超高分辨率显微镜检查

STORM 是应用最广泛的 SRM 方法，使用光开关荧光基团的顺序激活和时间分辨定位来生成高分辨率图像。要获得高品质多色图像，需要使用直接标记、蛋白偶联物或抗体染色进行特异性标记。理想的 STORM 荧光基团应非常明亮并且具有较高的光开关循环速度。它们还应尽可能避免在含巯基的缓冲液中发生光漂白。使用适当的染料和缓冲液组合，优化的 STORM 系统可以生成分辨率为 5 nm 的图像。大量出版物展示了联合使用具有各种靶向和标记特异性的 Molecular Probes® 染料生成多重 STORM 图像。

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结构光照明用于提高空间分辨率，包括用带图案的光照亮样品并使用软件分析正常观察范围之外的莫尔条纹中的信息。重建软件以比衍射极限高约2倍或 ~100 nm 的分辨率来解读图像。与其他 SRM 方法相比，SIM 更具优势，因其可用于较厚切片的成像、3D 成像和活细胞成像。明亮且光稳定的染料以及精确的靶向定位可提高图像质量。除了与有机染料和 Qdot® 探针搭配进行多重检测外，荧光蛋白还常用于活细胞 SIM 研究。

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STED 显微镜检查使用两个激光脉冲来定位每个焦点上的荧光。第一个脉冲用于将荧光基团激发至荧光状态，第二个脉冲是经改良的光束，用于对激发焦点周围的所有荧光基团进行去激发。在整个样品上对焦点进行光栅扫描以生成图像，因此对于大视野采集速度相对较慢。该技术的一个主要优势是景深大（深达 10–15 µm），能够以高分辨率成像。

如果使用合适的染料，x 和 y 分辨率可以达到 30 nm，z 分辨率与传统共聚焦显微镜检查相当。要在 STED 中实现最佳性能，荧光基团属性应与仪器系统的激发和消耗光束波长匹配。大量出版物展示了在 STED 显微镜检查中使用 Molecular Probes® 染料。

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TPE 是一种利用多光子吸收对活体样本进行成像的光学过程，这种技术比传统的共焦显微镜检查的光毒性更低。双光子显微镜使用红外激发光进一步穿透到组织中，与在较长波长下激发相比，散射极小。对于荧光基团的每次激发，红外光的两个光子被吸收，激发仅限于微小的焦点体积，因此离焦荧光的影响较小。

双光子成像已应用于多种活细胞应用，包括离子浓度、细胞骨架组织、活性氧检测和囊泡再循环成像。出版物显示了在所有这些应用中使用的 Molecular Probes® 试剂，并提供了探针选择指南。

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