酶标仪原理

普通光吸收酶标仪的工作原理主要基于光电比色法，也称为分光光度计。其基本原理是利用光源发出的光波，经过滤光片或光栅变成一束单色光，然后进入微孔板中的待测样品中。当样品中的分子吸收特定波长的光时，会根据其浓度产生不同的吸光值。酶标仪通过检测这些吸光值来定量分析样品中的成分。

普通光吸收酶标仪的核心功能是利用酶联免疫技术，通过抗原和抗体的特异性反应进行检测。具体来说，酶标仪将抗原或抗体与酶结合形成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留了免疫活性，又保留了酶的活性。当酶标抗原或抗体与固相载体上的相应抗原或抗体发生特异反应并结合后，通过洗涤的方法将未结合的物质去除，从而形成稳定的抗原-抗体-酶复合物。然后，酶催化底物反应产生可检测的信号，如颜色变化或荧光强度，通过测量这些信号来定量分析样品中的目标分子。

此外，酶标仪可以进行多种检测模式，包括吸光度（Abs）、荧光强度（FI）、时间分辨荧光（TRF）、Alpha和化学发光（Lum）等。这些检测模式使得酶标仪在生物医学研究、临床诊断、药物筛选和食品安全监测等领域具有广泛的应用。

酶联免疫技术（ELISA）在酶标仪中的应用机制主要包括以下几个详细步骤：

1. 固相载体的准备：首先，将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体。这一步骤确保抗体能够固定在载体表面，并保持其免疫活性。
2. 样品处理：将待检样本加入固相载体，使其与表面吸附的抗体或抗原发生反应。如果检测的是抗原，受检抗原和酶标抗原会竞争与固相抗体结合。
3. 洗涤：反应完成后，需要进行洗涤步骤，以去除未结合的物质。这一步骤是确保只有特异性结合的复合物留在固相载体上。
4. 加入酶标抗体：随后，加入酶标记的抗体（如酶标抗抗体），使其与目标抗原-抗体复合物结合。酶标抗体也保留了其免疫活性和酶的活性。
5. 显色反应：加入酶促底物，酶催化底物发生显色反应。通过观察显色反应的程度，可以定量分析待测物质的含量。
6. 信号检测：最后，使用酶标仪检测显色反应产生的信号。酶标仪通过测量吸光度来定量分析样品中的目标物质。

• 工作原理：吸光度检测是通过测量样品在特定波长下的光吸收值来定量分析样品中的生物分子含量。当光通过样品时，样品会吸收一定量的光能量，剩余的光能量被检测器测量，从而计算出样品的吸光度值。
• 应用场景：吸光度检测广泛应用于酶联免疫吸附测定（ELISA）技术中，用于测定核酸、蛋白质等生物分子的浓度。此外，它还用于细胞增殖和毒性检测等生物学研究。

     2. 荧光强度检测：

• 工作原理：荧光强度检测是基于样品中荧光物质的浓度与其发出的荧光强度成正比的原理。通过测量荧光信号的强度，可以定量分析样品中的目标分子含量。
• 应用场景：荧光强度检测在生物学研究中应用广泛，包括生物大分子定量、酶活性分析、荧光免疫分析、细胞学分析（如细胞增殖、细胞毒理、细胞吸附等）和分子间相互作用研究。

     3. 时间分辨荧光（TRF）：

• 工作原理：时间分辨荧光检测利用荧光共振能量传递（FRET）技术，通过测量不同时间延迟下的荧光信号强度来提高检测灵敏度和特异性。这种方法可以减少背景信号的干扰，提高检测的准确性。
• 应用场景：时间分辨荧光检测常用于高灵敏度的生物分子定量分析，如蛋白质相互作用研究和核酸杂交实验。

     4. Alpha检测：

• 工作原理：Alpha技术，即Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay (Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay)，使用供体微珠和受体微珠。供体微珠包含光敏剂，在680nm激光照射下，光敏剂将氧分子转化为单线态氧。如果受体微珠在附近（<200nm），单线态氧会触发受体微珠上的化学反应，最终产生光信号。这个过程基于微珠之间的接近程度来检测相互作用‌。
• 应用场景：Alpha技术具有高灵敏度和免洗板的优点，适用于药物发现阶段的高通量筛选。该技术已经得到国内外药物研发企业和科研院所的广泛认可。Alpha技术家族包括AlphaScreen和AlphaLISA，后者特别适用于血清/血浆样品的检测，能够有效避免荧光背景干扰。

     5. 化学发光检测：

• 工作原理：化学发光检测是基于化学发光反应和酶标技术的结合。通过检测化学发光信号来定量分析样本中的特定物质。发光物质在反应剂激发下生成激发态中间体，直接标记在抗原或抗体上，或酶作用于发光底物。
• 应用场景：化学发光检测广泛应用于生命科学领域（报告基因检测），农业中的农药残留检测和食品安全检测。此外，它还用于临床实验室中的各种生物标志物的定量分析。结合荧光的生物发光共振能量转移（BRET），可进行细胞内实时蛋白质-蛋白质相互作用检测。