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PrimeFlow RNA利用流式细胞术检测RNA
流式细胞术检测RNA靶标
PrimeFlow™ RNA浓度定量测定采用新型RNA原位杂交技术，结合了bDNA专利技术，实现了利用流式细胞术进行RNA测定的表达。使用4种不同荧光染料的标记探针进行胞内的RNA原位杂交，同时兼容表面蛋白抗体染色，研究人员现可在单细胞解析度下，同时进行RNA测定及蛋白表达。
PrimeFlow RNA检测原理
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- 基因特异性寡核苷酸靶标探针组结合靶标RNA序列
- 信号预放大探针和多个放大探针分子先后与靶标RNA结合，进行信号扩增
- 结合上荧光染料的标记探针，通过流式细胞仪可以检测到多达4种RNA靶标。
订购信息
遵照如下五个步骤开始您的PrimeFlow RNA浓度定量测定
| 仪器 | 规格 |
|---|---|
| 流式细胞仪 | 激光：
滤光片组：
|
| 培养箱 | Capable of maintaining temperature at 40 ±1°C |
| 金属热模块 | 适用于1.5 mL微离心管，放在温度经验证的培养箱内 |
| 温度验证仪 | InvitrogenViewRNA温度验证仪采用经过校准的温度计确认培养箱温度 |
可选：您的靶标是microRNA？ 此缓冲液可助您确保获得更高的miRNA信号及灵敏度。
可选：此检测采用96孔板进行实验？
- 目前有四种类型的探针组可用于RNA测定
- 根据RNA表达水平选择不同的探针类型
- 对细胞表面和细胞内蛋白进行免疫多色分析时，可查找结合荧光染料的抗体
| 靶标RNA表达水平 | 荧光标记 | 激光激发波长 (nm) | 带通滤波器 (nm) | 荧光通道 | 探针集类型 |
|---|---|---|---|---|---|
| 低 | Alexa Fluor 647 | 633, 635 | 660/20 | APC, Alexa Fluor 647, eFluor 660 | Type 1 |
| Low | Alexa Fluor 568 | 561 | 610/20 | PE-eFluor 610, Alexa Fluor 568, PE-Texas Red | Type 10 |
| Medium-to-high | Alexa Fluor 488 | 488 | 530/30 | FITC, Alexa Fluor 488 | Type 4 |
| Medium-to-high | Alexa Fluor 750 | 633, 635 | 780/60 | APC-Cy7, APC-eFluor 780, Alexa Fluor 750 | Type 6 |
- 阳性对照—每次实验均使用阳性对照探针，确保正常的实验性能：RPL13a（用于人类白细胞）和β-激动蛋白 (ACTB)（用于小鼠组织）；对于特殊细胞类型和其他建议的基因，请参阅PrimeFlow RNA检测试剂盒产品手册附录 5
- 阴性对照—如无靶标特异性探针的样品，采用靶向目标细胞不表达的靶标的探针标记的样品（例如，细菌基因dapB）；高度推荐采用
采用第4步中的探针搜索工具，搜索用于阳性和阴性对照的探针。
你需要SARS-CoV-2探针吗？
使用上面的分步订购信息来订购您的试剂盒和探针，包括对照品。在第4步中，如果您需要SARS-CoV-2探针，请参见下表，并按照所提供的“如何订购SARS-CoV-2探针”说明进行操作。
| Dye | Type | Scale | Cat. No. | Assay ID |
|---|---|---|---|---|
| AF647 | 1 | 40 assays | CPF-204 | VPNKRHH |
| AF647 | 1 | 100 assays | CPF-210 | VPNKRHH |
| AF488 | 4 | 40 assays | CPF-204 | VP9HHYZ |
| AF488 | 4 | 100 assays | CPF-210 | VP9HHYZ |
| AF750 | 6 | 40 assays | CPF-204 | VPAAADR |
| AF750 | 6 | 100 assays | CPF-210 | VPAAADR |
| AF568 | 10 | 40 assays | CPF-204 | VPCE3XN |
| AF568 | 10 | 100 assays | CPF-210 | VPCE3XN |
PrimeFlow探针组是使用NCBI菌株和登录号LC521925的序列设计的，涵盖了病毒转录本的多个区域。在下面的表格中找到检测中包含的探针组的结合点和转录本区域。如果你需要为特定的RNA区域设计一个定制探针，请使用定制分支DNA探针组工具。
| Position (5' to 3') | Region | |
|---|---|---|
| 1 | 705-1676 | orf1ab |
| 2 | 4356-5607 | orf1ab |
| 3 | 12808-13942 | orf1ab |
| 4 | 20571-21759 | orf1ab |
| 5 | 26646-27763 | M |
| 6 | 28212-29152 | ORF8 and N |
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