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定向TOPO克隆利用5分钟的连接反应,按5´→3´方向将平末端PCR产物直接克隆到表达载体中,从而避免了亚克隆步骤,且节省了时间。
定向TOPO克隆载体的5´端为单链GTGG突出端,3´端为平末端。 The four-nucleotide overhang invades the double-strand DNA of the PCR product and anneals to the CACC sequence that you place in your 5´ primer. 随后,拓扑异构酶 I 按正确的方向连接 PCR 产物。
使用定向TOPO克隆试剂盒,您可以:
图1: 将人开放阅读框定向克隆至pcDNA 3.1 D/VS- His- TOPO载体内。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。