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我们提供多种用于免疫沉淀 (IP) 和免疫共沉淀 (co-IP) 的试剂盒,可使用不同的方法从感兴趣的靶蛋白中捕获抗体(还能在某些情况下与蛋白质相互作用)。这些方法利用固定化蛋白 A/G 或活化载体(Aminolink 或 Glycolink),直接将抗体固定到基于琼脂糖的微珠上。
Pierce 经典 IP 试剂盒 | Pierce 交联 IP 试剂盒 | Pierce 直接 IP 试剂盒 | Pierce Glycolink IP 试剂盒 | Pierce Co-IP 试剂盒 | |
基础微珠 | 蛋白 A/G Plus,6% 琼脂糖 | 蛋白 A/G Plus,6% 琼脂糖 | Aminolink Plus,4% 琼脂糖 | Ultralink(聚丙烯酰胺/ 吖内酯共聚物) | Aminolink Plus,4% 琼脂糖 |
抗体与树脂共价结合 | 否 | 是 | 是 | 是 | 是 |
抗体正确定向 | 是 | 是 | 否 | 是 | 否 |
用抗原洗脱抗体 | 是 | 否 | 否 | 否 | 否 |
抗原相对回收率 | 最高 | 中 | 高 | 高 | 高 |
相互作用蛋白的共纯化 | 可能 | 可能 | 可能 | 可能 | 最佳 |
制备和样本处理时间 | <1 hr | 2–3 hr (min) | 4 hr (min) | < 5 hr (min) | 4 hr(手动操作时间) |
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根据产品说明,使用 10 µg 亲和纯化山羊抗 GFP 抗体和 Pierce 直接、经典和交联 免疫沉淀 (IP) 试剂盒执行免疫沉淀。使用免疫沉淀 (IP)/洗涤缓冲液制备细胞裂解液,并使用试剂盒随附的 Pierce 对照琼脂糖树脂进行预清洗。过夜孵育抗体、树脂和裂解液可形成免疫复合物。使用免疫沉淀 (IP) IP 裂解/洗涤缓冲液、1X 条件缓冲液洗涤树脂,并用洗脱缓冲液进行洗脱。进行分析时,向 4-20% tris-甘氨酸凝胶中添加 20% 洗脱样本、5% 细胞裂解液上样量 (Lysate) 和 10% 抗体上样量 (IgG),并使用 Imperial 蛋白染色剂进行染色。对于树脂对照品,进行蛋白沉淀时无需添加抗体。
使用 B-PER 细菌蛋白提取试剂提取出能够表达绿色荧光蛋白 (GFP) 融合的大肠杆菌细胞,然后使用多克隆山羊抗 GFP 抗体进行免疫沉淀。洗脱的免疫沉淀 (IP)产品使用 SDS-PAGE 分离并使用考马斯染料 GelCode Blue 染色试剂进行染色以检测总蛋白。泳道1显示使用交联 IP 试剂盒获得的单一产物。泳道2显示使用传统免疫沉淀 (IP)方法获得的多种抗原和抗体片段。MW 是分子量标记物。
纯化兔多克隆抗 STAT1 或兔多克隆抗 EGFR 经氧化处理并与 20 μL 树脂结合。在室温下将 A549 细胞裂解液 (0.5 mg) 与结合树脂一起孵育1小时。在 4–20% SDS-PAGE 凝胶上分离洗脱的蛋白质,将其转印到硝化纤维素膜上,并使用适当的抗体进行探测。采用 SuperSignal West Dura 化学发光底物与 CCD 成像仪(10秒暴露)进行检测。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。