Immunophenotyping Kits for Flow Cytometry

使用优化的流式细胞仪测定检测免疫细胞

Invitrogen eBioscience 基本表型试剂盒是一种高效且具有成本效益的流式细胞仪测定。这些即用型试剂盒旨在可靠地鉴定人血中的 T 细胞亚群,包括 CD4+、CD8+ 和调节性 T 细胞 (Treg)。

  • 不受仪器限制—抗体、方案和门控策略与配备紫色 405 nm、蓝色 488 nm 和红色 633 nm 激光的任何流式细胞仪仪器兼容
  • 综合分析策略—提供标准化的数据采集和分析计划以进行流式细胞仪分析表征
  • 优化的抗体和试剂浓度—检测组合包含较佳的抗体和染料组合,可较大限度提高多色荧光实验的灵敏度

需要与众不同的东西?您可以与我们的技术专家合作以轻松集成或设计定制的检测组合

工作流程

Optimized flow cytometry assays workflow 1

第1步

  • 刺激外周血单个核细胞 (PBMC)、裂解全血样品或人组织的单细胞混悬液中的细胞以进行蛋白表达。此步骤仅适用于 eBioscience 基本人 Th1/Th17 表型试剂盒。
Optimized flow cytometry assays workflow 2

第2步

  • 使用试剂盒中包含的缓冲液套装实现较佳的细胞内染色。
  • 添加 LIVE/DEAD 试剂以剔除碎片和失真。
  • 添加抗细胞表面和细胞内标记物的标记抗体以便进行细胞鉴定和功能性表征。
Optimized flow cytometry assays workflow 3

第3步

  • 使用仪器和补偿微球设置流式细胞仪以获得较佳的细胞群测定结果。

图1.T 细胞亚群工作流程概述。无需全面的检测组合设计。您只需按照方案生成数据。设门策略可提供相关指导,帮助您在采集事件时找到正确的细胞群。结果将显示指定标记物的 T 细胞阳性或阴性百分比。

T 细胞免疫表型试剂盒

Antibody Flow Validated Panels

经验证的抗体流式检测组合

T 细胞
CD3:APC-eF780
CD4:APC
CD8:eF450
CD62L:FITC
CCR7:PE

Treg
CD4:FITC
CD25:PerCP-eF710
CD127:PE
Foxp3:eF450

Th1/Th17
CD4:FITC
IL-17:APC
IFN-γ:PE

图2.根据其介导的特定免疫反应,T 细胞可分为亚群组。CD8+ T 细胞通过穿孔素和颗粒酶直接杀死感染的细胞或肿瘤细胞。CD4+ 细胞通过适应性免疫反应调节其他免疫细胞。CD4+ 细胞可通过刺激分化成多种细胞群:例如,产生的 Th1 细胞影响巨噬细胞和 B 细胞并,而产生的 Th17 细胞分泌细胞因子和炎症反应的其他因子。Treg 群组抑制或下调免疫反应。

分析 eBioscience 表型试剂盒所需的仪器规格

要在这些试剂盒内运行检测组合,需要仪器采用具有灵活滤光片配置的 2-3 激光系统。以下是大多数传统流式细胞仪可实现的仪器配置示例。

仪器规格
流式细胞仪

激光:
紫激光(405 nm)
蓝激光(488nm)
红激色 (633 nm)

滤光片组:
eFluor 450 Pac Blue:440/50 nm
eFluor 506:510/50
PerCP-eFluor 710:710/50(695/40 可接受)
FITC:530/20
PE:574/26
APC:660/20

表1.运行 eBioscience 基本表型试剂盒所需的仪器规格示例。

T 细胞免疫表型数据

A.

B.

C.

图3.从两款流式细胞仪获得的数据示例。从 PBMC 中分离 T 细胞,然后立即冷冻。刺激解冻的 T 细胞并根据方案在所有 3 种 eBioscience 表型试剂盒上染色。然后,由2名不同用户在 Invitrogen Attune NxT 流式细胞仪和 LSRII Fortessa 流式分析仪上检测细胞。通常,为设门和数据分析采集50,000个事件。从两台仪器中将数据导出为 FCS 文件并使用 FlowJo 软件分析。红色框表示感兴趣细胞群。(A) eBioscience 基本人 T 细胞表型试剂盒 (B) eBioscience 基本人 Treg 表型试剂盒 (C) eBioscience 基本人 Th1/Th17 表型试剂盒。

分析 eBioscience 表型试剂盒所需的仪器规格

要在这些试剂盒内运行检测组合,需要仪器采用具有灵活滤光片配置的 2-3 激光系统。以下是大多数传统流式细胞仪可实现的仪器配置示例。

仪器规格
流式细胞仪

激光:
紫激光(405 nm)
蓝激光(488nm)
红激色 (633 nm)

滤光片组:
eFluor 450 Pac Blue:440/50 nm
eFluor 506:510/50
PerCP-eFluor 710:710/50(695/40 可接受)
FITC:530/20
PE:574/26
APC:660/20

表1.运行 eBioscience 基本表型试剂盒所需的仪器规格示例。

T 细胞免疫表型数据

A.

B.

C.

图3.从两款流式细胞仪获得的数据示例。从 PBMC 中分离 T 细胞,然后立即冷冻。刺激解冻的 T 细胞并根据方案在所有 3 种 eBioscience 表型试剂盒上染色。然后,由2名不同用户在 Invitrogen Attune NxT 流式细胞仪和 LSRII Fortessa 流式分析仪上检测细胞。通常,为设门和数据分析采集50,000个事件。从两台仪器中将数据导出为 FCS 文件并使用 FlowJo 软件分析。红色框表示感兴趣细胞群。(A) eBioscience 基本人 T 细胞表型试剂盒 (B) eBioscience 基本人 Treg 表型试剂盒 (C) eBioscience 基本人 Th1/Th17 表型试剂盒。

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