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PowerTrack SYBR Green 预混液
用于实时荧光定量 PCR 分析的简单易用和灵活的基因表达预混液
PowerTrack SYBR Green 预混液的特点包括：
- 双色示踪染料系统，用于指示移液发生的位置
- 广泛的引物 Tm 和引物浓度兼容性，只需少许优化即可提高 qPCR 反应设置的灵活性
- Ct 值在较宽的动态范围内具有出色的特异性和高度可重现性，提高了数据质量
- 与 SuperScript IV VILO 预混液逆转录兼容，提供快速、可重现的结果
- 采用 UNG/dUTP 配方，可防止残留 PCR 产物污染
- 兼容多种仪器
“这是一款很棒的产品，而且非常容易使用。实验室里的每个人都很满意，认为产品大大减少了实验操作时间。”
Tariq M. Haqqi, M.Phil，博士，教授
解剖 & 神经生物系
Northeast Ohio Medical University
示踪染料有助于减少移液错误
工作原理
PowerTrack SYBR Green 预混液包括一个双色染料示踪系统，可指示移液发生的位置。将黄色样本移液到含有蓝色预混液的孔中时，该孔会变为绿色。进行了广泛的测试，以验证示踪染料不会影响数据质量。
配方可实现出色的特异性和可重现性
PowerTrack SYBR Green 预混液是一种预配制、经过优化的通用 2 倍浓度预混液，适用于实时荧光定量 PCR。 其包含采用热启动机制的抗体介导 Taq DNA 聚合酶，可严格控制 Taq 酶的活化，并有助于防止聚合酶在低温下出现不利的过早活化，避免非特异性扩增。PowerTrack SYBR Green 预混液秉承 qPCR 领域 20 多年的创新精神与优异品质，旨在为您富有挑战性的实时荧光定量 PCR 应用提供出色的性能。
对 PowerTrack SYBR Green 预混液配合使用的 24 种不同引物组进行了评估，在 100% 的反应中获得了单一熔解曲线。但是使用其他供应商的几种预混液时，观察到部分相同靶标出现非特异性扩增，如图所示，熔解曲线中出现了多个峰（图1）。验证 SYBR Green 反应中的引物特异性对于确保数据质量和有效性至关重要 [1]。PowerTrack SYBR Green 预混液具有高度特异性，可缩短您的引物优化和重新设计时间，从而获得高质量的数据。
图 1.靶标特异性。使用 9 种不同的预混液，在 QuantStudio 5 Flex 实时荧光定量 PCR 系统上对 PGK1（磷酸甘油酸酯激酶1）、ARL1（ADP 核糖基化因子样蛋白 1）和 SNF8（液泡分选蛋白）靶标进行熔解曲线分析。在每种预混液制造商建议的循环条件下，将每种预混液应用于 6 个对数级连续稀释的通用人类参考 cDNA。使用测定 PGK1、ARL1 和 SNF8 运行 UHR cDNA。在 QuantStudio 5 384 孔模块实时荧光定量 PCR 仪器上重复进行 4 次 10 μL 反应，。几种竞争产品在熔解曲线分析时出现第二个峰，为非特异性产物扩增所致。
竞争产品 Q1：Qiagen QuantiNova SYBR® Green PCR 试剂盒；竞争产品 B：Bio-Rad SsoAdvanced™ Universal SYBR® Green Supermix；竞争产品 S：BioLine (Meridian Bioscience) SensiFAST™ SYBR® Lo-ROX 试剂盒；竞争产品 Q2：Qiagen QuantiFast SYBR Green PCR 试剂盒；竞争产品 QB：Quanta Biosciences PerfeCTa® SYBR® Green FastMix® 低 ROX 反应混合物；竞争产品 K：KAPA SYBR FAST qPCR 试剂盒，低 ROX；竞争产品 T：Takara TB Green® Premix Ex Taq™ II；竞争产品 P：ProMega GoTaq® qPCR 预混液。
PowerTrack SYBR Green 预混液轻松处理传统的高难度靶标
通过 5 个对数级连续稀释的 UHR cDNA 获得 PGK1 基因的扩增曲线。 PowerTrack SYBR Green 预混液可在较宽的动态浓度范围内提供精确的结果，表现为重复检测之间的曲线十分接近，并且 PCR 效率较高（图2）。
图 2. 根据实验方案，在具有 384 孔模块的 QuantStudio 5 实时荧光定量 PCR 系统上重复进行 4 次反应。 使用 60ºC 退火引物 Tm 进行 4 次 10 μL 反应。PGK1 = 高表达子；ARL1、IGF2 和 TCF25 = 中表达子。
出色的重现性
重现性是衡量实时荧光定量 PCR 数据质量的另一重要指标，且重现性经常会在低模板浓度时下降，而这又会加剧变异的影响。然而，使用多种靶标和 RT 试剂盒检测后，PowerTrack SYBR Green 预混液在较宽的动态范围内具有出色的的重现性（图 3）。在分析低丰度转录本和较小的倍数变化时，更精密的重现性可获得更大的统计学显著性。
图 3.数据重现性。根据每个预混液制造商的推荐实验方案，使用由 4 种不同逆转录 (RT) 试剂盒（SuperScript IV VILO、高容量 RNA 至 cDNA、iScript cDNA 合成和 Quantitect RT 试剂盒）生成的 UHR cDNA，对 6 种测定（PGK1、ARL1、SNF8、DF、GAPDH 和 Corf1 19）进行 4 次重复检测，此过程采用 6 倍连续稀释液、400 nM 引物浓度，所有检测在 QuantStudio 5 Flex 实时荧光定量 PCR 系统上完成。
兼容多种仪器
PowerTrack SYBR Green 预混液可在标准或快速循环模式下使用，并且兼容所有 Applied Biosystems 实时荧光定量 PCR 仪器。还兼容 Bio-Rad CFX96、CFX384 和 iQ5；Roche LightCycler 480；以及 Agilent Mx3005P 系统。 为确保获得较佳的结果，引物浓度应介于 300–800 nM 之间。
ROX 染料可提高数据精密度
我们的预混液中包含 ROX 染料，这是一种在 RT-qPCR 中使用的惰性参比染料。 ROX 染料可对所有样本的荧光进行归一化， 也可消除除数据中的荧光差异，如气泡引起的荧光差异。 Applied Biosystems 预混液包含专有的 ROX 染料，专门配置用于多种实时荧光定量 PCR 仪器，并且兼容多种仪器光源和滤光片组。
含有 UNG 可控制残留污染
常规进行 PCR 的实验室中的污染是许多研究人员关注的主要问题，也是大多数假阳性的来源。PowerTrack SYBR Green 预混液添加了 UNG 和 dUTP，可降解任何之前扩增的 PCR 产物，并且有助于预防后续 qPCR 反应的污染。利用热不稳定性 UNG 酶能够有效控制污染。
参考文献
1.Bustin SA, Benes V, Garson JA, Hellemans J, Huggett J, Kubista M, Mueller R, Nolan T, Pfaffl MW, Shipley GL, Vandesompele J, Wittwer CT.The MIQE guidelines: minimum information for publication of quantitative real-time PCR experiments.Clin Chem 2009 55(4):611-22.
仅供科研使用。不得用于诊断用途。