huh7 cells using View RNA Assays

图 5.Huh7 细胞中病毒 RNA 和 mRNA 多重检测。对不含 (–HCV) 或含 (+HCV) 丙型肝炎病毒 (HCV) 复制子的 Huh7 细胞中的 HCV 基因组病毒 RNA(绿色)和 18S rRNA(红色)进行多重荧光原位检测。细胞核使用 DAPI(蓝色)染色。

Multiplex analysis of miRNA and mRNA expression levels using the ViewRNA Cell Assay.

图 6.使用 ViewRNA 细胞检测对各种表达水平的 miRNA 和 mRNA 进行多重分析。同时检测任何给定细胞中的 miRNA(固红底物,Cy3/550 通道)和 mRNA(FITC 通道或 Cy7 通道)表达。双通路检测,显示 HeLa 细胞中不同 miRNA 和 mRNA 靶标的表达。在 FITC 通道中检测到 HPRT、ACTB 和 PPIB,在 Cy7 通道中检测到 GAPD。基于已知的表达水平,数据确认了对各种表达水平的 miRNA 和 mRNA 的准确、精确的研究和可视化,其中一个不同的斑点对应于 miRNA 或 mRNA 靶标的一个分子。

化合物剂量-反应分析

Visualization and quantitation of cultured cells using the ViewRNA Cell Assay for high-content screening

图7.使用高内涵筛选 ViewRNA 细胞检测,对培养细胞的诱导进行可视化和定量。HeLa 细胞在 384 孔透明底板中培养,并用各种浓度的 PMA 处理。经过 4 小时 PMA 处理后,固定细胞并分析 IL-8 表达(绿色)。细胞核使用 DAPI(蓝色)染色。

使用多个标记物进行化合物筛选

Multiplex analysis of compound screens using the ViewRNA Cell Assay for high-content screening

图8.使用高内涵筛选 ViewRNA 细胞检测对化合物筛选进行多重分析。图片分别显示了细胞核和 RNA 靶标:gene 1,gene 2 和 gene 3。合并后的图像显示同时检测三个 RNA 靶标。细胞核使用 DAPI(蓝色)染色。数据承蒙 Proteostasis, Inc. 的 Dan Garza 博士提供

其他产品和服务

仅供科研使用,不可用于诊断目的。

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