成功转染的第一步是为您的应用选择合适的转染试剂。可能需要进一步优化。下表将帮助您解决其中一些重要问题,从而让您轻松获得优异的转染结果。

有助于取得成功的转染技术

注意事项
说明
在有血清的情况下转染
  • 血清一度被认为会降低转染效率,但只要 DNA-阳离子脂质体试剂复合物在没有血清的情况下形成,转染过程中就可以有血清存在。一些血清蛋白会妨碍复合物的形成。
  • 在有血清的情况下,阳离子脂质体试剂和 DNA 的合适用量可能会发生变化;因此,如果要在转染培养基中加入血清,需要对含有血清的转染条件进行优化。
  • 大多数细胞在无血清培养基中都能保持健康数小时。
培养基中的抗生素
  • 阳离子脂质体试剂可提高细胞渗透性。这会增加递送到细胞内的抗生素量,进而产生细胞毒性。转染效率可能因此降低。因此,请勿在转染培养基中使用抗生素。
  • 将细胞铺板进行转染时,应避免使用抗生素。这样可降低在转染前冲洗细胞的需求。
  • 要实现稳定转染,请勿在选择性培养基中使用青霉素和链霉素,因为这些抗生素是 Geneticin® 选择性抗生素的竞争性抑制剂。
  • 创建稳定细胞系时,至少需要72小时来让细胞表达抗性基因,然后再添加选择性抗生素。
  • 如果使用无血清培养基,则抗生素用量要少于含血清培养基中的抗生素用量,以保持细胞健康。
细胞维持和培养物进化
  • 要获得理想的转染结果,请遵循常规的传代培养程序。
  • 每周进行一次或两次稀释传代培养,使其在下一次传代之前近乎汇合。
  • 不要让细胞保持汇合超过24小时。
  • 细胞培养物在实验室中经过长年累月的进化,转染相关的细胞行为也会随之变化。解冻一小瓶新细胞可恢复转染活性。
细胞铺板密度
  • 转染的最佳细胞密度因不同细胞类型或应用而异。对于贴壁细胞,转染时汇合度为 70% 至 90%,或细胞密度为 5 × 105 至 2 × 106 个悬浮细胞/mL,通常会产生良好的结果。
  • 确保细胞在转染时未完全汇合或处于固定相。
  • 由于转染效率对细胞培养的汇合度很敏感,因此所有实验均应遵守标准接种方案。
  • 在某些情况下,铺板细胞数量越多,转染活性越高。
DNA 质量
  • 高质量的完整质粒 DNA 对于实现高效转染至关重要。
  • Life Technologies 提供一系列核酸纯化试剂盒,名为
    PureLink™ HiPure 纯化试剂盒(小量、中量、大量、超大量和宏量),这些试剂盒可提供用于转染的高质量 DNA。请参阅 PureLink™ 质粒纯化试剂盒完整列表。
  • 利用氯化铯显带也可获得高纯 DNA,但耗时费力。