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转染是指通过非病毒方法将核酸引入细胞的过程。转导是指通过病毒载体将外源 DNA 引入另一个细胞的过程。这些都是将外源基因引入宿主细胞的常用工具。验证遗传物质成功引入细胞的常用方法是测定蛋白表达。通常采用蛋白质免疫印迹(Western Blot)或免疫染色进行,但 TaqMan® 蛋白定量可提供更快、更灵敏且定量水平更高的替代方法。
近期报告 (1–3) 显示,通过引入 转录因子 Oct4、Sox2、cMyc、Lin28 和 Nanog,可生成诱导多能干细胞。TaqMan® 蛋白定量是测定细胞中 Oct4、Sox2、Klf4、Lin28 和 Nanog 蛋白表达水平的理想工具。与常见的蛋白分析技术(如蛋白质免疫印迹(Western Blot)和免疫染色)不同,TaqMan® 蛋白定量不需要对细胞进行固定或染色,也不需要运行和转移凝胶。
在本实验中,用表达 OCT4、SOX2、KLF4 和 RFP(红色荧光蛋白)的载体转导人真皮成纤维细胞。转导后 24 小时可观察到 RFP 表达,但转导后 4 天无法再以荧光显微镜检测。而使用 TaqMan® 蛋白定量可在转导后 24 小时和 4 天观察到 OCT4、SOX2 和 KLF4 蛋白表达。