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系统性诱变

众所周知,位点饱和诱变使用指定位置上编码所有 19 个非野生型氨基酸的序列系统地替换野生型氨基酸编码序列。位点饱和诱变(也称顺序置换)与功能强大的筛选方法相结合是确定氨基酸取代,满足蛋白质工程目标最系统的突变方法。

一旦确定有益取代的变体,即可使用 GeneArt™ 组合文库服务创建用于更具针对性的定向进化实验的材料,从而进一步优化蛋白。

开始您的项目

请下载 GeneArt 位点饱和诱变定制服务需求表 ,提交项目信息。为了保护数据传输安全,请在我们的客户门户网站注册。

有关此项服务或订购过程的更多信息,请联系 geneartsupport@thermofisher.com

案例研究:RNA 聚合酶的功能定位(客户示例)

詹氏甲烷球菌 RNA 聚合酶亚基 mjA´ 的桥螺旋区分析

为了确定结构变化对 RNA 聚合酶活性的影响,Tan 等表征了 mjA´ 亚基突变体的功能特性。GeneArt 位点饱和诱变服务产生了一部分突变体。

获得的单点突变体的活性测试表明,其具有广泛的不同表型(见下图),包括一些活性比野生型高的高活性变体。这些接受了进一步调查。

更多详细信息请点击此处,从原文中查找。

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位点饱和诱变的选项

我们为序列置换提供了多种选择,以适应广泛的研究需求。您可以选择以一个或多个密码子创建变体,单独或合并接收构建体。当评估大多数可能的 19 种非野生型氨基酸足够时,我们还为您提供 GeneArt™ Site-Saturation Mutagenesis Average 16 和 GeneArt™ Site-Saturation Mutagenesis Minimum 16 个性化克隆服务,每个位置编码 16 个或最低 16 个取代氨基酸。

  • 将变体构建体亚克隆到您选择的载体中
一个位置上的 GeneArt™ 位点饱和诱变池
  • 一个密码子位置上的所有 19 个非野生型变体的混合物
  • 以混合甘油储备液的形式提供

所有位置的 GeneArt™ 位点饱和诱变池
  • 不止一个密码子位置的所有 19 个非野生型变体的混合物
  • 以混合甘油储备液的形式提供
GeneArt™ 位点饱和诱变平均 16 个
  • 每个位置平均有 16 个不同的非野生型氨基酸
  • 以单个甘油储备液的形式提供
GeneArt™ Site-Saturation Mutagenesis Minimum 16
  • 每个位置上至少有 16 个不同的非野生型氨基酸
  • 以单个甘油储备液的形式提供
GeneArt™ Site-Saturation Mutagenesis 19
  • 每个位置上共有 19 个不同的非野生型氨基酸
  • 以单个甘油储备液的形式提供
  • 单独提供的构建体经 100% 序列验证
  • 批量测定合并构建体的序列,验证指定位置的核苷酸含量是否下降,未突变区域是否完整
  • 识别有益或有害的氨基酸取代
  • 增加亲和力、特异性、活性、热稳定性、去污剂耐受性等。
  • 改变底物特异性或对映选择性
  • 减少两个相关蛋白之间的同源性(避免 IP 问题)
  • 识别活性位点或受体结合位点
  • 系统识别有益的氨基酸取代—检查每个位置上每个可能的变体
  • 不需要蛋白结构信息,但其可能有用
  • 筛选的变体量更少—当所有克隆使用单独的试管交付时,无需过度采样
  • 快速交付时间—快速推动您的项目进程
  • 极高成本效益
  • 单独提供的构建体经 100% 序列验证
  • 批量测定合并构建体的序列,验证指定位置的核苷酸含量是否下降,未突变区域是否完整
  • 识别有益或有害的氨基酸取代
  • 增加亲和力、特异性、活性、热稳定性、去污剂耐受性等。
  • 改变底物特异性或对映选择性
  • 减少两个相关蛋白之间的同源性(避免 IP 问题)
  • 识别活性位点或受体结合位点
  • 系统识别有益的氨基酸取代—检查每个位置上每个可能的变体
  • 不需要蛋白结构信息,但其可能有用
  • 筛选的变体量更少—当所有克隆使用单独的试管交付时,无需过度采样
  • 快速交付时间—快速推动您的项目进程
  • 极高成本效益

仅供科研使用,不可用于诊断目的。

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