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使用高效、快速、简单、灵活的紧凑型电转染系统,节省宝贵的研究时间,并保护珍贵的样本。Invitrogen Neon NxT 电转染系统采用专有移液器吸头技术,再结合经过简化的工作流程和灵活操作,有助于减少样本损失,降低污染风险,减少操作步骤,让您全方位管控各种实验。
Invitrogen TransfectionLab 是一款云端 APP,可以通过Thermo Fisher Connect平台进行访问,能够根据每个电转实验,从设计阶段开始量身定制分步指南。 您可以远程设置多达 384 个样本的多个孔板布局,通过已经连接网络的 Neon NxT 系统,您可以直接访问 APP 中保存的任何方案或孔板布局。
Neon NxT 大学实验室的合作伙伴推荐视频
在这段视频中,大学实验室合作伙伴的教育项目经理 Samantha Renusch 分享了她使用 Neon NxT 电转染系统的经验。
如何使用 Invitrogen Neon NxT 系统移液管
在本视频中,我们将向您展示如何使用带有赛默飞 ClipTip 技术的 Neon NxT 移液器。该视频将向您展示如何安装吸头、注意事项以及必要时如何移除吸头.
如何使用 Neon NxT 系统的分步指南
全面而简短的视频,解释 Neon NxT 电穿孔系统的不同组件和使用方法,包括一些主要优点和功能。
如何设置 Invitrogen Neon NxT 系统
本视频向您展示如何设置 Invitrogen Neon NxT 电穿孔系统。从连接电源线到访问 USB、以太网和 Wi-Fi 端口,本视频将帮助您启动并运行系统。
如何优化 Neon NxT 系统的参数
本视频向您展示在 Neon NxT 电穿孔系统上优化参数的关键步骤。通过了解脉冲电压、脉冲宽度、脉冲数、细胞密度、细胞健康状况和有效载荷特性等因素的重要性,您可以获得最佳性能、转染效率和细胞存活率。
Neon NxT 系统简介
本视频将向您介绍电穿孔的基本原理,并向您说明 Neon NxT 系统为什么是这种方法的理想仪器。您将了解电穿孔这种物理转染方法是如何在细胞膜上形成临时孔隙以允许遗传物质进入的。.
在 Invitrogen Neon NxT 系统上设置实验(并了解两种最常见的错误信息)
该视频演示了如何在 Neon NxT 电穿孔系统上设置平板或单次运行。内容包括协议选择、平板创建、错误排除以及从赛默飞连接上的 TransfectionLab 导入协议。
如何在 Invitrogen Neon NxT 系统上使用 Invitrogen TransfectionLab 应用程序
本视频演示了如何使用 Thermo Fisher Connect 上的 TransfectionLab 应用程序。该应用程序可指导您选择细胞系、电穿孔参数、有效载荷和细胞密度,同时生成个性化指南。
比较 Invitrogen Neon 和 Neon NxT 系统
本视频比较了原始 Neon 转染系统和新型 Neon NxT 电穿孔系统。Neon NxT 占地面积更小、用户界面经过改进、反馈功能得到增强,并可连接到 Thermo Fisher Connect 进行实验规划。
Neon NxT 大学实验室合作伙伴推荐视频
在这段视频中,Neon NxT的大学实验室合作伙伴,教育项目经理 Samantha Renusch 分享了她使用 Neon NxT 电转染系统的经验。
Neon NxT 电转染系统是一款电转仪,在极难转染的细胞(包括免疫细胞、原代细胞和干细胞)中实现高达 90% 的转染和基因编辑效率。150 多个细胞株已在经过优化的即用条件下进行了转染效率和细胞存活率测试。
搜索转染方案和引用数据库,查看适用于不同细胞株的最佳电转染方案。
图1.Neon NxT 电转染系统可提供不同细胞类型的卓越的转染效率和转染后细胞活力。 在10 μL 或 100 μL 电转染反应中的 GFP 质粒 DNA 转染细胞。转染效率为 GFP 阳性细胞的百分比 (n = 3)。转染细胞使用 Invitrogen SYTO Red 死细胞染色剂染色,并通过 Invitrogen ATTUNE NxT 流式细胞仪评估细胞存活率。 报告细胞活力为 3 次测量的平均值。
解决了根据细胞株寻找缓冲液试剂盒的问题。我们使用一个缓冲液试剂盒简化了这一过程,该试剂盒可适配 150 多个哺乳动物细胞株。我们建议使用电压低于 1,900 V 的 Invitrogen Neon NxT 重悬缓冲液 R 和电压较高的 Invitrogen Neon NxT 重悬缓冲液 T。
基因组编辑在追求对人类健康和疾病更深入了解方面具有广阔前景。基因组编辑工作流程中一个关键但极具挑战性的步骤,是将 CRISPR 核糖核蛋白 (RNP) , DNA 和 RNA 分子有效递送至所选细胞系中—也称为转染。如上所述,电转染是应用最广泛的递送方法,即使在处理难转染细胞时也能够实现高转染效率。
与 Neon NxT 电转染系统配合使用时,我们的基因编辑试剂和 Neon NxT 重悬基因组编辑缓冲液可以帮助提高特定有效载荷 (如 CRISPR Cas9) 的基因编辑性能,以便用于包括原代细胞,干细胞和难转染细胞在内的哺乳动物细胞的敲除或敲入实验 (图 2)。
图2.Neon NxT 重悬基因组编辑缓冲液在基于 CRISPR-Cas9 的基因组编辑实验中的性能,可用于不同细胞类型和靶标。靶基因座包括 Jurkat 和 K562 细胞的 ACTN ,活化原代 T 细胞的 TRAC , HSC 的 B2M 和原代 NK 细胞的 AAVS1。在 10 μL 或 100 μ L 反应中进行电转染。(A) 报告的 GFP 质粒 DNA 转染效率为 GFP 阳性细胞的百分比。 (B) GFP 供体 DNA 敲入后的细胞活力。 (C) 敲除结果显示,与未处理的对照相比,特定目标位点的降低百分比更高。(D) 敲除细胞的电转染后存活率。
* 对于原代 NK 细胞,通过基因组切割检测 (GCD) 试验测定的插入缺失效率 (%) ,作为敲除效率。
图 3.与标准电转比色皿相比, Neon NxT 移液器吸头的优势。专有的生物兼容型 (A) Neon NxT 吸头采用经验证的毛细管电转技术,与 (B) 电转比色皿相比具有重要优势。
与标准比色皿电转染腔室不同,Neon NxT 电转染系统使用专有的生物兼容移液器吸头腔,可产生更均匀的电场。这一设计可以更好地维持生理状态,与常规电转染相比,细胞存活率更高。†
使用 Neon NxT 电转染系统,您可以精确控制对实验至关重要的参数,而不会将宝贵的时间浪费在调整不准确的参数上。您可以利用该转染系统修改以下参数:
将 DNA、RNA 或蛋白质递送到多种哺乳动物细胞中,每次反应可灵活转染 1 x 104 至 1 x 107 个细胞。
Neon NxT 电转染系统的工作流程经过简化,易于操作和执行,用户几乎不需要进行培训,提高了结果的一致性和可再现性。
使用该转染系统可轻松完成电转染过程:首先,将细胞和质粒混合物加入 Neon NxT 移液管吸头中。其次, 将移液器放至移液器站,并按下电转键。最后,将转染细胞转移至培养皿中。由于转染在移液器吸头内进行,所以 3 个简单的步骤即可完成转染操作:吸液、电转染、分液。除了简化工作流程,我们的专有电转技术还缩短了整体流程,与传统电转系统相比,Neon NxT电转染系统可显著减少移液步骤。
采用 Neon NxT 8 通道移液器,我们可将灵活性提升至前所未有的水平。8 通道移液器的每个吸头在其分离管内独立运行,能够使用不同的电转染参数,重悬缓冲液,有效载荷甚至是bu细胞类型。此外, Neon NxT 8 通道移液器和工作站可与现有的 Neon NxT 设备配合使用,也可利用相同的 Neon NxT 吸头和缓冲液。无论您是优化条件还是探索多种变量, Neon NxT 8 通道移液器都能提供加速研究并获得更可靠结果所需的多功能性。
使用 Neon NxT 8 通道移液器,每个通道都可以处于不同条件下,您可以在单次实验中高效测试各种参数,极大地提高您的研究通量和精度。这种简化的方法可进行快速而准确的优化,确保实验的高效率和细胞存活率 (图 4)。
图4.Neon NxT 转染程序优化研究。我们评估了 Jurkat 细胞中 11.5 kb GFP 质粒转染的最佳电转程序和重悬缓冲液。每个数据点代表特定电转程序,显示了 GFP 阳性细胞在电转染后 24 小时与活转染细胞总数 (TTC) 的百分比。红色圈突出显示性能最佳的条件,使用 T 缓冲液可实现高达 85% 的转染效率。
使用 Neon NxT 电转染系统的直观用户界面,提前设置整个孔板,而不用“快速启动 (Quick Start)”功能调整不同样本之间的电转参数。在每个样本进行电转染时,可监测屏幕上的进展情况,在 15 分钟内最多可完成 96 个样本的电转染。
样本固然珍贵,但在常规电转比色皿的来往移液过程中难免出现损失。Neon NxT 电转染系统中的电转染工艺流程在移液器吸头内进行,有利于尽量减少样本损失以及细胞遇到的剪切力。
Neon NxT 系统(包括脉冲发生器和移液器工作站)占地面积小,适合大多数生物安全柜 (BSC)。使用该仪器时,样本始终位于无菌区,有利于降低珍贵样本的污染风险。Neon NxT 系统还新增了一项电缆管理功能,确保该仪器可更加适配在 BSC 中的使用。
规格 | Neon NxT 电转染系统 | Neon 转染系统 |
---|---|---|
移液器类型 | 1 通道和 8 通道可选 | 仅 1 通道 |
电转体积 | 10 µL 或 100 µL | 10 µL 或 100 µL |
电转缓冲液体积* | 2 mL | 3 mL |
吸头连接技术 | ClipTip 技术 | 摩擦 |
电脉冲 | 1-10 | 1-10 |
脉冲持续时间 | 1-100 ms | 1-100 ms |
脉冲电压 | 500–2,500 V | 500–2,500 V |
电弧检测 | 是 | 否 |
云连接 | 是 | 否 |
脉冲发生器尺寸** | 24.1 x 19.3 x 25.1 厘米(宽度x高度x深度) 11.9 lb (5.4 kg) | 24.1 x 22.6 x 34.5 厘米(宽度x高度x深度) 13.8 lb (6.25 kg) |
电缆管理功能*** | 是 | 否 |
触摸显示屏 | 8 英寸电容触摸屏 | 7 英寸触摸屏 |
电源额定值 | 100-240 VAC,270 W | 100-240 C,150 W |
* Neon NxT 电转染系统的缓冲液管配有 2 mL 液位指示器。
** Neon NxT 脉冲发生器可在不移动窗口的情况下从常规 BSC 中出入。
*** 多余电缆可使用方便安装的电缆架固定在 Neon NxT 系统后部。
图 6.Neon NxT 电转染系统和 Neon 转染系统的性能。性能评估通过使用 GFP 质粒 DNA 或 GFP mRNA 转染不同的哺乳动物细胞株来进行。(A) 报告的 GFP 质粒 DNA 转染效率为 GFP 阳性细胞的百分比。(B) 使用 GFP 质粒 DNA 转染后的细胞存活率。(C) 报告的 GFP mRNA 转染效率为 GFP 阳性细胞的百分比。(D) 使用 GFP mRNA 转染后的细胞存活率。
用于符合GMP 要求细胞治疗产品生产的封闭式、可放大电转染系统 Xenon 系统的工艺和方案兼容 Invitrogen Neon 转染系统,有助于从研究到工艺开发至一次最多 25 mL 商业生产规模。
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