消除常见的 TaqMan 误解

真相 #1：TaqMan 测定可用于任何 qPCR 仪器。

定量 PCR 可以指实时或数字 PCR 实验。有许多不同型号的 qPCR 仪器可供选择。每个型号都必须具有激发荧光染料的激发源和检测荧光发射的检测器。激发和发射滤光片支持不同类型的染料，并且这些滤光片的数量因选择的 qPCR 仪器型号而异。此外，每个型号都必须有 1 个固定或可互换的加热模块。关于数字 PCR，在大多数情况下，需要将热循环仪与读数仪/成像仪部件进行分离。

使用 TaqMan 探针的 5’ 核酸酶测定是实时或数字 PCR 中应用较广泛的检测方法之一，有数万篇同行评审的出版物。许多出版物表明，TaqMan 测定和试剂可用于 Applied Biosystems qPCR 仪器之外的仪器，包括 Bio-Rad、Roche 和 Agilent qPCR 系统。 

真相 #2：高特异性是 TaqMan 测定的标志性特征。

SYBR™ 和 TaqMan 检测的机制存在本质区别。SYBR 染色剂是一种嵌入染料，可与双链 DNA (dsDNA) 结合，并用于检测 PCR 过程中积聚的 PCR 产物。为了区分特异性产物和非特异性产物，PCR 后需要进行熔解曲线分析。

另一方面，TaqMan 测定利用序列特异性的荧光标记探针来检测 PCR 过程中积聚的靶标。由于 TaqMan 探针的序列特异性以及生成信号所需的 3 个近距离结合事件，TaqMan 检测方法具有更高的特异性。

真相 #3：TaqMan 测定易于订购和使用，可供任何经验水平的科学家使用。

TaqMan 测定有超过 1000 万种预设计的测定可供选择，包含全面的产品系列，可用于基因表达、非编码 RNA、拷贝数变异、SNP 基因分型、突变检测和蛋白质表达分析。预设计的 TaqMan 测定不需要优化或验证，保证有效*，并适合所有用户。只需将样本加入预设计的 TaqMan 测定试剂和预混液中，即可开始使用。

事实上，通过我们的网站搜索和购买预设计的 TaqMan 测定从未如此简单。访问实时荧光定量 PCR 测定订购页面：thermofisher.com/ordertaqman。只需选择物种，输入您感兴趣的基因，然后选择测定即可。如果您想了解有关特定测定的更多信息或了解哪种测定具有更好的覆盖度，只需点击鼠标即可查看此信息。

真相 #4：我们保证*所有预设计 TaqMan 测定的性能。

我们拥有成熟的专业知识和多年的测定设计和生产经验。每种测定均使用我们先进的生物信息学设计流程进行设计，该流程最初通过实验室测试进行了 18,000 多次测定验证，并已通过数千份同行评审出版物进一步验证。

我们的基因表达、非编码 RNA、SNP 基因分型、拷贝数、药物代谢酶、突变检测和蛋白质测定均可进行高质量和高性能检测。如果 TaqMan 测定的性能不符合保证的规格，我们将免费更换或者将费用记入您的帐户*。更多详细信息，请访问 thermofisher.com/taqmanguarantee。

您知道吗？

PCR 效率是实时荧光定量 PCR 测定设计和优化的关键因素。通过标准曲线（由一系列稀释靶标模板生成）获得效率值。此效率值是总体反应“正常”的标志。通过计算标准曲线的斜率确定效率相当简单。或者，也可以使用我们更新的 Applied Biosystems™ 实时荧光定量 PCR 系统上的软件计算效率。然而，如果制备稀释系列时发生错误，可能会影响 PCR 效率的准确性。

真相 #5：Applied Biosystems 是值得信赖的实时荧光定量 PCR品牌，我们 进行了简化，TaqMan 方法已经容易理解。

Applied Biosystems™ 品牌拥有 20 多年的实时荧光定量 PCR 经验，TaqMan 测定在金标准的性能、质量和内容方面处于前列。TaqMan 测定利用长期积累的引物和探针设计方面的生物信息学专业知识进行开发，并在各种应用和集成平台上进行了严格测试，为您提供可靠且稳健的实时荧光定量 PCR 解决方案。我们意识到，TaqMan 测定入门可能比较困难，因此，我们提供培训、选择和技术支持工具来指导您完成每一步操作，使您能够轻松上手。

真相 #6：时间也就是金钱，预设计 TaqMan 测定经过优化，每次使用都能获得有效结果。

如果考虑到验证测定的耗时以及试剂成本，使用 TaqMan 测定节省的时间实际上可以节省大量成本。请记住时间就是金钱，验证 SYBR Green 测定（即设计、测试、重新设计等）或经验不足的供应商提供的测定需要大量时间和试剂。您购买的每一种 TaqMan 测定都可以获得我们的全套售后服务。

TaqMan 测定包含在 TaqMan 测定 qPCR 保证计划中。如果您遇到问题，只需将问题报告给我们的技术支持团队，他们将帮助您确定问题并按需更换测定。访问 thermofisher.com/taqmanguarantee 了解完整详情。

真相 #7：TaqMan 测定符合 MIQE 作者提出的建议。

MIQE 或实时荧光定量 PCR 实验出版物所需最小信息量，最初是由 Bustin 等人在 Clinical Chemistry（2009 年 4 月）中发表的一组指南，“描述了评估 qPCR 实验所需的最小信息量”。这些建议涵盖 qPCR 实验设计和分析的各个方面，以及与同事共享信息以确保透明度和可重现性的标准。

原始指南建议将引物序列添加到所有实时荧光定量 PCR 出版物中。然而，许多市售 qPCR 测定不包含引物/探针序列，因为这属于商业敏感信息。2011 年发布了该条款的修正案，澄清了引物序列披露的规定，其中规定“引物序列或扩增子上下游序列”应包括在内。

所有预设计的 TaqMan 测定均使用先进和专有的生物信息学流程进行设计，有助于确保靶标特异性、更高扩增效率以及无需优化的标准化运行条件。为了符合现行 MIQE 指南，TaqMan 测定随附上下游序列、探针位置以及（如适用）测定所跨越的外显子-外显子边界。每种 TaqMan 测定设计都具有独特的测定 ID 编号，可用作同事的参考，或者在出版物中使用以复制设计。