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沉降法是免疫共沉淀 (Co-IP) 的延伸，用于捕获和分离靶蛋白（即抗原）及其相关配体。基于标签的 IP 和沉降策略通过利用生物素化 His、GST、c-Myc 或 HA 标签诱饵蛋白的亲和树脂，使用"诱饵"蛋白而非抗体来捕获蛋白质相互作用靶标。

  • 选择更丰富——提供不同策略，可满足各种标记诱饵蛋白、洗脱条件和下游分析需求
  • 完整——试剂盒包括所有对照品和裂解、结合、洗涤和洗脱缓冲液
  • 快速——包括离心柱和收集管，可缩短实验方案时间并尽量减少样本处理操作
  • 灵活——采用可灵活调整的实验方案，方便按需扩大或缩小规模
 
 Pierce 生物素化蛋白相互作用沉降试剂盒EZ-Link 脱硫生物素化和沉降试剂盒Pierce c-Myc 标签 IP/Co-IP 试剂盒Pierce HA 标签 IP/Co-IP 剂盒Pierce GST 蛋白相互作用沉降试剂盒Pierce His 蛋白相互作用沉降试剂盒
靶标生物素化蛋白生物素化蛋白c-Myc 标签重组蛋白HA 标签重组蛋白GST 标签重组蛋白His 标签重组蛋白
基础微珠链霉素亲和素琼脂糖树脂高容量链霉素亲和素琼脂糖树脂抗 c-Myc 琼脂糖树脂抗 HA 琼脂糖谷胱甘肽琼脂糖钴螯合物琼脂糖树脂
结合容量1–3 mg/mL>10 mg/mL102 nmol/mL>60 nmol/mL8–10 mg/mL10–25 mg/mL
非特异性结合低低更低更低最低最低
洗脱条件低 pH (2.8) 缓冲液中等（游离生物素缓冲液）低 pH (2.0) 缓冲液非还原样本缓冲液100 mM 还原型谷胱甘肽250 mM 咪唑溶液
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细菌裂解液中 GST-HA 和 GST-c-Myc 免疫沉淀洗脱选项的有效性。

采用 Thermo Scientific Pierce HA IP/Co-IP 试剂盒和 c-Myc IP/Co-IP 试剂盒获得 IP 结果，分别应用了适当的阳性对照裂解液提供并推荐的 GST-HA 和 GST-c-Myc 洗脱选项。每个试剂盒均提供了洗脱组分。用洗脱缓冲液执行洗脱 #1；用 2X 非还原样本缓冲液执行洗脱 #2。

a-GST-Tag-Pull-Down
b-PolyHis-Tag-Pull-Down
泳道编号A. GST 标签沉降B. PolyHis 标签沉降
1表达 GST 标签 BIR2（诱饵蛋白）的大肠杆菌裂解液。表达 9xHis 标签野生型 Smac（诱饵蛋白）的大肠杆菌裂解液。
2来自泳道1中裂解液的流穿液在 4°C 下与固定化还原型谷胱甘肽载体结合1小时。来自泳道1中裂解液的流穿液在 4°C 下与固定化钴螯合物载体结合1小时。
3载体洗涤 #1。载体洗涤 #1。
4载体洗涤 #2。（未显示洗涤 3-5。）载体洗涤 #2。（未显示洗涤 3-5。）
5表达 9xHis 标签野生型 Smac（猎物蛋白）的大肠杆菌裂解液。表达 GST 标签 BIR2（猎物蛋白）的大肠杆菌裂解液。
6来自泳道5中裂解液的流穿液在 4°C 下与固定化诱饵蛋白相互作用1小时。来自泳道5中裂解液的流穿液在 4°C 下与固定化诱饵蛋白相互作用1小时。
7载体洗涤 #1。载体洗涤 #1。
8载体洗涤 #2。（未显示洗涤 3-5。）载体洗涤 #2。（未显示洗涤 3-5。）
9诱饵蛋白对照。按照泳道 1-8 中所述操作处理诱饵蛋白，随后洗脱。未添加猎物蛋白，仅添加结合缓冲液。诱饵蛋白对照。按照泳道 1-8 中所述操作处理诱饵蛋白，随后洗脱。未添加猎物蛋白，仅添加结合缓冲液。
10猎物蛋白对照。按照泳道 1-8 中所述操作处理猎物蛋白，随后洗脱。未添加诱饵蛋白，仅添加结合缓冲液。猎物蛋白对照。按照泳道 1-8 中所述操作处理猎物蛋白，随后洗脱。未添加诱饵蛋白，仅添加结合缓冲液。
11使用 100 mM 还原型谷胱甘肽从载体中洗脱诱饵蛋白:猎物蛋白复合物（在泳道 1-8 中制备）。蛋白质免疫印迹法确认在泳道9和11中观察到的次要谱带是 GST 标签 BIR2 的降解产物。使用 250 mM 咪唑从载体中洗脱诱饵蛋白:猎物蛋白复合物（在泳道 1-8 中制备）。

Resources

仅供科研使用，不可用于诊断目的。