Gibco Geneticin通常被称为 G418 或 G-418，是一种与庆大霉素相关的氨基糖苷类，通常用作真核细胞的筛选试剂。作为硫酸新霉素的类似物，它可以干扰真核细胞中的 80S 核糖体的功能和蛋白合成。 

常见哺乳动物表达载体所用的显性抗性基因 (neor) 包含源自转座子 Tn601 (903) 或 Tn5 中的元件。在含有Geneticin筛选试剂的培养基中培养时，可在10至14天内形成表达这些抗性标记的稳定哺乳动物细胞集落。

您的G-418 里有什么？

为保证有效，筛选试剂必须可靠、高纯度且品质稳定。 近二十年来，Gibco Geneticin被认为是黄金标准，是唯一一款能为您的哺乳动物细胞培养提供这些品质的 G-418 试剂。

与其他生产商的 G-418 产品相比，Gibco Geneticin具有更高的纯度，因此，您可以使用更少的产品，并产生更大的选择压力，同时将污染物的毒性降至最低。

在评估 G-418 产品时，考虑的不仅仅是效力。还需考虑纯度和工作范围。将这三个特征综合起来，才能真正评估 G-418 的有效性。

纯度。根据HPLC测定，Gibco Geneticin 筛选试剂的纯度始终超过 90%——远高于其他任何供应商。 这意味着：

  • 与其他 G-418 产品相比，可使用浓度低 15-30% 的 Geneticin 试剂获得相当的筛选结果。
  • 使用 Geneticin 而非低纯度的 G-418 产品时，存活的克隆集落可能会更快地出现，细胞可能看起来更健康。
效力。作为描述性术语，效力通常用作纯度的同义词，但 QC 数据中报告的效力实际上与纯度无关。  效力值是细菌生长抑制的衡量指标。

  • 庆大霉素通常可以污染G-418 制剂，这会增加细菌检测的效力，但不会影响哺乳动物细胞筛选性。
  • 不纯的 G-418 中的其他细菌污染物可能对哺乳动物细胞有毒，从而降低 ED 50 值。

因此，比较不同供应商之间的效力值不是哺乳动物细胞筛选的相关规范。

ED50 测定。这是真核生长筛选性（参考 NIH3T3 细胞测定）的真正衡量指标。 较高的纯度通常意味着较高的 ED50 值。

  • 有毒杂质会降低 ED50 值，这意味着抗生素选择的工作范围更窄。 
  • 供应商稳定的 ED 50 可确保在哺乳动物细胞培养应用中各批次的性能可重现性。 


这意味着，在购买新批次的 Geneticin 时，无需针对理想的抗生素浓度重新优化（假定培养基没有其他改变）。如果候选 G-418 供应商的不同批次的 ED 50 范围很广，您可能需要针对每批产品重新优化。Geneticin 批次间一致性非常高，您不会发现批次间的选择性能有何差异。

纯度

纯度。根据HPLC测定，Gibco Geneticin 筛选试剂的纯度始终超过 90%——远高于其他任何供应商。 这意味着：

  • 与其他 G-418 产品相比，可使用浓度低 15-30% 的 Geneticin 试剂获得相当的筛选结果。
  • 使用 Geneticin 而非低纯度的 G-418 产品时，存活的克隆集落可能会更快地出现，细胞可能看起来更健康。
效力
效力。作为描述性术语，效力通常用作纯度的同义词，但 QC 数据中报告的效力实际上与纯度无关。  效力值是细菌生长抑制的衡量指标。

  • 庆大霉素通常可以污染G-418 制剂，这会增加细菌检测的效力，但不会影响哺乳动物细胞筛选性。
  • 不纯的 G-418 中的其他细菌污染物可能对哺乳动物细胞有毒，从而降低 ED 50 值。

因此，比较不同供应商之间的效力值不是哺乳动物细胞筛选的相关规范。
ED50 测定

ED50 测定。这是真核生长筛选性（参考 NIH3T3 细胞测定）的真正衡量指标。 较高的纯度通常意味着较高的 ED50 值。

  • 有毒杂质会降低 ED50 值，这意味着抗生素选择的工作范围更窄。 
  • 供应商稳定的 ED 50 可确保在哺乳动物细胞培养应用中各批次的性能可重现性。 


这意味着，在购买新批次的 Geneticin 时，无需针对理想的抗生素浓度重新优化（假定培养基没有其他改变）。如果候选 G-418 供应商的不同批次的 ED 50 范围很广，您可能需要针对每批产品重新优化。Geneticin 批次间一致性非常高，您不会发现批次间的选择性能有何差异。

表1.Geneticin 与候选 G-418 供应商规范对比。

规格
Invitrogen
供应商 A
供应商 B
Geneticin 优势
纯度 (HPLC)
>90-93%
66-75%   65-82%纯度明显更高
声称的效力 (µg/mg)
718-735
712-724
673-735
更严格的效力测定
重新测试时的效力 (µg/mg)
718-735
640-659
621-677
实际效力始终较高
ED50 测定 (µg/ml)
2450-2700
1350-3100
600-2350
可靠的批次间筛选


表1.根据 Invitrogen 的 Geneticin 原材料 QC 实验方案，分析了两个不同供应商的多个 G-418 批次。据观察，使用供应商 A 和供应商 B 的 G-418 获得的结果中所有测量参数都有很大差异，包括实际效力与所提供产品文献中报告的值不一致。 重新测试的效力值与其他供应商声称的值存在差异可能是因为 G-418 参考批次和测定程序存在差异。

图1.Geneticin 的纯度超过其他供应商的 G-418。



图1.Geneticin 与供应商 A 和供应商 B 的选定批次 G-418 的 HPLC 数据对比。根据在Clinical Chem中发布的程序对样品进行制备和分析。(1978)，第24卷，第11号，第1940页。