转染是指通过非病毒方法将核酸引入细胞的过程。转导是指通过病毒载体将外源 DNA 引入另一个细胞的过程。这些都是将外源基因引入宿主细胞的常用工具。验证遗传物质成功引入细胞的常用方法是测定蛋白表达。通常采用蛋白质免疫印迹(Western Blot)或免疫染色进行,但 TaqMan® 蛋白定量可提供更快、更灵敏且定量水平更高的替代方法。

近期报告 (1–3) 显示,通过引入 转录因子 Oct4、Sox2、cMyc、Lin28 和 Nanog,可生成诱导多能干细胞。TaqMan® 蛋白定量是测定细胞中 Oct4、Sox2、Klf4、Lin28 和 Nanog 蛋白表达水平的理想工具。与常见的蛋白分析技术(如蛋白质免疫印迹(Western Blot)和免疫染色)不同,TaqMan® 蛋白定量不需要对细胞进行固定或染色,也不需要运行和转移凝胶。

TaqMan® 蛋白定量为 蛋白质免疫印迹 (Western Blot)或免疫染色提供了一种更快&更灵敏且可定量的替代方法

在本实验中,用表达 OCT4、SOX2、KLF4 和 RFP(红色荧光蛋白)的载体转导人真皮成纤维细胞。转导后 24 小时可观察到 RFP 表达,但转导后 4 天无法再以荧光显微镜检测。而使用 TaqMan® 蛋白定量可在转导后 24 小时和 4 天观察到 OCT4、SOX2 和 KLF4 蛋白表达。

参考文献

  1. Takahashi K, and Yamanaka S. (2006).通过限定因子从小鼠胚胎和成年成纤维细胞培养物中诱导多能干细胞.Cell 126: 663–676.
  2. Yu J et. al.(2007).来自人体细胞的诱导多能干细胞系.Science 318:1917–1920.
  3. Takahashi K et. al.(2007).通过限定因子从成年人成纤维细胞中诱导多能干细胞.Cell 131:861–872.
  4. Ruff D. (2011) 定量 PCR 蛋白定量在重编程过程中的应用.Stem Cells Dev.2011 Apr 8.[印刷前的电子出版物]。PMID: 21476854.